本文關鍵詞：海洛因成癮大鼠背側海馬蛋白質組學分析及差異蛋白與成癮的相關性研究

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【摘要】：阿片類物質是指從罌粟中提取的天然阿片類生物堿以及體內外的衍生物,包括嗎啡、可待因、海洛因、哌替啶等。雖然阿片類物質在臨床上可用于鎮(zhèn)痛、心源性哮喘,止瀉和鎮(zhèn)咳等,但總體來說阿片類物質不良反應多且嚴重,尤其是多次應用易產生耐受性和依賴性,不僅極大程度上限制了其臨床應用,而且造成制毒販毒犯罪率明顯升高,肝炎、結核、艾滋病等多種傳染病廣泛傳播,這給個人、家庭和社會帶來了極大的危害,因此,探究阿片類物質成癮的機制,尋找有效的治療藥物和作用靶標成為當務之急。阿片類物質成癮的臨床癥狀主要有軀體依賴和精神依賴,軀體依賴是指機體對長期使用依賴性藥物所產生的一種適應狀態(tài),包括耐受性和停藥后的戒斷癥狀,精神依賴是伴隨藥物作用產生的滿足感或欣快感,在精神上驅使用藥者連續(xù)用藥,產生強烈的心理渴求和強迫性用藥行為。軀體依賴可用美沙酮進行脫毒治療,而精神依賴目前仍無有效的治療方法,因此復吸率極高,故精神依賴是藥物濫用的關鍵原因,也是阿片成癮機理研究的核心問題。阿片類物質軀體依賴主要和藍斑核相關,而精神依賴主要與邊緣系統(tǒng)有關,包括前額葉皮層,中腦腹側被蓋區(qū),伏隔核,弓狀核,杏仁核和海馬等,其中海馬參與環(huán)境線索的存貯和讀取過程,海馬功能失調與藥物成癮過程密切相關,因此成為我們的關注焦點。復吸是指成癮患者藥物戒斷一段時間后,在一些相關因素刺激下渴望感受藥物所帶來的效應而重新恢復用藥的行為。復吸是藥物成癮的重要特征,也是困擾成癮治療的首要問題,一般來說,患者生理脫毒后的復吸主要與以下三個因素有關,再次接觸成癮藥物,再次暴露于伴藥環(huán)境或線索和應激事件,其中暴露于伴藥環(huán)境是誘發(fā)成癮者或動物復吸的主要因素。藥物成癮是一種以不計后果的強迫用藥為特征的異常行為,這種異常行為在反復用藥后逐漸發(fā)生,并在停藥后持續(xù)相當長的時間,研究表明,反復用藥可改變相關腦區(qū)的基因或蛋白表達水平或類型,這些改變不但影響了神經(jīng)元的功能,也影響了相關神經(jīng)環(huán)路,最終導致藥物成癮的異常行為,因此我們采用蛋白質組學分析了海洛因自身給藥(self-administration, SA)后背側海馬(dorsal hippocampus, DH)的蛋白表達變化,然后選取相關差異蛋白,采用大鼠海洛因自身給藥模型研究DH微注射相關蛋白抑制劑是否會影響大鼠的覓藥行為。目的：應用蛋白質組學分析海洛因成癮后DH的蛋白表達變化,采用大鼠海洛因自身給藥模型研究DH微注射Hsp70或ROCK抑制劑是否會影響大鼠的海洛因渴求和環(huán)境誘導的復吸。方法：1)大鼠自身給藥模型(FR1)：大鼠隨機分為兩組,生理鹽水組和海洛因組。行為學實驗共進行12天,每天3h,運行程序為FR=1,前6天每次有效鼻觸給予海洛因100μg/kg,后6天減為50μg/kg,每次實驗達到3h或注射30次后結束,動物放回飼養(yǎng)籠。訓練結束后24h處死大鼠,取DH做蛋白質組學及western blot分析。2)大鼠自身給藥模型(PR)：實驗第1-3天使用FRl程序訓練動物,每天3h,第4-6天使用FR2程序訓練3h,從第7天開始變更為FR5程序,每天3h,待海洛因的攝取達到穩(wěn)定后(連續(xù)三天動物的給藥次數(shù)波動小于10%)進入PR程序。PR程序穩(wěn)定后(連續(xù)三天的藥物注射次數(shù)波動小于2次)連續(xù)進行6天,每天6h,溶劑和PES/Y-27632的核團注射在PR程序穩(wěn)定后開始,每天PR訓練前注射。隨后動物進入兩周的戒斷期。兩周后動物放回原訓練環(huán)境,觀察環(huán)境誘導的復吸,測試前核團注射溶劑和PES/Y-27632。實驗結束后取腦做尼氏染色,排除注射位置不正確的大鼠數(shù)據(jù)。結果：蛋白質組學鑒定出的3959個蛋白中共有421個差異蛋白,其中291個為已知蛋白。這些差異蛋白與能量代謝、氧化應激反應、蛋白降解和修飾、突觸功能和信號轉導等重要的生命過程密切相關。經(jīng)過western blot驗證,DH的Hsp70和Rho B表達在海洛因成癮后顯著上調。于DH微泵注射相應劑量的溶劑(30%DMSO)和PES15min后開始PR程序, two-way ANOVA顯示,F1.85=4.8,P0.05,說明給予PES組的Break Point顯著低于溶劑組,同樣的,微泵注射相應劑量的溶劑和PES15min后測試環(huán)境誘導的復吸,結果顯示溶劑組和給予PES組動物的有效鼻觸次數(shù)無明顯差異。于DH微泵注射相應劑量的溶劑(PBS)和Y-27632 30min后動物開始PR程序,兩組動物的Break Point無明顯差異,而微泵注射相應劑量的溶劑和Y-27632 30min后測試環(huán)境誘導的復吸,結果顯示給予Y-27632組大鼠在環(huán)境誘導的復吸中其有效鼻觸次數(shù)明顯低于溶劑組。結論：1.海洛因自身給藥可以導致大鼠DH 421個蛋白表達變化,涉及18條信號通路,與能量代謝、氧化應激反應、蛋白降解和修飾、突觸功能和信號轉導等重要的生命過程密切相關。2.海洛因成癮誘導大鼠背側海馬的Hsp70和Rho B表達。3.抑制背側海馬Hsp70可以顯著降低大鼠對海洛因的渴求,但不影響環(huán)境誘導的復吸。4.抑制背側海馬Rho B信號通路對大鼠的海洛因渴求無明顯影響,但可顯著抑制環(huán)境誘導的復吸。
【關鍵詞】：蛋白質組學 背側海馬 自身給藥 熱休克蛋白70 Rho B
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R749.6
【目錄】：

• 英文縮略詞表6-8
• 中文摘要8-11
• 英文摘要11-15
• 前言15-21
• 材料與方法21-35
• 實驗結果35-46
• 討論46-57
• 結論57
• 結語57-59
• 參考文獻59-72
• 附錄 綜述72-83
• 參考文獻80-83
• 在讀期間發(fā)表的文章83-84
• 致謝84

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本文編號：931512