發(fā)布時(shí)間：2017-09-18 19:16

  本文關(guān)鍵詞：CEND1在阿爾茨海默病致病過程中的作用與機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 阿爾茨海默病 CDK5 CEND1 細(xì)胞周期 磷酸化 糖基化

【摘要】：阿爾茨海默病(Alzheimer disease, AD)是一種以漸進(jìn)性記憶力喪失和認(rèn)知障礙為主要癥狀的神經(jīng)退行性疾病,在此過程中會(huì)伴隨神經(jīng)元的大量死亡,該疾病嚴(yán)重影響人類健康。由于神經(jīng)元的不可再生性,因此目前還沒有有效的治愈AD的方法。因此研究AD致病過程中更早期的細(xì)胞紊亂變化,對(duì)于預(yù)防和干預(yù)神經(jīng)元凋亡具有重要的意義。最近研究發(fā)現(xiàn),AD病人大腦中分裂后期的神經(jīng)元重新進(jìn)入細(xì)胞周期,這些細(xì)胞周期重新激活的神經(jīng)元并不能分裂而是開啟了細(xì)胞凋亡的途徑。我們稱之為Cell Cycle Related Neuronal Death(CRND)。而神經(jīng)元細(xì)胞周期的紊亂是目前已知的關(guān)于AD最早期的細(xì)胞功能紊亂。研究了解在AD病理?xiàng)l件下成熟神經(jīng)元的細(xì)胞周期是如何被重新激活及其誘導(dǎo)的神經(jīng)元凋亡機(jī)制對(duì)于闡述AD的病理過程具有重要的意義。Cyclin Dependent Kinase5(CDK5)是細(xì)胞周期蛋白激酶家族中一個(gè)特異的成員。CDK5具有抑制分裂后期神經(jīng)元重新進(jìn)入細(xì)胞周期的功能。 我們實(shí)驗(yàn)室前期鑒定出了CDK5的一個(gè)新的磷酸化底物—CEND1(cell cycle exit and neuronal differentiation1)。CEND1是在神經(jīng)系統(tǒng)特異性地高表達(dá),目前已知的主要功能是在神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育過程中協(xié)調(diào)神經(jīng)前體細(xì)胞的細(xì)胞分裂進(jìn)程和細(xì)胞分化過程,促進(jìn)神經(jīng)前體細(xì)胞發(fā)育為成熟的神經(jīng)元。CEND1通常定位于細(xì)胞質(zhì),而我們發(fā)現(xiàn)在AD病人大腦的神經(jīng)元中CEND1大量聚集在細(xì)胞核內(nèi)；β-淀粉樣蛋白處理原代神經(jīng)元也會(huì)誘導(dǎo)CEND1的核定位。我們進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)CDK5可以磷酸化CEND1的第87位絲氨酸,87位絲氨酸的磷酸化減弱了CEND1對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用以及對(duì)神經(jīng)元遷移的影響。除此之外,我們還發(fā)現(xiàn),人源的CEND1而不是鼠源的CEND1可以發(fā)生N鏈接糖基化,并且糖基化修飾可以增加CEND1蛋白穩(wěn)定性；而Ser87位點(diǎn)的磷酸化會(huì)降低CEND1的糖基化水平。綜上所述,我們發(fā)現(xiàn)CDK5可以通過CEND1的磷酸化而影響到其在細(xì)胞內(nèi)的定位、蛋白穩(wěn)定性、糖基化等方面。該位點(diǎn)的磷酸化在CEND1調(diào)控細(xì)胞增殖和遷移的方面也有重要的作用。由于在AD中,CDK5被異常激活,上述對(duì)CEND1功能的改變?cè)贏D的致病過程中有著重要的作用。
【關(guān)鍵詞】：阿爾茨海默病 CDK5 CEND1 細(xì)胞周期 磷酸化 糖基化
【學(xué)位授予單位】：廈門大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R749.16
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-11
• 第一章 前言11-18
• 1. 阿爾茨海默病癥11-12
• 1.1 阿爾茨海默病癥概述11
• 1.2 阿爾茨海默病癥的病理特征11-12
• 2. 阿爾茨海默病癥中的神經(jīng)元細(xì)胞周期失調(diào)12-15
• 2.1 神經(jīng)元中的細(xì)胞周期相關(guān)的細(xì)胞死亡13
• 2.2 CDK5對(duì)神經(jīng)元細(xì)胞周期的抑制作用13-15
• 3. CEDN115-17
• 4. 本論文的研究內(nèi)容與意義17-18
• 第二章 材料與方法18-33
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料18-22
• 1.1 細(xì)胞株、菌種和動(dòng)物18
• 1.2 質(zhì)粒18-19
• 1.3 抗體19
• 1.4 化學(xué)藥品及試劑盒19-20
• 1.5 溶液配制20-21
• 1.6 培養(yǎng)基配制21-22
• 1.7 其它所需試劑和材料22
• 2. 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備22-23
• 3. 實(shí)驗(yàn)方法23-33
• 3.1 GFP-CEND1表達(dá)質(zhì)粒及其突變體和缺失片段突變體的構(gòu)建23-26
• 3.2 堿裂解法大量提取質(zhì)粒26-27
• 3.3 細(xì)胞培養(yǎng)27
• 3.4 原代神經(jīng)元培養(yǎng)27-28
• 3.5 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染28
• 3.6 細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)蛋白的提取28-29
• 3.7 免疫印跡29-30
• 3.8 免疫熒光30-31
• 3.9 子宮胚胎電穿孔技術(shù)31
• 3.10 胎鼠大腦切片及Brdu染色31-32
• 3.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理32-33
• 第三章 結(jié)果與分析33-50
• 1. CEND1的表達(dá)33-35
• 1.1 CEDN1為腦特異性高表達(dá)蛋白33-34
• 1.2 CEND1不僅定位于細(xì)胞膜,在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核內(nèi)也有存在34-35
• 2. CENDl的亞細(xì)胞定位的改變35-37
• 2.1 在AD大腦中CEND1亞細(xì)胞定位的變化35
• 2.2 Aβ誘導(dǎo)CEND1向細(xì)胞核內(nèi)聚集35-36
• 2.3 激活CDK5(CDK5/P25)誘導(dǎo)CEND1向細(xì)胞核內(nèi)聚集36-37
• 3. CEND1上第87位絲氨酸被CDKs磷酸化37-43
• 3.1 在AD病人樣品大腦中鑒定出CEND1上磷酸化位點(diǎn)37-38
• 3.2 CEDN1-S87突變對(duì)其亞細(xì)胞定位的影響38-39
• 3.3 CEND1缺失突變體的構(gòu)建以及其在細(xì)胞內(nèi)的定位39-40
• 3.4 CEND1-S87磷酸化在小鼠胚胎發(fā)育過程中對(duì)神經(jīng)元增殖和遷移的影響40-43
• 4. CEND1可以被糖基化修飾43-47
• 4.1 CEDN1糖基化修飾的鑒定43-44
• 4.2 糖基化修飾對(duì)CEND1蛋白穩(wěn)定性的影響44-45
• 4.3 AD病人中CEND1糖基化修飾水平明顯降低45-46
• 4.4 CEND1Ser87位點(diǎn)的過磷酸化使CEND1糖基化修飾水平降低46-47
• 5. γ-secretase對(duì)CEND1的切割47-50
• 第四章 討論與展望50-53
• 參考文獻(xiàn)53-58
• 致謝58

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 朱粹青;;阿爾茨海默病神經(jīng)退行性變與細(xì)胞周期[J];國外醫(yī)學(xué)(老年醫(yī)學(xué)分冊(cè));2001年03期

2 李志軍;唐娜;;NMDA受體NR2B基因?qū)ｑR成年新生神經(jīng)元生存的影響[J];神經(jīng)損傷與功能重建;2013年06期

3 楊翠翠;李林;張?zhí)m;;常用阿爾茨海默病動(dòng)物模型制備方法及評(píng)價(jià)[J];成都醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2013年04期

4 韓慶東;劉勝文;孫煒;謝蕊繁;雷霆;陳勁草;張華楸;;他莫昔芬對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞氧糖剝奪后遷移和增殖的影響[J];神經(jīng)損傷與功能重建;2014年03期

5 孫正清;楊天德;;全麻藥對(duì)大腦發(fā)育的毒性作用的研究進(jìn)展[J];沈陽部隊(duì)醫(yī)藥;2007年01期

6 Shuang Li;Yan Zhang;Feng Zhu;Bin Zhang;Jianying Lin;Chunyang Xu;Wancai Yang;Wei Hao;Ruiling Zhang;;A new treatment for cognitive disorders related to in utero exposure to alcohol[J];Neural Regeneration Research;2013年18期

7 李志軍;張慧文;唐娜;;Influences of NR2B-containing NMDA Receptors Knockdown on Neural Activity in Hippocampal Newborn Neurons[J];Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences);2013年04期

8 Dongming Yu;Wenjuan Fan;Ping Wu;Jiexin Deng;Jing Liu;Yanli Niu;Mingshan Li;Jinbo Deng;;Characterization of hippocampal Cajal-Retzius cells during development in a mouse model of Alzheimer's disease(Tg2576)[J];Neural Regeneration Research;2014年04期

9 於蘇莉;周敏;;COPD合并認(rèn)知功能損害與阿爾茲海默病的關(guān)系[J];上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2014年01期

10 劉重斌;王瑞;董繆武;高喜仁;俞峰;;脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞β-淀粉樣蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)體表達(dá)的年齡變化:氧化應(yīng)激損傷的作用(英文)[J];生理學(xué)報(bào);2014年02期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳獻(xiàn)華;前體mRNA剪輯蛋白Tra2基因在神經(jīng)組織中的表達(dá)特征、發(fā)育調(diào)控及功能[D];復(fù)旦大學(xué);2002年

2 林秋霞;大腦皮層神經(jīng)元體外誘導(dǎo)分裂研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2004年

3 姚麗芬;Aβ_（1-40）誘導(dǎo)癡呆大鼠腦海馬及皮質(zhì)基因表達(dá)譜差異的實(shí)驗(yàn)研究[D];吉林大學(xué);2005年

4 武常生;醒腦啟智膠囊對(duì)血管性癡呆小鼠治療作用機(jī)理研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2006年

5 李晨晨;細(xì)胞周期蛋白cyclinD1/CDK4在小鼠海馬CA1區(qū)突觸可塑性及鉛誘導(dǎo)的神經(jīng)元死亡過程中的作用[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2008年

6 石永勇;麝香酮對(duì)氯胺酮麻醉后乳鼠海馬神經(jīng)元發(fā)育的影響及相關(guān)機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

7 石天堯;新型手性氮氧自由基對(duì)Alzheimer病的保護(hù)作用研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

8 梁千;CDK5在TGF-β1誘導(dǎo)的EMT和乳腺癌進(jìn)程中的作用機(jī)制研究[D];東北師范大學(xué);2013年

9 李世勇;線粒體動(dòng)力學(xué)異常在異氟烷致發(fā)育期大鼠神經(jīng)元毒性中作用及機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2013年

10 李先輝;五甲基槲皮素改善糖尿病大鼠認(rèn)知功能障礙的作用及機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 袁紅花;大鼠腦缺血再灌注誘導(dǎo)海馬中p53蛋白磷酸化激活及其機(jī)制的研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2002年

2 高安慧;去甲腎上腺素對(duì)胎鼠室下帶神經(jīng)干細(xì)胞的作用研究[D];華東師范大學(xué);2004年

3 王承敏;噪聲對(duì)暴露工人神經(jīng)行為的影響及部分機(jī)制的研究[D];武漢科技大學(xué);2005年

4 郭建新;真核熒光表達(dá)載體pEGFP-C3-SOX1的構(gòu)建及瞬時(shí)表達(dá)[D];鄭州大學(xué);2006年

5 施志敏;TRP通道阻斷劑鑭對(duì)胚胎神經(jīng)干細(xì)胞增殖和分化的影響[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2006年

6 張煥;虎杖乙酸乙酯部位對(duì)過氧化氫誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2008年

7 楊穎珂;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)腦出血大鼠血腫周圍凋亡及P75NTR、TrkA表達(dá)的影響[D];鄭州大學(xué);2013年

8 吳國華;氯胺酮對(duì)離體海馬神經(jīng)元凋亡及p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路活性的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2013年

9 江嵐;TOCP對(duì)人成神經(jīng)瘤SH-SY5Y細(xì)胞PKC活性及轉(zhuǎn)位的影響[D];南華大學(xué);2013年

10 唐國柱;脊髓損傷后膠質(zhì)瘢痕的病生變化及影像學(xué)表現(xiàn)[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2013年

，

本文編號(hào)：877351