本文關(guān)鍵詞：人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)糖尿病血管性癡呆大鼠的影響

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【摘要】：第一部分人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)、鑒定和標(biāo)記目的:研究人臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞體外分離、培養(yǎng)條件。方法選擇剖腹產(chǎn)手術(shù),取出胎兒后,將新生兒側(cè)臍帶結(jié)扎,用取血袋取臍帶血,共取20份,使用CAPD-1復(fù)合抗凝劑抗凝。將臍血稀釋后,6小時(shí)內(nèi)采取Ficoll密度梯度離心法收集單個(gè)核細(xì)胞。分離的單個(gè)核細(xì)胞以106/ml的密度接種于培養(yǎng)基中,放于37°C、5%二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),貼壁細(xì)胞達(dá)80%時(shí)消化傳代。流式細(xì)胞儀鑒定細(xì)胞。CM-Di I標(biāo)記人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞。結(jié)果20份人臍帶血有10份分離培養(yǎng)出HUCB-MSCs,成功率為50%。收集的單個(gè)核細(xì)胞接種于培養(yǎng)基后,24小時(shí)才開(kāi)始有少部分細(xì)胞貼壁,貼壁的細(xì)胞開(kāi)始增殖緩慢,5天后可見(jiàn)較多的細(xì)胞貼壁,4周左右能達(dá)到80%融合,以1:3比例進(jìn)行傳代,細(xì)胞形態(tài)逐漸呈長(zhǎng)梭狀和圓形。經(jīng)傳代擴(kuò)增,有3份出現(xiàn)旋渦狀排列的間充質(zhì)樣細(xì)胞,其余冷保持但和楊的圓形細(xì)胞及少量梭形細(xì)胞混雜。培養(yǎng)的第3代細(xì)胞經(jīng)流式細(xì)胞儀鑒定表達(dá)了HUCB-MSCs抗原標(biāo)記CD44,不表達(dá)造血細(xì)胞系表面標(biāo)記CD34。結(jié)論人臍血可以分離培養(yǎng)出間充質(zhì)干細(xì)胞。能力的影響第二部分人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)糖尿病血管性癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶目的建立可復(fù)制的糖尿病血管性癡呆大鼠模型,探討人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)糖尿病血管性癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響方法50只健康雄性Wistar大鼠隨機(jī)選擇40只,腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)制作糖尿病模型,有30只大鼠造模成功。1周后2-VO制備血管性癡呆模型。存活的40只大鼠分為正常組(SHAM)、糖尿病(DM)組、血管性癡呆(DM+VD)組、人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞(HUCB-MSCs)組,每組10只。DM組僅分離出雙側(cè)頸總動(dòng)脈但不結(jié)扎;HUCB-MSCs組先經(jīng)頸總動(dòng)脈注入HUCB-MSCs 2×106再結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈;DM+VD組先經(jīng)頸總動(dòng)脈注入等量生理鹽水再結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈。HUCB-MSCs移植后4周進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn),測(cè)試大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的變化結(jié)果與SHAM組相比,其余各組大鼠平均逃避潛伏期延長(zhǎng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與DM+VD組比較,HUCB-MSCs組大鼠平均逃避潛伏期縮短,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與SHAM組相比,其余各組組大鼠穿越原平臺(tái)象限次數(shù)下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與DM+VD組比較,HUCB-MSCs組大鼠穿越原平臺(tái)象限次數(shù)增多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論HUCB-MSCs經(jīng)頸總動(dòng)脈移植后能改善糖尿病血管性癡呆大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。第三部分人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)糖尿病血管性癡呆大鼠海馬區(qū)Ch AT、神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響目的研究人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)糖尿病血管性癡呆大鼠海馬區(qū)Ch AT和神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響方法從健康雄性Wistar大鼠50只中隨機(jī)選擇40只,腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)制作糖尿病模型,有30只大鼠造模成功。1周后2-VO制備血管性癡呆模型。40只大鼠分為正常組(SHAM)、糖尿病(DM)組、血管性癡呆(DM+VD)組、人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞(HUCB-MSCs)組,每組10只。DM組僅分離出雙側(cè)頸總動(dòng)脈但不結(jié)扎;HUCB-MSCs組先經(jīng)頸總動(dòng)脈注入HUCB-MSCs 2×106再結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈;DM+VD組先經(jīng)頸總動(dòng)脈注入等量生理鹽水再結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈。Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)后,免疫組化法觀察各組大鼠海馬神經(jīng)元膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(Ch AT)的變化。流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組大鼠海馬組織神經(jīng)細(xì)胞凋亡。免疫熒光觀察CM-Di I標(biāo)記的HUCB-MSCs是否能通過(guò)血腦屏障作用于大鼠腦組織中。結(jié)果熒光顯微鏡下發(fā)現(xiàn)在糖尿病血管性癡呆大鼠腦組織中可見(jiàn)CM-Di I標(biāo)記的HUCB-MSCs,證明HUCB-MSCs能透過(guò)血腦屏障作用于大鼠腦組織。與SHAM組相比,其余各組大鼠海馬Ch AT陽(yáng)性神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與DM+VD組比較,HUCB-MSCs組大鼠海馬Ch AT陽(yáng)性神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量增多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡:與SHAM組相比,其余各組大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡增多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與DM+VD組比較,HUCB-MSCs組大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞能通過(guò)增加糖尿病血管性癡呆大鼠海馬區(qū)Ch AT陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)量,抑制海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞凋亡,來(lái)改善糖尿病血管性癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶能力。小結(jié)1、可從人臍血中分離培養(yǎng)出間充質(zhì)干細(xì)胞。2、高糖高脂飲食加鏈脲佐菌素誘導(dǎo)糖尿病模型,2-VO制作血管性癡呆模型是一種可復(fù)制的糖尿病血管性癡呆模型。HUCB-MSCs經(jīng)頸總動(dòng)脈移植后可進(jìn)入大鼠腦組織,能夠改善糖尿病血管性癡呆大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。3、HUCB-MSCs能使糖尿病血管性癡呆大鼠海馬Ch AT陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)量顯著增多,海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞凋亡減少。
【關(guān)鍵詞】：人臍血 間充質(zhì)干細(xì)胞 血管性癡呆 移植 糖尿病 血管性癡呆 學(xué)習(xí)記憶能力 海馬 膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R587.2;R749.13
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-13
• 符號(hào)說(shuō)明13-14
• 前言14
• 第一部分 人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)、鑒定和標(biāo)記14-20
• （一）材料和方法14-17
• （二）結(jié)果17-18
• （三）結(jié)論18-19
• （四）討論19-20
• 第二部分 人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)糖尿病血管性癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響20-30
• （一）材料和方法20-24
• （二）結(jié)果24-27
• （三）結(jié)論27
• （四）討論27-30
• 第三部分 人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞移植后糖尿病血管性癡呆大鼠海馬Ch AT、神經(jīng)細(xì)胞凋亡的變化30-41
• （一）材料和方法30-34
• （二）結(jié)果34-37
• （三）結(jié)論37-38
• （四）討論38-41
• 參考文獻(xiàn)41-50
• 文獻(xiàn)綜述50-63
• 參考文獻(xiàn)59-63
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果63-64
• 致謝64-66

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