本文關(guān)鍵詞：Theacrine對水浸拘束應(yīng)激負(fù)荷小鼠海馬神經(jīng)元增殖的影響及機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 抑郁 慢性水浸拘束應(yīng)激 1 3 7 9-四甲基尿酸 咖啡因 神經(jīng)元增殖

【摘要】：目的：建立水浸拘束應(yīng)激（CWIRS）負(fù)荷小鼠抑郁模型，研究1,3,7,9-四甲基尿酸（Theacrine, Tc）對CWIRS誘導(dǎo)的小鼠抑郁樣癥狀的影響，并從神經(jīng)再生的角度去探討其作用機(jī)制。 方法：（1）藥效考察：采用CWIRS建立小鼠抑郁癥模型，用經(jīng)典的行為學(xué)實驗（懸尾實驗、強(qiáng)迫游泳、高價十字迷宮以及糖水偏愛實驗）評價造模效果以及考察藥物的干預(yù)作用；用自發(fā)活動箱對給藥后小鼠的自發(fā)活動進(jìn)行測定，以考察藥物對小鼠是否有中樞興奮作用；采用HPLC-ESA方法檢測CWIRS對小鼠海馬中神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響以及給予Tc干預(yù)后神經(jīng)遞質(zhì)含量變化。（2）作用機(jī)制探究：采用HPLC-UV方法分析考察Tc對CWIRS小鼠血漿中皮質(zhì)酮(corticosterone, CORT)含量的影響；采用免疫熒光技術(shù)考察Tc對CWIRS小鼠海馬神經(jīng)元增殖的影響。此外，本課題還采用HPLC方法來分析考察Tc對小鼠海馬組織中磷酸二酯酶（PDEs）活性的影響；用ELASA方法考察Tc對PC12細(xì)胞中cAMP含量的影響；采用Western blotting方法考察Tc對CWIRS小鼠海馬組織中CREB、p-CREB、BDNF、TrkB及p-TrkB等蛋白表達(dá)的影響。最后，建立了皮質(zhì)酮損傷細(xì)胞模型，用Western blotting方法考察Tc對PC12細(xì)胞中CREB、p-CREB、BDNF、TrkB及p-TrkB等蛋白表達(dá)的影響，給予Rp-cAMP后，再次考察Tc對上述蛋白表達(dá)的影響。 結(jié)果：CWIRS導(dǎo)致小鼠出現(xiàn)抑郁樣癥狀，表現(xiàn)為絕望、焦慮、興趣缺乏以及海馬組織中5-hydroxytryptamine（5-HT）含量顯著降低，而5-hydroxy indole aceticacid（5-HIAA）含量顯著升高等。給予Tc及Ca可以有效改善應(yīng)激小鼠抑郁樣行為，表現(xiàn)為縮短應(yīng)激后小鼠強(qiáng)迫游泳和懸尾實驗中的不動時間，延長應(yīng)激小鼠在十字迷宮實驗中進(jìn)入開放臂的時間和增加進(jìn)入開放臂的次數(shù)，逆轉(zhuǎn)應(yīng)激導(dǎo)致小鼠糖水偏嗜度降低現(xiàn)象以及改善應(yīng)激導(dǎo)致的海馬5-HT水平低下這一癥狀。機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，CWIRS可以導(dǎo)致小鼠血漿CORT水平顯著升高，而只有Tc可以逆轉(zhuǎn)應(yīng)激導(dǎo)致的CORT水平升高作用；免疫熒光結(jié)果表明，，Ca和Tc均可以改善應(yīng)激導(dǎo)致的海馬BrdU+/DCX+陽性細(xì)胞數(shù)降低這一作用。進(jìn)而我們又從分子水平探究了Tc促進(jìn)神經(jīng)元增殖的分子機(jī)制，體內(nèi)結(jié)果顯示，Ca和Tc促進(jìn)CWIRS小鼠海馬組織中p-CREB、BDNF及p-TrkB等蛋白表達(dá)。在體外細(xì)胞模型上也發(fā)現(xiàn)，200μM皮質(zhì)酮會導(dǎo)致細(xì)胞中p-CREB、BDNF及p-TrkB等蛋白表達(dá)水平降低，Tc和Ca可以有效逆轉(zhuǎn)這一作用，而Rp-cAMP完全拮抗了Tc促進(jìn)p-CREB蛋白表達(dá)的作用，部分拮抗了Tc促進(jìn)BDNF和p-TrkB蛋白表達(dá)的作用，而Ca促進(jìn)p-CREB、BDNF、p-TrkB等蛋白表達(dá)的作用被Rp-cAMP全部拮抗。 結(jié)論：由動物實驗可知和Tc和Ca均可以改善CWIRS誘導(dǎo)的小鼠抑郁樣狀態(tài)，且Ca有一定的中樞興奮作用，該作用可能介導(dǎo)了其抗抑郁作用的發(fā)揮，而Tc則無中樞興奮作用。Tc抗抑郁作用的機(jī)制可能是通過降低應(yīng)激小鼠血漿皮質(zhì)酮水平，從而改善慢性應(yīng)激誘導(dǎo)致的小鼠海馬神經(jīng)元增殖抑制作用。Tc通過激活cAMP/CREB/BDNF/TrkB信號通路來促進(jìn)小鼠海馬神經(jīng)元增殖水平，從而改善應(yīng)激誘導(dǎo)的小鼠抑郁樣癥狀，有望開發(fā)成為神經(jīng)元保護(hù)劑，成為新型的抗抑郁藥物。
【關(guān)鍵詞】：抑郁 慢性水浸拘束應(yīng)激 1 3 7 9-四甲基尿酸 咖啡因 神經(jīng)元增殖
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R749.4
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• ABSTRACT5-6
• 英文縮略詞表6-7
• 目錄7-10
• 1. 前言10-20
• 1.1 抑郁癥10-13
• 1.1.1 抑郁癥的特征10-11
• 1.1.2 抑郁癥解剖學(xué)基礎(chǔ)11-12
• 1.1.3 抑郁癥發(fā)病機(jī)制12-13
• 1.2 應(yīng)激與抑郁癥的關(guān)系13-16
• 1.2.1 抑郁癥與應(yīng)激13-16
• 1.3 抑郁癥的治療16-17
• 1.3.1 抗抑郁藥16-17
• 1.3.2 其他非藥物治療17
• 1.4 嘌呤生物堿與情緒調(diào)節(jié)17-19
• 1.5 立題依據(jù)19-20
• 2. Tc 對應(yīng)激負(fù)荷小鼠抑郁癥狀的影響20-32
• 2.1 實驗材料20-21
• 2.1.1 實驗動物20
• 2.1.2 主要試劑20
• 2.1.3 主要設(shè)備20-21
• 2.2 實驗方法21-24
• 2.2.1 CWIRS 的建立21
• 2.2.2 懸尾實驗（Suspension test, TST）21
• 2.2.3 強(qiáng)迫游泳（Forced swimming test, FST）21-22
• 2.2.4 高架十字迷宮測試（Elevated plus maze test, EPMT）22
• 2.2.5 糖水偏愛實驗（Sucrose preference test, SPT）22
• 2.2.6 自發(fā)活動實驗（Spontaneous motor activity test, SMAT）22-23
• 2.2.7 海馬中神經(jīng)遞的測定23
• 2.2.8 統(tǒng)計學(xué)處理23-24
• 2.3 實驗結(jié)果24-29
• 2.3.1 Tc 對小鼠懸尾不動時間的影響24
• 2.3.2 Tc 對小鼠強(qiáng)迫游泳不動時間的影響24-25
• 2.3.3 Tc 對小鼠十字迷宮開放臂停留時間和進(jìn)入次數(shù)的影響25-26
• 2.3.4 Tc 對小鼠糖水偏嗜度的影響26-27
• 2.3.5 Tc 對小鼠自發(fā)活動的影響27-28
• 2.3.6 Tc 對小鼠海馬中 5-HT 和 5-HIAA 含量的影響28-29
• 2.4 小結(jié)與討論29-32
• 3. Tc 抗抑郁作用機(jī)制研究32-48
• 3.1 實驗材料32-34
• 3.1.1 動物的飼養(yǎng)32
• 3.1.2 PC12 細(xì)胞的復(fù)蘇、傳代及凍存32
• 3.1.3 實驗試劑32-33
• 3.1.4 實驗設(shè)備33-34
• 3.2 實驗方法34-37
• 3.2.1 小鼠血漿樣品處理34-35
• 3.2.2 皮質(zhì)酮標(biāo)準(zhǔn)溶液配制及標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制35
• 3.2.3 血漿中皮質(zhì)酮含量測定35
• 3.2.4 海馬組織切片樣品處理35-36
• 3.2.5 神經(jīng)元增殖細(xì)胞數(shù)測定36
• 3.2.6 雙管法測定 PDEs 活性36
• 3.2.7 PC12 細(xì)胞中 cAMP 的含量測定36
• 3.2.8 皮質(zhì)酮損傷細(xì)胞模型建立36-37
• 3.2.9 蛋白質(zhì)印跡法（western blotting）測定相關(guān)蛋白表達(dá)37
• 3.3 結(jié)果37-44
• 3.3.1 Tc 逆轉(zhuǎn)應(yīng)激導(dǎo)致的血漿皮質(zhì)酮升高作用37-38
• 3.3.2 Tc 改善應(yīng)激對海馬神經(jīng)元增殖的抑制作用38-39
• 3.3.3 Tc 抑制以 cAMP 為底物的 PDEs 的活性39-40
• 3.3.4 Tc 促進(jìn) PC12 細(xì)胞中 cAMP 的分泌40-41
• 3.3.5 Tc 激活 CREB/BDNF/TrkB 信號通路41-44
• 3.4 小結(jié)與討論44-48
• 4 總結(jié)與展望48-52
• 4.1 問題與討論48
• 4.2 結(jié)果與討論48-50
• 4.3 創(chuàng)新與突破50
• 4.4 前景與展望50-52
• 參考文獻(xiàn)52-64
• 附錄64-65
• 1. 已申請專利64
• 2. 已投稿文章64-65
• 致謝65-67

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 秦海宏,沈慧,王福O

本文編號：744593