本文關(guān)鍵詞：過表達(dá)MKP1通過抑制JNK途徑減輕淀粉樣蛋白的神經(jīng)毒性作用

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【摘要】：目的:β淀粉樣蛋白(amyloid beta,Aβ)可通過激活MAPK等信號(hào)途徑誘發(fā)神經(jīng)炎癥和細(xì)胞凋亡,其神經(jīng)毒性是阿爾茨海默病(Alzheimer disease,AD)發(fā)病的關(guān)鍵原因。然而,Aβ激活MAPK途徑的具體分子機(jī)制尚未完全闡明。本研究通過測(cè)定Aβ42刺激下PC12細(xì)胞中MKP1蛋白水平,Aβ42刺激下敲除MKP1和過表達(dá)MKP1的PC12細(xì)胞中ROS、SOD、MDA、p-JNK、TNF-α、IL-1βm RNA、LDH、Caspase 3及細(xì)胞損傷水平,JNK特異性抑制劑SP600125作用下敲除MKP1的PC12細(xì)胞中ROS、SOD、MDA、TNF-α、IL-1β、LDH及細(xì)胞損傷水平對(duì)Aβ激活MAPK途徑的具體分子機(jī)制進(jìn)行初步論述,期待可為靶向作用于MAPK的AD治療藥物的研發(fā)提供有力的幫助。方法:實(shí)驗(yàn)對(duì)象選取野生型PC12細(xì)胞、過表達(dá)MKP1和穩(wěn)定敲除MKP1的PC12細(xì)胞。為檢測(cè)Aβ42(Sigma-Aldrich,MO,USA)對(duì)PC12細(xì)胞活性的影響,在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入不同濃度的Aβ42(0μM,0.1μM,1μM,10μM和100μM),處理24 h后CCK-8檢測(cè)細(xì)胞活性。為檢測(cè)Aβ對(duì)PC12細(xì)胞中MKP1的表達(dá),向細(xì)胞培養(yǎng)基中加入10μM的Aβ42,在不同時(shí)間點(diǎn)(0 h,6 h,12 h,18 h和24 h)通過q RT-PCR和Western blot檢測(cè)MKP1表達(dá)。為檢測(cè)MKP1對(duì)Aβ所致神經(jīng)毒性的影響,將野生型PC12細(xì)胞分為對(duì)照組(Control)和Aβ42組,敲除MKP1的細(xì)胞為Aβ42+MKP1 KD組,過表達(dá)MKP1細(xì)胞為Aβ42+MKP1組,后3組加入10μM Aβ42,置于培養(yǎng)箱中24 h,進(jìn)行CCK-8等檢測(cè)。為檢測(cè)JNK信號(hào)途徑在MKP1敲除所致神經(jīng)損傷加重效應(yīng)中的作用,將MKP1 KD細(xì)胞分為Control和SP600125組,給予10μM Aβ42,SP600125組再加入JNK特異性抑制劑SP600125(Sigma-Aldrich)2μM,置于培養(yǎng)箱中24 h,進(jìn)行CCK-8等檢測(cè)。使用IBM SPSS Statistics 23.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。結(jié)果:在本研究結(jié)果中,我們發(fā)現(xiàn)經(jīng)Aβ刺激后,PC12細(xì)胞活性受到抑制,MAPK的重要調(diào)節(jié)因子MKP1表達(dá)下調(diào),并呈時(shí)間依賴性。過表達(dá)MKP1后,Aβ誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞中p-JNK水平降低,細(xì)胞內(nèi)活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平下降,細(xì)胞死亡和凋亡減輕,TNF-α和IL-1β表達(dá)減少。而敲除MKP1可加重Aβ誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)和細(xì)胞損傷。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),JNK抑制劑SP600125可抵消MKP1敲除對(duì)Aβ神經(jīng)毒性的加重效應(yīng)。結(jié)論:本研究表明,Aβ通過下調(diào)MKP1表達(dá)激活MAPK信號(hào)途徑,過表達(dá)MKP1可通過抑制JNK信號(hào)途徑減輕Aβ所誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡和神經(jīng)炎癥從而發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：β淀粉樣蛋白 阿爾茨海默病 絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1 絲裂原活化蛋白激酶 氧化應(yīng)激
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R749.16
【目錄】：

• 前言4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-12
• 中英文縮略詞12-13
• 第1章 緒論13-15
• 第2章 綜述15-23
• 2.1 氧化應(yīng)激的概念15
• 2.2 氧化應(yīng)激相關(guān)的物質(zhì)15-16
• 2.2.1 體內(nèi)的主要氧化劑15-16
• 2.2.2 抑制自由基生成的物質(zhì)16
• 2.3 氧化應(yīng)激與神經(jīng)細(xì)胞的凋亡16-18
• 2.3.1 細(xì)胞凋亡的線粒體途徑17
• 2.3.2 細(xì)胞凋亡的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)途徑17-18
• 2.3.3 細(xì)胞凋亡的死亡受體途徑18
• 2.4 氧化應(yīng)激與腦缺血18-20
• 2.4.1 內(nèi)皮細(xì)胞損傷18-19
• 2.4.2 動(dòng)脈不穩(wěn)定斑塊形成19-20
• 2.4.3 缺血性級(jí)聯(lián)反應(yīng)，組織細(xì)胞再灌注20
• 2.5 氧化應(yīng)激與神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病20-22
• 2.5.1 氧化應(yīng)激與阿爾茨海默病(Alzheimer disease, AD)20-21
• 2.5.2 氧化應(yīng)激與帕金森病21-22
• 2.6 問題與展望22-23
• 第3章 材料與方法23-31
• 3.1 細(xì)胞培養(yǎng)與處理23
• 3.2 CCK-8 檢測(cè)23-24
• 3.3 q RT-PCR24-26
• 3.3.1 RNA的提取24
• 3.3.2 RNA濃度測(cè)定24-25
• 3.3.3 RNA電泳25
• 3.3.4 RNA逆轉(zhuǎn)錄25-26
• 3.3.5 q PCR檢測(cè)26
• 3.4 Western blot檢測(cè)26-28
• 3.4.1 細(xì)胞中總蛋白提取26-27
• 3.4.2 BCA法測(cè)蛋白濃度27
• 3.4.3 聚丙烯酰胺凝膠電泳27-28
• 3.5 DCFH-DA檢測(cè)28
• 3.6 SOD活性和MDA水平檢測(cè)28
• 3.7 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)28-29
• 3.7.1 預(yù)處理28
• 3.7.2 細(xì)胞制備28-29
• 3.7.3 流式細(xì)胞儀分析29
• 3.8 LDH活性檢測(cè)29
• 3.9 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）29-30
• 3.10 TUNEL染色30
• 3.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析30-31
• 第4章 結(jié)果31-37
• 4.1 Aβ_(42)下調(diào)PC12細(xì)胞中MKP1的表達(dá)31-32
• 4.2 MKP1調(diào)控Aβ_(42)所致的氧化應(yīng)激反應(yīng)32-33
• 4.3 MKP1調(diào)控Aβ_(42)所致的神經(jīng)炎癥33-34
• 4.4 MKP1減輕Aβ_(42)所致的神經(jīng)細(xì)胞損傷34-35
• 4.5 抑制JNK減輕MKP1敲除對(duì)Aβ_(42)所致神經(jīng)毒性的效應(yīng)35-37
• 第5章 討論37-39
• 第6章 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-47
• 作者簡(jiǎn)介及科研成果47-48
• 致謝48

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李其祿;;9例精神、神經(jīng)病患者嘔吐物中淀粉樣蛋白的測(cè)定[J];中國民間療法;2007年07期

2 陳子馨;吳t，

本文編號(hào)：711892