本研究采用原代細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，以神經(jīng)毒素β-淀粉樣肽(Aβ_1-42)誘導(dǎo)小鼠原代大腦皮層神經(jīng)細(xì)胞損傷，構(gòu)建老年性癡呆細(xì)胞模型，分析梓醇對(duì)老年性癡呆神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用及其作用機(jī)制。 利用Aβ_1-42誘導(dǎo)小鼠原代大腦皮層純神經(jīng)元凋亡，探討梓醇對(duì)小鼠大腦皮層神經(jīng)元的保護(hù)作用機(jī)制。大腦皮層純神經(jīng)元細(xì)胞經(jīng)梓醇預(yù)孵育30min再和Aβ_1-42作用72h后，檢測(cè)梓醇對(duì)皮層神經(jīng)元形態(tài)變化、caspase級(jí)聯(lián)通路以及線粒體功能的調(diào)節(jié)作用。檢測(cè)結(jié)果顯示梓醇改善了損傷的細(xì)胞形態(tài)，有效減少了乳酸脫氫酶(LDH)的釋放，抑制了caspase-3及乙酰膽堿酯酶(AChE)活性的提高，減弱了細(xì)胞內(nèi)鈣離子超載、活性氧自由基(ROS)產(chǎn)生和線粒體膜電位的喪失，保護(hù)了線粒體功能免受損傷。這些結(jié)果表明，梓醇可能通過(guò)阻斷caspase級(jí)聯(lián)通路的激活，以及改善線粒體功能障礙而降低Aβ_1-42對(duì)神經(jīng)元產(chǎn)生的毒性損傷。 利用Aβ_1-42誘導(dǎo)小鼠原代大腦皮層神經(jīng)-膠質(zhì)混合細(xì)胞，造成皮層神經(jīng)元炎癥損傷，探討梓醇的抗炎癥保護(hù)作用機(jī)...

【文章頁(yè)數(shù)】：70 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 老年性癡呆與細(xì)胞凋亡
        1.1.1 細(xì)胞凋亡的特征
        1.1.2 caspase及AChE在細(xì)胞凋亡過(guò)程中的作用
        1.1.3 線粒體與細(xì)胞凋亡
    1.2 膠質(zhì)細(xì)胞的激活在AD形成過(guò)程中的作用
        1.2.1 小膠質(zhì)細(xì)胞和星型膠質(zhì)細(xì)胞的特性
        1.2.2 AD中神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞激活的病理及對(duì)神經(jīng)元細(xì)胞的損傷
    1.3 老年性癡呆動(dòng)物模型的研究進(jìn)展
        1.3.1 神經(jīng)毒素Aβ在AD中毒性作用的發(fā)揮機(jī)制
        1.3.2 幾種常用的AD動(dòng)物模型
    1.4 針對(duì)老年性癡呆癥的藥物治療現(xiàn)狀
    1.5 本論文的選題依據(jù)及研究?jī)?nèi)容
    參考文獻(xiàn)
2 梓醇對(duì)原代大腦皮層神經(jīng)元細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用研究
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料及設(shè)備
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 小鼠大腦皮層神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 免疫細(xì)胞化學(xué)染色
        2.2.3 Aβ_1-42對(duì)小鼠大腦皮層神經(jīng)元細(xì)胞的損傷作用
        2.2.4 Aβ_1-42介導(dǎo)小鼠大腦皮層神經(jīng)元細(xì)胞損傷后LDH的釋放
        2.2.5 caspase-3活性分析
        2.2.6 乙酰膽堿酯酶(ACHE)活性分析
        2.2.7 細(xì)胞內(nèi)鈣離子的測(cè)定
        2.2.8 細(xì)胞內(nèi)活性氧自由基(ROS)的測(cè)定
        2.2.9 細(xì)胞線粒體膜電位的測(cè)定
        2.2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 Aβ_1-42對(duì)大腦皮層神經(jīng)元細(xì)胞活力的影響
        2.3.2 梓醇對(duì)Aβ_1-42致大腦皮層神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)LDH漏出的影響
        2.3.3 梓醇對(duì)Aβ_1-42介導(dǎo)的大腦皮層神經(jīng)元細(xì)胞損傷的保護(hù)作用
        2.3.4 梓醇對(duì)Aβ_1-42誘導(dǎo)皮層神經(jīng)元凋亡時(shí)caspase-3和AChE活力的影響
        2.3.5 梓醇調(diào)節(jié)了Aβ_1-42介導(dǎo)的大腦皮層神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)Ca²⁺失衡
        2.3.6 梓醇抑制了Aβ_1-42誘導(dǎo)的大腦皮層神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生
        2.3.7 梓醇改善了Aβ_1-42導(dǎo)致的大腦皮層神經(jīng)元線粒體膜電位降低
        2.4 討論
        2.5 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
3 梓醇對(duì)Aβ_1-42介導(dǎo)的大腦皮層神經(jīng)元炎癥損傷的保護(hù)作用研究
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料及設(shè)備
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 小鼠原代大腦皮層神經(jīng)-膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2.2 純小膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2.3 純星型膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2.4 免疫染色
        3.2.5 乳酸脫氫酶(LDH)的測(cè)定
        3.2.6 小膠質(zhì)細(xì)胞中活性氧自由基的測(cè)定
        3.2.7 酶聯(lián)免疫法檢測(cè)小膠質(zhì)細(xì)胞中腫瘤壞死因子(TNF-α)的釋放
        3.2.8 星型膠質(zhì)細(xì)胞中一氧化氮的(nitric oxide,NO)的測(cè)定
        3.2.9 星型膠質(zhì)細(xì)胞中誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)的測(cè)定
        3.2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 皮層神經(jīng)-膠質(zhì)細(xì)胞體系中梓醇對(duì)Aβ_1-42介導(dǎo)的神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用
        3.3.2 梓醇對(duì)Aβ_1-42介導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞激活的抑制作用
        3.3.3 梓醇抑制激活的小膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生炎癥因子
        3.3.4 梓醇抑制星型膠質(zhì)細(xì)胞的激活
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
結(jié)論
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況
致謝



本文編號(hào)：3755775