2 型髓系細(xì)胞觸發(fā)受體（Triggering receptor expressed on myeloid cells 2,TREM2）是一種先天免疫受體蛋白,其在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中主要由小膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)。TREM2上的突變與阿爾茲海默癥（Alzheimer’s Disease,AD）的發(fā)生密切相關(guān),其中R47H突變能顯著增加AD發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。TREM2作為一個(gè)細(xì)胞表面受體,已經(jīng)有多個(gè)TREM2配體被發(fā)現(xiàn),包括磷脂（phospholipids）和載脂蛋白E（Apolipoprotein E,ApoE）。但是目前報(bào)道TREM2與AD相關(guān)配體的研究還很少,相關(guān)功能性配體尚有待于發(fā)現(xiàn)。在本研究中,我們利用真核細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)并純化TREM2蛋白,結(jié)合蛋白固相結(jié)合（Solid Phase Binding）、免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）及表面等離子共振（Surface Plasmon Resonance,SPR）等技術(shù),發(fā)現(xiàn)β-淀粉樣蛋白寡聚體（Beta-Amyloid Oligomer,oAβ）能夠特異性結(jié)合TREM2。為了進(jìn)一步探究Aβ寡聚體與TREM2的相互作用是否能夠... 

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圖１－３腦中髓系細(xì)胞的標(biāo)志基因，引自Ｑｉｎｇｙｕｎ?Ｌｉ和Ｂｅｎ?Ａ．?Ｂａｒｒｅｓ?（２０１７）??ＮＡＴＵＲＥ?ＲＥＶＩＥＷＳ?ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ??

產(chǎn)生ＩＬ－ｉｐ、ＴＮＦ－ａ和其他炎癥因子，促進(jìn)小膠質(zhì)細(xì)胞的增殖。一方面可以通過(guò)??增加ＡＰ的吞噬減少ＡＰ的聚集；另一方面，長(zhǎng)期的慢性澂活可以導(dǎo)致ＡＰ的吞??噬減少，引起神經(jīng)毒性和神經(jīng)元丟失（圖１＿４）?［９１］。??８??

圖３－２－２?Ｅｌ對(duì)ＴＲＥＭ２的信號(hào)通路及其功能的影響??Ｆｉｇ?３－２－２?Ｔｈｅ?ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?Ｅｌ?ｏｎ?ＴＲＥＭ２?ｓｉｇｎａｌ?ｐａｔｈｗａｙ?ａｎｄ?ｉｔｓ?ｆｕｎｃｔｉｏｎ??Ａ．?Ｅｌ對(duì)ＴＲＥＭ２－Ｋ０小膠質(zhì)細(xì)胞的毒性更大。將ＷＴ和ＴＲＥＭ２－Ｋ０原代小膠質(zhì)細(xì)胞以每孔５ｘ１０４??的密度，分別種植到９６孔板里。２４ｈ后，將不同濃度的Ｅ１分別與ＤＭＥＭ混合，加入孔中。１２ｈ后棄去??ＤＭＥＭ，加入含有細(xì)胞活力測(cè)試試劑的ＤＭＥＭ。ｌｈ后，使用＿標(biāo)儀讀取波長(zhǎng)４９０ｎｍ處的吸光度。ｎ＝３，使??用ｔｗｏ－ｗａｙＡＮＯＶＡ進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)表示為平均值士ＳＤ，＊＊，ｐ＜０．０１。??Ｂ．?Ｅｌ不能激活ＴＤ４組細(xì)胞。將Ｅｌ與ＷＴ和ＴＤ４細(xì)胞混合，按照前述步驟測(cè)定吸光度。ＰＭＡ為激活??反應(yīng)的放大劑，Ｉｏｎｏｍｙｃｉｎ為陽(yáng)性對(duì)照，ｎ＝５，使用ｏｎｅ－ｗａｙ?ＡＮ０ＶＡ進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)表示為平均值土?ＳＤ，ｎｓ，??ｎｏｔ?ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ。??Ｃ，Ｄ，?Ｅ．?Ｅｌ抑制小膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)ＡＰ的吞噬，且其對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞吞噬功能的抑制率依賴于ＴＲＥＭ２。將??ＷＴ和ＴＲＥＭ２－ＫＯ原代小膠質(zhì)細(xì)胞以每孔１ｘ１０６的密度，分別種植到１２孔板里。２４ｈ后棄去每孔的培養(yǎng)基，??分別加入含有ＩｐＭ?Ｅ１或?qū)φ杖軇┑模模停牛�。１２ｈ后，棄去ＤＭＥＭ，加入含有２５０ｎＭＦＡＭ－Ａｐ的ＤＭＥＭ�??３ｈ，收取細(xì)胞，用于流式細(xì)胞術(shù)分析。ｎ＝３，使用ｔ－ｔｅｓｔ進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)表示為平均值士?ＳＤ。＊＊＊，ｐ＜０．００１，??


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