本文關(guān)鍵詞：中國(guó)人群阿爾茨海默病ApoE基因的Meta分析及TaqMan-TAMRA探針基因分型方法的建立，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景阿爾茨海默病是嚴(yán)重危害老年人的一種神經(jīng)系統(tǒng)疾病,目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多個(gè)可能增高患病風(fēng)險(xiǎn)的易感基因,其中己確定與AD相關(guān)性最強(qiáng)的為載脂蛋白E (ApoE)基因。目前國(guó)內(nèi)外已有大量針對(duì)ApoE基因與AD關(guān)系的病例對(duì)照研究,然而不同研究之間結(jié)果往往存在差異,甚至結(jié)果相反,因此需要對(duì)ApoE基因多態(tài)性與AD關(guān)系進(jìn)行系統(tǒng)分析；同時(shí)國(guó)外已有針對(duì)不同人種或人群的研究,但未有針對(duì)中國(guó)人群的相關(guān)研究,因此亟需針對(duì)中國(guó)人群中ApoE基因與AD關(guān)系進(jìn)行系統(tǒng)分析,并且與其他人群進(jìn)行比較,明確不同人群或人種之間的差異,為中國(guó)人群預(yù)防、檢測(cè)和治療AD提供依據(jù)。目前檢測(cè)ApoE基因型的方法眾多,然而各種方法均存在著操作復(fù)雜、耗費(fèi)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、結(jié)果不易判定等問(wèn)題,因此限制了ApoE基因分型在預(yù)防、檢測(cè)和治療AD上的應(yīng)用。目的1.通過(guò)Meta分析方法,研究ApoE基因多態(tài)性與中國(guó)人群阿爾茨海默病之間的關(guān)系,探討不同等位基因和基因型的阿爾茨海默病患病風(fēng)險(xiǎn)。比較中國(guó)人和其他人群等位基因頻率和基因型比例,明確不同人群之間的差異。2.建立一種準(zhǔn)確性高、操作簡(jiǎn)便、容易判讀的ApoE基因分型方法,并初步評(píng)價(jià)。方法1.檢索1990年至2013年之間針對(duì)ApoE基因與阿爾茨海默病相關(guān)性的病例對(duì)照研究,并通過(guò)入選標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行篩選；對(duì)納入的研究進(jìn)行Meta分析,并對(duì)結(jié)果進(jìn)行敏感性分析和發(fā)表性偏倚評(píng)估。2.基于TaqMan-TAMRA探針技術(shù),設(shè)計(jì)特異性探針,并對(duì)反應(yīng)體系進(jìn)行優(yōu)化,初步建立ApoE基因的熒光分型方法；利用建立的分型方法對(duì)1049例樣本進(jìn)行檢測(cè),并用測(cè)序方法進(jìn)行驗(yàn)證,比較兩種方法的檢測(cè)結(jié)果,并對(duì)新方法進(jìn)行初步評(píng)價(jià)。結(jié)果1.通過(guò)對(duì)中國(guó)人群相關(guān)的17篇文獻(xiàn)進(jìn)行Meta分析,等位基因ε3合并OR值及95%可信區(qū)間為0.38(0.33,0.44),ε4為4.16(3.50,4.94)；基因型ε2/ε3為0.66(0.50,0.86),ε3/ε3為0.35(0.30,0.42),ε3/ε4為3.12(2.54,3.83),ε4/ε4為11.34(5.98,21.48)。敏感性分析和發(fā)表性偏倚評(píng)估結(jié)果顯示,Meta分析結(jié)果穩(wěn)定可靠。與其他人群相比,基因型ε2/ε4與AD的發(fā)生存在相關(guān)性,是中國(guó)人群中特有的風(fēng)險(xiǎn)基因型；而ε3/ε4、ε4/ε4則是所有人群的風(fēng)險(xiǎn)基因型。通過(guò)對(duì)不同人群的等位基因、基因型的OR值進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn),不同人群的等位基因、基因型均有較大差異。其中等位基因ε3在所有人群中均顯示為保護(hù)基因,但是亞洲國(guó)家高于高加索人群和非洲裔美國(guó)人群；而等位基因ε4在所有人群中均顯示為風(fēng)險(xiǎn)基因,亞洲國(guó)家AD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)高于高加索人群和非洲裔美國(guó)人群,同樣顯示出人種之間的差異。非洲裔美國(guó)人群的風(fēng)險(xiǎn)基因和風(fēng)險(xiǎn)基因型OR值均小于其他人群,說(shuō)明其患AD風(fēng)險(xiǎn)較低,這一結(jié)果似乎能夠部分解釋非洲裔美國(guó)人群患AD的比例低于其他人群。2.設(shè)計(jì)了ApoE基因分型的TaqMan-TAMRA特異性探針,建立了基因分型標(biāo)準(zhǔn)操作流程,并優(yōu)化了ApoE基因分型的反應(yīng)體系,從樣本DNA到獲得檢測(cè)結(jié)果可以在3小時(shí)內(nèi)完成；與測(cè)序方法相比,對(duì)于檢測(cè)的1049個(gè)樣本TaqMan-TAMRA分型方法與測(cè)序方法的準(zhǔn)確性為100%.結(jié)論1.綜上所訴,AopE基因多態(tài)性與AD的相關(guān)性在不同人群中而不同,因此對(duì)于不同人群的阿爾茨海默病的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估十分重要。在中國(guó)人群中,等位基因ε3為阿爾茨海默病的保護(hù)基因,ε4為阿爾茨海默病的風(fēng)險(xiǎn)基因；基因型ε2/ε3、 ε3/ε3為阿爾茨海默病的保護(hù)基因型,ε2/ε4、ε3/ε4、ε4/ε4為阿爾茨海默病的風(fēng)險(xiǎn)基因型。2.通過(guò)與直接測(cè)序法的比較,基于TaqMan-TAMRA探針技術(shù)的ApoE基因分型方法具有準(zhǔn)確性高、操作簡(jiǎn)便、操作時(shí)間短、結(jié)果直觀容易判讀的特點(diǎn),符合ApoE基因分型的臨床應(yīng)用要求。
【關(guān)鍵詞】：ApoE 阿爾茨海默病 Meta分析 TaqMan 基因分型
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R749.16
【目錄】：

• 縮略詞表6-8
• 摘要8-10
• Abstract10-12
• 第一章 阿爾茨海默病研究背景12-22
• 第一節(jié) 阿爾茨海默病12-13
• 第二節(jié) 阿爾茨海默病致病基因和易感基因13-18
• 2.1. APP基因13-14
• 2.2. PSEN1和PSEN2基因14-15
• 2.3. ApoE基因15-16
• 2.4. SORL1基因16
• 2.5. 其他基因16-18
• 第三節(jié) 基因分型方法18-21
• 3.1. 限制性?xún)?nèi)切酶酶切技術(shù)18
• 3.2. PCR技術(shù)18-19
• 3.3. 測(cè)序技術(shù)19
• 3.4. 熒光定量PCR法19-20
• 3.5. 高分辨率融解曲線20
• 3.6. 基因芯片20
• 3.7. 其他基因分型技術(shù)20-21
• 第四節(jié) 本研究的內(nèi)容、目的和意義21-22
• 第二章 ApoE基因多態(tài)性與阿爾茨海默病關(guān)系的Meta分析22-60
• 第一節(jié) 引言22-23
• 第二節(jié) 材料與方法23-27
• 2.1. 研究對(duì)象23
• 2.2. 文獻(xiàn)檢索23-24
• 2.3. 文獻(xiàn)入選和排除標(biāo)準(zhǔn)24-25
• 2.3.1. 文獻(xiàn)入選標(biāo)準(zhǔn)24
• 2.3.2. 文獻(xiàn)排除標(biāo)準(zhǔn)24-25
• 2.4. 文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)價(jià)25
• 2.5. 文獻(xiàn)信息提取25
• 2.6. Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)25
• 2.7. 異質(zhì)性檢驗(yàn)25
• 2.8. OR值和95%CI值計(jì)算25-26
• 2.9. 敏感性分析26
• 2.10. 發(fā)表偏倚評(píng)估26
• 2.11. 不同人群比較26-27
• 第三節(jié) 結(jié)果與分析27-57
• 3.1. 文獻(xiàn)篩選概況27-33
• 3.2. 文獻(xiàn)數(shù)據(jù)提取33-37
• 3.3. 等位基因及基因型頻率37-39
• 3.4. 中國(guó)人群Meta分析結(jié)果39-52
• 3.5. 不同人群比較與分析52-57
• 第四節(jié) 討論57-60
• 4.1. Hardy Weinberg平衡檢驗(yàn)57
• 4.2. Meta分析57-58
• 4.3. 不同人群基因頻率和基因型比例58
• 4.4. 不同人群OR值58-60
• 第三章 ApoE基因TaqMan分型方法建立60-77
• 第一節(jié) 引言60-61
• 第二節(jié) 材料與方法61-67
• 2.1. 樣本材料61
• 2.2. 儀器和試劑61-62
• 2.3. 基因組DNA提取62
• 2.4. TaqMan-TAMRA探針設(shè)計(jì)62-64
• 2.5. 檢測(cè)與結(jié)果分析64-65
• 2.6. 測(cè)序法驗(yàn)證結(jié)果65-67
• 第三節(jié) 結(jié)果與分析67-76
• 3.1. DNA提取概況67
• 3.2. TaqMan-TAMRA分型方法建立與優(yōu)化67-74
• 3.2.1. 引物和探針的驗(yàn)證67-71
• 3.2.2. Taqman反應(yīng)條件的優(yōu)化71-73
• 3.2.3. 質(zhì)控體系的建立73-74
• 3.3. 檢測(cè)與分型結(jié)果74-75
• 3.4. 測(cè)序法驗(yàn)證結(jié)果75-76
• 第四節(jié) 討論76-77
• 第四章 總結(jié)77-78
• 參考文獻(xiàn)78-94
• 研究成果94-95
• 致謝95-96

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 金東;于波;葉長(zhǎng)蕓;劉凱;侯雪新;孫渭歌;徐建國(guó);李振軍;;屎腸球菌TaqMan熒光定量PCR檢測(cè)方法的研究[J];中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào);2013年06期

  本文關(guān)鍵詞：中國(guó)人群阿爾茨海默病ApoE基因的Meta分析及TaqMan-TAMRA探針基因分型方法的建立，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：343233