研究背景β淀粉樣蛋白（amyloid-β,Aβ）存在單體、寡聚物、原纖維、纖維等多種聚集形式,Aβ斑塊沉積作為AD發(fā)病的重要病理學標志,主要以纖維形式聚集而成。已有大量文獻證實Aβ寡聚物對神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞有明確毒性作用,而Aβ纖維對于星形膠質(zhì)細胞的炎癥誘導作用尚不明確。在AD模型鼠腦中,星形膠質(zhì)細胞的形態(tài)和基因表達發(fā)生的顯著變化導致突觸連接中斷,神經(jīng)遞質(zhì)穩(wěn)態(tài)失衡;Aβ斑塊附近的星形膠質(zhì)細胞變得活躍,發(fā)生反應性增生,反應性星形膠質(zhì)細胞由此產(chǎn)生更多聚胺降解的有毒分子。異常折疊聚集的Aβ可以與星形膠質(zhì)細胞上的模式識別受體結(jié)合,觸發(fā)以炎癥介質(zhì)釋放為特征的固有免疫反應。Aβ誘導的炎癥反應可通過星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞分泌的各種細胞因子和趨化因子激活細胞的各種信號通路導致神經(jīng)退行性病變。因此Aβ纖維誘導的星形膠質(zhì)細胞炎癥反應及對神經(jīng)元的影響是AD發(fā)病機制研究的重要方向。研究目的本研究旨在探討Aβ纖維誘導星形膠質(zhì)細胞活化和增殖所產(chǎn)生的炎癥反應,包括iNOS、TNF-α、IL-6、IL-1β炎癥介質(zhì)的表達和MAPKs/NF-κB相關(guān)炎癥通路蛋白的變化,及其對神經(jīng)元的影響。旨在探討Aβ纖維誘導的星形... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學廣東省

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖３－１－２免疫熒光檢測不同濃度Ａｐ纖維對星形膠質(zhì)細胞形態(tài)的影響（１００Ｘ）??Ｆｉｇｕｒｅ?３－１－２?Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ?ｃｈａｎｇｅｓ?ｏｆ?Ａ（３?ｆｉｂｅｒｓ?ｏｎ?ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ?（１００Ｘ）??

?項士學位論文???１６０－１?…??〇?１４０－?ｎｒ??Ｉ?１２０－??〇Ａｐ〇Ｈｉ?ｍ?１??０?１５?３０?＾?、＜ｄ?＾??圖３－１－３?ＷＢ檢測不同濃度ＡＰ纖維對星形膠質(zhì)細胞ＧＦＡＰ表達的影響??Ｆｉｇｕｒｅ?３－１－３?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?Ａｐ?ｆｉｂｅｒｓ?ｏｎ?ＧＦＡＰ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ?ｂｙ?ＷＢ??本節(jié)研究通過ＣＣＩＣ－８法檢測不同濃度下Ａ（３纖維對星形膠質(zhì)細胞存活率，篩??選出合適的Ａｐ纖維作用濃度（１５ｐｍｏｌ／Ｌ、３０ｐｍ〇ｌ／Ｌ）作為后續(xù)研宄的依據(jù)，結(jié)??果提示直接法和間接法均對星形膠質(zhì)細胞具有活化作用，且Ａ（３纖維刺激的星形??膠質(zhì)細胞上清（間接法）在１０－３（Ｖｍ〇ｌ／Ｌ的濃度范圍內(nèi)以濃度依賴方式間接參與??了星形膠質(zhì)細胞的活化并在１５－３０ｐｍ）ｌ／Ｌ明顯增強了?ＡＰ纖維對星形膠質(zhì)細胞的??活化。通過免疫熒光法檢測不同濃度ＡＰ纖維對星形膠質(zhì)細胞形態(tài)，觀察到ＡＰ纖??維作用后的星形膠質(zhì)細胞在形態(tài)上呈現(xiàn)活化增殖的改變。ＷＢ檢測不同濃度ＡＰ??纖維對星形膠質(zhì)細胞ＧＦＡＰ表達提示了?Ａ（３纖維濃度與星形膠質(zhì)細胞的ＧＦＡＰ蛋白??表達成正比。綜合以上結(jié)果說明，ＡＰ纖維在一定濃度下促進了星形膠質(zhì)細胞的??活化和增殖。??３．２?Ａ（ｉ纖維促進了星形膠質(zhì)細胞炎癥介質(zhì)ＴＮＦ－ａ、ＩＬ－ｉｐ、ＩＬ－６和??ｉＮＯＳ的表達??將種于６孔板的第ＩＶ代星形膠質(zhì)細胞予無血清的ＤＭＥＭ／Ｆ１２培養(yǎng)基預處理??１２ｈ，隨后分別以直接法及間接法作用于預處理后的星形膠質(zhì)細胞。直接法：含??有不同濃度的Ａ（３纖維（Ｏ（ｉｍｏｌ／Ｌ、１５｜ｉｍｏｌ／Ｌ、３０｜ｉ

下降且具有統(tǒng)計??學意乂（／？星膠－神經(jīng)元１５＾１１１。丨／１＜０．０１），神經(jīng)兀的存活率在由３０（１１１１〇１／１＾八［３纖維濃度刺激??下的星形膠質(zhì)細胞上清處理后明顯下降，較星膠４申經(jīng)元１５＾ｉｍｏｌ／Ｌ組的存活率更??為低下（／？雖？神經(jīng)元３Ｇｆｉｍｏｌ／Ｌ＜０．０１）。以星股－神經(jīng)兀０｜ＪｉＴｌ〇ｌ／Ｌ為對照組，＃＾？７＜０．０５，??＜０．０１，?—ｐ＜０．００１〇??１００ｎ??；■芊??�。矗埃�?Ｉ??２０－?■??〇??ｚ?〇Ｊ￣＾??，???Ｉ￣—??圖３－４－１?ＣＣＫ－８檢測Ａｐ纖維誘導的星形膠質(zhì)細胞對神經(jīng)元存活率的影響??Ｆｉｇｕｒｅ?３－４－１?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?Ａｐ?ｆｉｂｅｒ－ｉｎｄｕｃｅｄ?ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｖｉａｂｉｌｉｔｙ?ｏｆ?ｎｅｕｒｏｎｓ?ｂｙ?ＣＣＫ－８??由于動物腦內(nèi)組織成分復雜，其組成細胞絕大部分為星形膠質(zhì)細胞和神經(jīng)??元，但由于二者相互交織在一起，目前的研宂手段很難將其分離開。為將研宄??對象準確定位于星形膠質(zhì)細胞與神經(jīng)元，進一步證明上述實驗方法的科學性、??實驗結(jié)果的可靠性，建立１種利用Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ板形成的星形膠質(zhì)細胞－神經(jīng)元的細胞??共培養(yǎng)體系，并在此體系基礎上對原代神經(jīng)元進行ＡｎｎｅｘｉｎＶ－ＦＩＴＣ／ＰＩ細胞凋亡雙??染法檢測原代神經(jīng)元的凋亡情況，與普通培養(yǎng)基加／換藥方法產(chǎn)生的ＣＣＫ－８細胞??活性檢測結(jié)果進行一致性比較。??將第ＩＶ代星形膠質(zhì)細胞以１０％血清的ＤＭＥＭ／Ｆ１２培養(yǎng)基接種于Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ上??室中，待培養(yǎng)至細胞鋪滿上室的８０％－９０％?（此時下室中同為無細胞接種的１０％血??清ＤＭＥＭ／Ｆ１２培養(yǎng)基），后以


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