衰老（senescence）是機體的細胞、組織與器官在結(jié)構(gòu)和功能上出現(xiàn)的不可逆退化和生理功能喪失,最終導(dǎo)致衰老相關(guān)疾病的發(fā)生。阿爾茨海默癥（Alzheimer’s disease,AD）是一種常見的年齡相關(guān)的神經(jīng)退行性疾病,嚴(yán)重影響人類健康。臍帶間充質(zhì)干細胞（human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells,h UC-MSCs）具有自我更新和多向分化的潛能,能夠修復(fù)受損組織,為AD等神經(jīng)退行性疾病的治療帶來希望。但是,隨著傳代次數(shù)的增加,體外培養(yǎng)的h UC-MSCs逐漸呈現(xiàn)衰老細胞特征,表現(xiàn)為增殖分化能力變?nèi)酢⒏尚越档?嚴(yán)重影響其治療效果。因此,無論是在體內(nèi)還是體外提高干細胞活性并延緩干細胞衰老是增強干細胞療效的關(guān)鍵。MG53蛋白（Mitsugumin53 protein,MG53）是TRIM（Tripartite motif,TRIM）家族蛋白的一位成員,在細胞和組織損傷修復(fù)中發(fā)揮重要的作用。研究表明人源重組的MG53蛋白（Recombinant human MG53 protein,rh MG53）可以保護骨髓間充質(zhì)干細胞抵抗低... 

【文章來源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

MG53對hUC-MSCs增殖和遷移的影響

第一部分：MG53蛋白在體外和體內(nèi)延緩hUC-MSCs的衰老16圖1.2MG53對hUC-MSCs周期和凋亡的影響A：流式檢測細胞周期；B：周期統(tǒng)計圖；C：AnnexinV/PI染色檢測細胞凋亡；D：凋亡細胞統(tǒng)計圖。*：與P5相比，P<0.05；#：與P10相比，P<0.05；：與P15相比，P<0.05。1.2.3MG53蛋白延緩hUC-MSCs的衰老前期研究表明MG53可以促進hUC-MSCs的增殖和遷移，并抑制凋亡。接下來我們重點觀察MG53預(yù)處理對干細胞衰老的影響。衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)的表達是細胞衰老的標(biāo)志物。我們發(fā)現(xiàn)隨著hUC-MSCs傳代次數(shù)的增加，P10和P15hUC-MSCs的SA-β-Gal陽性細胞數(shù)顯著增加（P<0.05），而MG53處理之后SA-β-Gal陽性細胞數(shù)明顯減少（P<0.05，圖1.3A和B）。此外，衰老細胞還表現(xiàn)為細胞形態(tài)變化和廣泛的染色質(zhì)重構(gòu)，最顯著的是衰老相關(guān)異染色質(zhì)簇集(SAHF)的形成。DAPI染色后激光共聚焦顯微鏡觀察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與P5代的hUC-MSCs相比，P10和P15hUC-MSCs胞體增大并呈扁平形狀、細胞核面積明顯變大且核內(nèi)異染色質(zhì)聚集程度增加；與相應(yīng)的未處理組相比，MG53處理能夠減小細胞核面積變大并減輕SAHF的形成（圖1.3C-F，P<0.05）。核纖層蛋白B1(LaminB1)是可以維持細胞核骨架的完整性進而影響染色質(zhì)分布參與

第一部分：MG53蛋白在體外和體內(nèi)延緩hUC-MSCs的衰老19圖1.4MG53對衰老細胞中衰老相關(guān)基因及SASP表達的影響A：Westernblot檢測MG53蛋白在衰老干細胞中的表達；B：Westernblot檢測各組衰老細胞中衰老相關(guān)基因P16、P21、P53、pCNA、Sirt1的表達；C：衰老相關(guān)基因P16、P21、P53、pCNA、Sirt1的灰度分析；D：qRT-PCR檢測各組衰老細胞中衰老相關(guān)基因P16、P21、P53、Sirt1；E：qRT-PCR檢測各組衰老細胞中炎癥相關(guān)基因TNF-α、IL-6、IL-8、IL-1β的表達；F：炎癥芯片檢測各組細胞炎癥因子釋放的變化。*：與P5相比P<0.05；，#：與P15相比P<0.05。1.2.5MG53降低衰老hUC-MSCs中氧化應(yīng)激水平我們進一步檢測MG53對衰老的hUC-MSCs中氧化應(yīng)激各個指標(biāo)的影響。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Cellular senescence: from anti-cancer weapon to anti-aging target[J]. Lifeng Yuan,Peter B.Alexander,Xiao-Fan Wang.  Science China（Life Sciences）. 2020(03)

碩士論文
[1]SA/Col/SDF-1水凝膠負載BMSCs對腦損傷大鼠的神經(jīng)修復(fù)作用[D]. 周建康.鄭州大學(xué) 2019
[2]MS-275聯(lián)合順鉑對食管鱗癌的抗腫瘤作用[D]. 劉騰飛.鄭州大學(xué) 2019



本文編號：3254676