流行病學研究顯示,過量飲酒對認知功能有損傷作用,并可能增加神經(jīng)退行性疾病如阿爾茨海默病的患病風險。在人體內,大部分攝入乙醇在肝臟細胞中通過乙醇脫氫酶的代謝作用生成乙醛,繼而被乙醛脫氫酶（acetaldehyde dehydrogenase,ALDH）2代謝為乙酸。約30%-50%的亞洲人為aldh2基因缺陷型。相對于攜帶aldh2野生型基因的人群來說,aldh2基因缺陷型人群飲酒后血液中乙醛的含量更高。作為毒性最強的乙醇代謝物,乙醛在過量飲酒引起的神經(jīng)毒性中起著關鍵性的作用,但其機制尚不明確。本論文利用細胞模型對乙醛誘導的神經(jīng)細胞毒性及其分子機制進行詳細探討,為預防過量飲酒導致的神經(jīng)毒性及相關疾病提供潛在的藥物靶點。本論文利用trypan blue染色及凋亡實驗研究了乙醛對神經(jīng)細胞的毒性作用,結果表明乙醛顯著抑制細胞存活率,并能夠誘導細胞凋亡。利用蛋白印跡實驗對調控細胞生存的內在分子機制進行探究,結果顯示乙醛顯著抑制細胞生存相關通路中關鍵蛋白Akt及其下游CREB的活化,降低ERK的激活水平,調節(jié)Bcl-2家族蛋白水平。對胞內活性氧進行特異性標記的實驗結果表明,乙醛誘導胞內活性氧水平顯... 

【文章來源】：哈爾濱工業(yè)大學黑龍江省 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：157 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 課題研究背景及意義
    1.2 酒精在人體內的代謝及危害
        1.2.1 乙醇及乙醛在人體內的代謝
        1.2.2 過度飲酒與神經(jīng)系統(tǒng)損傷
    1.3 細胞凋亡及相關信號通路
        1.3.1 細胞凋亡
        1.3.2 凋亡相關信號通路
    1.4 線粒體損傷及其機制
        1.4.1 線粒體損傷與線粒體動態(tài)平衡
        1.4.2 線粒體損傷與氧化應激
        1.4.3 線粒體損傷與Ca~(2+)信號通路
        1.4.4 線粒體損傷與自噬
    1.5 本課題的主要研究內容及技術路線
        1.5.1 主要研究內容
        1.5.2 技術路線
第2章 實驗材料和研究方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 研究對象
        2.1.2 實驗藥品
        2.1.3 實驗儀器
    2.2 主要溶液及其配制
        2.2.1 細胞培養(yǎng)相關溶液及其配制
        2.2.2 Western Blot相關溶液及其配制
    2.3 細胞培養(yǎng)及處理
    2.4 Trypan blue染色實驗
    2.5 Crystal violet實驗
    2.6 MTT細胞活性實驗
    2.7 Hoechst33258細胞凋亡實驗
    2.8 細胞內ROS水平檢測
        2.8.1 細胞內總ROS檢測實驗
        2.8.2 線粒體ROS檢測實驗
    2.9 線粒體相關實驗
        2.9.1 線粒體膜電位檢測實驗
        2.9.2 ATP水平檢測實驗
        2.9.3 線粒體形態(tài)檢測實驗
        2.9.4 線粒體質量檢測實驗
        2.9.5 線粒體分離實驗
        2.9.6 線粒體與溶酶體共定位實驗
    2.10 Ca~(2+)水平檢測實驗
    2.11 Western blot實驗
        2.11.1 蛋白樣品的處理
        2.11.2 Tris-Glycine-SDS-PAGE凝膠電泳及轉膜
        2.11.3 抗體孵育與顯影
    2.12 統(tǒng)計學分析方法
第3章 乙醛對神經(jīng)細胞凋亡的促進作用
    3.1 引言
    3.2 乙醛的細胞毒性
        3.2.1 乙醛對神經(jīng)細胞存活率的影響
        3.2.2 乙醛對神經(jīng)細胞凋亡的影響
    3.3 乙醛對Akt-CREB信號通路的調節(jié)
    3.4 乙醛對MAPK家族蛋白激活的調節(jié)
    3.5 乙醛引起神經(jīng)細胞ROS水平的升高
    3.6 抗氧化劑抑制乙醛誘導的ROS水平上升及細胞毒性
        3.6.1 抗氧化劑抑制乙醛誘導的ROS水平上升
        3.6.2 抗氧化劑抑制乙醛誘導的凋亡現(xiàn)象
        3.6.3 抗氧化劑對線粒體凋亡途徑蛋白水平的調控
    3.7 本章小結
第4章 乙醛對神經(jīng)細胞線粒體的損傷作用
    4.1 引言
    4.2 乙醛對神經(jīng)細胞線粒體功能的影響
        4.2.1 乙醛對細胞活性的影響
        4.2.2 乙醛對線粒體膜電位的影響
        4.2.3 乙醛對細胞ATP合成的影響
    4.3 乙醛對線粒體形態(tài)的影響
    4.4 乙醛對細胞及線粒體ROS水平的影響
    4.5 乙醛對胞內Ca~(2+)水平的影響
    4.6 本章小結
第5章 乙醛誘導線粒體損傷的內在機制
    5.1 引言
    5.2 乙醛對線粒體融合相關蛋白的影響
    5.3 乙醛對線粒體分裂相關蛋白的影響
        5.3.1 乙醛對全細胞蛋白中Drp1活化水平的影響
        5.3.2 乙醛對Drp1亞細胞定位的影響
    5.4 抗氧化劑對乙醛細胞毒性的抑制作用
        5.4.1 抗氧化劑對ROS水平的抑制作用
        5.4.2 抗氧化劑對細胞活性的促進作用
        5.4.3 抗氧化劑對Drp1蛋白活化水平的抑制作用
    5.5 JNK和p38 MAPK對Drp1活化水平的促進作用
        5.5.1 抗氧化劑對JNK和p38 MAPK激活水平的抑制作用
        5.5.2 JNK和p38 MAPK抑制劑對Drp1磷酸化的抑制作用
    5.6 Ca~(2+)信號通路在乙醛誘導細胞毒性中的作用
        5.6.1 BAPTA-AM對胞內Drp1活化水平的抑制
        5.6.2 KN-93對乙醛細胞毒性的影響
        5.6.3 抗氧化劑對Ca~(2+)信號通路的阻斷作用
    5.7 本章小結
第6章 乙醛對線粒體自噬的影響
    6.1 引言
    6.2 乙醛對自噬水平的影響
        6.2.1 乙醛對線粒體自噬的誘導
        6.2.2 乙醛對自噬相關蛋白水平的影響
        6.2.3 乙醛對線粒體自噬相關蛋白水平的影響
    6.3 抗氧化劑對線粒體自噬現(xiàn)象的抑制作用
        6.3.1 抗氧化劑對自噬相關蛋白水平的影響
        6.3.2 抗氧化劑對線粒體自噬相關蛋白水平的影響
    6.4 本章小結
結論
展望
創(chuàng)新點
參考文獻
附錄
攻讀學位期間發(fā)表的學術論文及其他成果
致謝
個人簡歷



本文編號：3203615