隨著人口老齡化程度的不斷增加,阿爾茲海默癥（Alzheimer’s disease,AD）的患病率也逐漸上升,其主要病理特征為大腦內(nèi)出現(xiàn)大量老年斑（senile plaques,SP）,神經(jīng)元內(nèi)出現(xiàn)纖維纏結(jié)（neuronal fiber tangles,NFT）。阿爾茲海默癥的具體漸上升,其主要病理特征為大腦內(nèi)出現(xiàn)大量老年斑（senile plaques,SP）,神經(jīng)病因至今尚未被解釋清楚,研究表明患者的腦內(nèi)Aβ1-42聚集,尤其是海馬體中的Aβ1-42表達量明顯增加,且與AD的進程有明顯關(guān)系。抑制Aβ_1-42的毒性作用可能是保護海馬神經(jīng)元減少損傷的重要病理機制。β-淀粉樣蛋白（amyloidβ-protein,Aβ）是一種極易發(fā)生聚集的多肽,腦內(nèi)的Aβ發(fā)生聚集會形成寡聚體和纖維體,其中眾多的研究表明Aβ_1-42寡聚體具有更強的毒性,不僅能夠激活小膠質(zhì)細胞引發(fā)炎癥,還能直接損傷海馬神經(jīng)元,最終導致學習記憶能力下降。而在眾多神經(jīng)退行性疾病中,大腦中的大麻素受體2（CB₂R）的表達均明顯上升,因此認為CB₂

【文章來源】：青島大學山東省

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

β1-42處理7天誘導海馬神經(jīng)元凋亡Fig.1ChronicAβ1-42Aβ1-42treatmentfor7daysinducedapoptosisofhippocampalneuronsFlowcytometermeasurementsshowedachangeofcellsurvivalrateincontrol(A)andAβ1-42-treated(B)

青島大學碩士學位論文162.慢性Aβ1-42處理誘導凋亡模型中CB2R的mRNA的變化為了檢測CB2R在Aβ1-42處理的模型中的表達是否增加，我們使用qRT-PCR技術(shù)檢測了海馬神經(jīng)元中CB2R的mRNA表達。結(jié)果顯示，與對照組（無Aβ1-42處理）比較，在Aβ1-42處理的作用下，CB2R的mRNA表達明顯增加，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.001）。表明CB2R在Aβ1-42誘導的海馬神經(jīng)元凋亡中可能起到某些作用（圖2）。圖2，Aβ1-42誘導的海馬神經(jīng)元中CB2R的mRNA表達Fig2.TheexpressionofCB2RmRNAinhippocampalneuronsTheexpressionofCB2RmRNAinAβgroupwasincreasedsignificantlycomparedwithControlgroup.Datarepresentsthemean±S.E.Mof4independentexperiments（***P<0.001）3.JWH133對Aβ1-42誘導的凋亡模型的作用乳酸脫氫酶（LDH）在細胞膜受損時，會釋放到細胞外，由于該酶的性質(zhì)比較穩(wěn)定，可以檢測培養(yǎng)液中的LDH的含量作為確定細胞受損死亡指標。為了探討CB2R選擇性激動劑JWH133在Aβ1-42誘導的海馬神經(jīng)元凋亡中是否起作用，我們設計了4個分組進行實驗：對照組（不作任何處理），Aβ組，Aβ+JWH133組，Aβ+AM630（CB2R抑制劑）+JWH133組，所有實驗組均使用Aβ處理7天，之后使用LDH試劑盒檢測細胞損傷率。結(jié)果顯示，Aβ組與對照組相比，細胞凋亡率明顯增高(P<0.01)；使用JWH133（10μM）提前50min預處理細胞后再進行Aβ1-42處理。結(jié)果表明，Aβ+JWH133組的細胞凋亡率相比于Aβ組明顯降低，差別具有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；而加入CB2R受體阻斷劑AM630抑制CB2R的激活后，JWH133的保護作用消失，細胞死亡率又明顯升高，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。結(jié)果表明，CB2R激動劑JWH133激活CB2R后可以抑制Aβ1-42誘導的海馬神經(jīng)元凋亡（圖3）。

結(jié)果17圖3.CB2R激動劑JWH133抑制Aβ1-42誘導的海馬神經(jīng)元凋亡Fig3.CB2RagonistJWH133inhibitedAβ1-42-inducedhippocampalneuronapoptosisCB2Ragonist,JWH133protectedhippocampalneuronsagainsttheAβ1-42-inducedLDHenhancementinhippocampalneuronalcultures.Inrepetitivefourexperiments,culturemediumLDHlevelsweremeasuredin4experimentalgroups,control,Aβ,Aβ+JWH133,Aβ+AM630+JWH133groups.Comparedtocontrol,theAβ1-42chronictreatmentincreasedLDHlevel,andAβ+JWH133preventedtheLDHelevation,whileAM630abolishedJWH133’seffects.Datarepresentsthemean±S.E.Mof4independentexperiments（**P<0.01；##P<0.01；^^P<0.01）4.JWH133對Aβ1-42誘導的凋亡模型中線粒體膜電位的影響線粒體膜電位△Ψm是能夠反映線粒體功能是否正常的關(guān)鍵指標，是線粒體進行氧化磷酸化、產(chǎn)生三磷酸腺苷的基礎(chǔ)，△Ψm一旦發(fā)生異常，這表明細胞線粒體功能發(fā)生障礙，使用流式細胞術(shù)檢測Aβ1-42誘導的海馬神經(jīng)元凋亡模型中△Ψm的變化以及加入JWH133后是否能夠抑制該變化。結(jié)果顯示，與對照組相比，Aβ組的△Ψm明顯下降(P<0.01），Aβ+JWH133組與Aβ1-42組相比(P<0.01），Ψm明顯上升。Aβ+AM630+JWH133組與Aβ+JWH133組相比，△Ψm明顯下降（P<0.01）,差別具有統(tǒng)計學意義（圖4）。

【參考文獻】：
博士論文
[1]調(diào)控CB2R-PI3K/AKT通路對幼年癲癇大鼠星形膠質(zhì)細胞保護作用的機制研究[D]. 曹慶雋.中國醫(yī)科大學 2018



本文編號：3121799