目的:本研究旨在探討mi RNA-451/MIF及其下游信號(hào)通路在血腦屏障損傷、神經(jīng)炎癥激活及神經(jīng)元損傷中對(duì)帕金森病認(rèn)知障礙的影響,闡明其通過(guò)神經(jīng)血管單元在帕金森病認(rèn)知功能障礙中的作用與機(jī)制。方法:采用Mpp⁺誘導(dǎo)MN9D細(xì)胞構(gòu)建細(xì)胞帕金森病模型及MPTP誘導(dǎo)小鼠構(gòu)建動(dòng)物帕金森病模型,并采用Morris水迷宮測(cè)試評(píng)估動(dòng)物認(rèn)知功能,根據(jù)認(rèn)知功能障礙程度進(jìn)行分組,分為NC組、Control組、MPTP組-1、MPTP組-2。采用熒光定量PCR測(cè)定mi RNA-451的表達(dá)水平,探究mi RNA-451與帕金森病認(rèn)知功能障礙的相關(guān)性,并通過(guò)免疫組化技術(shù)測(cè)定多巴胺能神經(jīng)元酪氨酸羥化酶（Tyrosine Hydroxylase,TH）損傷。采用慢病毒轉(zhuǎn)染MN9D細(xì)胞,在細(xì)胞中過(guò)表達(dá)及沉默mi RNA-451后,采用Mpp⁺誘導(dǎo)帕金森病模型,使用Western Blot測(cè)定mi RNA-451/MIF表達(dá)水平改變后MIF蛋白和TH的表達(dá)水平。采用MPTP腹腔注射和側(cè)腦室立體定向注射mi RNA-451 antagomir及mi RNA-451 antag... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

小鼠黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元受損情況

第二章miRNA-451在MPTP/Mpp+誘導(dǎo)的帕金森病模型中的變化31圖1.2平均潛伏期變化曲線(xiàn)，注射MPTP組比未注射MPTP組曲線(xiàn)變化較為平緩。**P<0.01vsNCgroup,#P<0.01vsControlgroup,P<0.01vsMPTP-2group。圖1.3水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果柱狀圖圖A表示Morris水迷宮測(cè)試各組小鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的比較。**P<0.01vsNCgroup。圖B表示各組小鼠在水迷宮測(cè)試時(shí)的最大游泳速度，各組游泳速度無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。圖C表示腹腔注射MPTP后各組小鼠的第三天的潛伏期的對(duì)比；**P<0.01vsNCgroup,****P<0.0001vsNCgroup，#P<0.01vsMPTP-23.1.4miRNA-451在MPTP誘導(dǎo)帕金森病小鼠與認(rèn)知障礙的相關(guān)性

第二章miRNA-451在MPTP/Mpp+誘導(dǎo)的帕金森病模型中的變化33圖1.5TH免疫熒光。由免疫熒光結(jié)果可見(jiàn)，本實(shí)驗(yàn)使用的MN9D的TH免疫熒光陽(yáng)性，確實(shí)是小鼠種屬的多巴胺能神經(jīng)元細(xì)胞。（右下角標(biāo)尺：75μm）除了在研究帕金森病動(dòng)物模型的miRNA-451水平的變化，我們還探討了細(xì)胞帕金森病模型(MN9D細(xì)胞在MPP+處理下)miRNA-451的表達(dá)情況。MPTP不能直接被MN9D細(xì)胞攝取，在體內(nèi)注射MPTP后，MPTP透過(guò)血腦屏障，再由神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞處理，轉(zhuǎn)化為MPP+，再于大腦內(nèi)進(jìn)行相關(guān)的病理生理反應(yīng)，是MPTP活性成分。因此，帕金森病細(xì)胞模型常用MPP+處理。相比于正常組，MN9D細(xì)胞被MPP+處理24小時(shí)后，miRNA-451的表達(dá)水平顯著上升。結(jié)果如圖1-3所示。以U6基因作為內(nèi)參，將正常組MN9D細(xì)胞的miRNA-451校正為1，相比于正常組，MN9DMPP+組miRNA-451表達(dá)水平顯著增加。圖1.6表示MN9D正常細(xì)胞與經(jīng)Mpp+處理后的miRNA451水平，****P<0.001。


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