目的本課題旨在研究Alzheimer病(AD)和血管性癡呆(Vasculardementia,VD)患者外周血中MIF、MCP-1的表達水平及其與病情程度、影響因素的關系。在此基礎上,通過反復夾閉、再通雙側(cè)頸總動脈同時腹腔注射硝普鈉法制造VD大鼠模型,觀察VD大鼠海馬組織MIF、MCP-1的表達及變化,探討MIF、MCP-1在AD及VD中的作用及意義。 方法 第一章AD及VD患者外周血MIF、MCP-1的表達及其變化 1.臨床資料:收集我院2006年6月至2008年1月的門診及住院AD患者64例,男性34例,女性30例,年齡53～90(75.84±8.11)歲。VD患者37例,男28例,女9例,年齡56～91(74.35±8.93)歲。對照組為同期門診體檢者50例,男性29例,女性21例,年齡53～87(72.71±9.99)歲。對照組與AD及VD組在年齡、危險因素和合并癥等方面相匹配,均排除心、肝和腎等器質(zhì)性病變,以及感染、自身免疫和惡性腫瘤等疾病。 2.AD,VD患者以及正常對照者,均進行MMSE、ADL、HIS、GDS及抑郁焦慮量表檢查,并收集臨床和實驗室資料,均于晨起空腹抽血。測定血漿MIF、MCP-1濃度參照ELISA試劑盒說明書操作。離心收集外周血單個核細胞(PBMC),其MIF、MCP-1 mRNA表達水平用熒光定量PCR檢測。 3.用SPSS11.5 for windows軟件進行統(tǒng)計學分析,計量數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差((?)±s)表示,多個獨立樣本的比較用單因素方差分析;計數(shù)資料用分數(shù)表示,組間比較用x~2檢驗,單因素相關性采用Spearman分析法,多因素回歸采用多元逐步回歸分析法,F_(引入)=3.84,F_(刪除)=2.71。以P＜0.05為差異顯著性檢驗界限 第二章VD大鼠模型海馬組織MIF、MCP-1的表達變化 1.動物準備:二十周齡Wistar大鼠,體重300±20g,雌雄各半,由廣州中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供,寄養(yǎng)于廣東省人民醫(yī)院醫(yī)學研究中心動物中心。 2.通過反復夾閉、再通雙側(cè)頸總動脈同時腹腔注射硝普鈉制造VD大鼠模型,經(jīng)Morris水迷宮檢驗大鼠的學習、記憶功能來驗證模型的成功建立。按模型組、假手術組、對照組分為3組,每組8只,手術前后均進行Morris水迷宮檢驗。一周后處死大鼠,取腦組織,在海馬區(qū)周圍多點取材,每份標本一半液氮保存,用于提取蛋白及mRNA;另一半用10%中性緩沖甲醛溶液保存,制做蠟塊,行HE染色和免疫組化。 3.運用SPSS11.5統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計處理,實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(x±s)表示。定向航行實驗逃避潛伏期的測量結(jié)果使用重復測量數(shù)據(jù)的多因素方差分析�？臻g探索實驗結(jié)果使用單因素方差分析。其余統(tǒng)計學處理,同第一章。 結(jié)果 第一章AD及VD患者外周血MIF、MCP-1的表達及其變化 1.MIF、MCP-1血漿的濃度和PBMC mRNA的表達水平:VD組＞AD組＞對照組,AD及VD組均高于對照組(P＜0.018),差異有統(tǒng)計學意義;VD組稍高于AD組,但差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.102)。 2.根據(jù)簡易精神狀況檢查量表(MMSE)評分(重度組≤10分,中度組11分～20分,輕度組21分～24分)及總體衰退量表(GDS)評分(重度組6～7級,中度組4～5級,輕度組3級)評判患者的病情程度,若兩者評分不一致時取較嚴重的等級。將AD患者分為重度組18例,中度組33例和輕度組13例。VD患者分為重度組16例,中度組16例和輕度組5例。 AD及VD患者3組不同嚴重程度患者MIF、MCP-1血漿的濃度和PBMC mRNA的表達水平的差異均有統(tǒng)計學意義。重度組顯著高于輕中度組,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.041);中度組稍高于輕度組,但差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.100)(P＞0.100)。 3.經(jīng)逐步多元回歸分析顯示:MIF蛋白濃度與MMSE評分、膽固醇、C反應蛋白、MIF mRNA表達水平相關;MCP-1蛋白濃度與MMSE評分、收縮壓、MCP-1mRNA表達水平相關;MIF、MCP-1蛋白濃度與與性別、年齡、高血壓病史、糖尿病史、高血脂病史、吸煙史、酗酒史、血沉、舒張壓、空腹血糖、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、葉酸、維生素B12均無明顯相關。 4.AD及VD患者MIF、MCP-1的表達與MMSE評分的相關分析:AD組血漿MIF、MCP-1的濃度(rMIF=-0.415,rMCP-1=-0.366)和PBMC mRNA的表達水平(rMIF=-0.47,rMCP-1=-0.325)均與MMSE評分呈負相關(P＜0.009)。VD組血漿MIF、MCP-1的濃度(rMIF=-0.516,rMCP-1=-0.396)和PBMC MIF mRNA的表達水平(rMIF=-0.578,rMCP-1=-0.505)均與MMSE評分亦呈負相關(P＜0.015)。 第二章VD大鼠模型海馬組織MIF、MCP-1的表達變化 1.記憶能力測定:通過Morris水迷宮檢測大鼠記憶能力,結(jié)果發(fā)現(xiàn)經(jīng)過訓練己學會游迷宮的各組大鼠中,模型組大鼠學習、記憶能力有顯著的降低:在定向航行試驗中,模型組與假手術組、對照組相比,逃避潛伏期顯著延長(P=-0.000);在空間探索試驗中,模型組在原平臺象限跨越平臺次數(shù)比假手術組和對照組顯著減少(P＜0.007)。但假手術組和對照組之間在這兩項實驗中的差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.359)。 2.病理學檢查結(jié)果:HE染色,200倍光鏡下對照組及假手術組大鼠海馬CA1區(qū)大錐體細胞排列緊密而規(guī)整,細胞核圓而大,核仁清晰。模型組大鼠海馬CA1區(qū)錐體細胞層幾乎完全脫失,出現(xiàn)大量炎性細胞浸潤,亦可見錐體細胞層次斷裂,神經(jīng)細胞脫失現(xiàn)象明顯,且細胞核體積變小,呈核固縮現(xiàn)象。 3.免疫組化結(jié)果:與假手術組、對照組大鼠相比,模型組大鼠海馬組織MIF、MCP-1的陽性表達增多。 4.應用蛋白免疫印跡和熒光定量PCR技術檢測,與假手術組和對照組相比,模型組大鼠海馬組織MIF、MCP-1蛋白含量及其mRNA的表達水平增高(P＜0.049),但假手術組和對照組之間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.681)。 結(jié)論 1.AD及VD患者外周血MIF、MCP-1蛋白和mRNA表達水平升高,提示MIF、MCP-1參與AD及VD的發(fā)病過程,炎性反應可能是與AD及VD的發(fā)病機制之一。 2.AD及VD患者病情越重MIF、MCP-1血漿濃度和PBMC mRNA表達水平越高,提示MIF、MCP-1血漿濃度和PBMC mRNA表達水平可能成為預測AD及VD病情程度的分子生物學指標,并可能對無創(chuàng)性動態(tài)監(jiān)測AD及VD病情進展具有臨床意義。 3.多元逐步回歸分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)MIF蛋白濃度與MMSE評分、膽固醇、C反應蛋白、MIF mRNA表達水平相關;MCP-1蛋白濃度與MMSE評分、收縮壓、MCP-1 mRNA表達水平相關;MIF、MCP-1蛋白濃度與性別、年齡、高血壓病史、糖尿病史、高血脂病史、吸煙史、酗酒史、血沉、舒張壓、空腹血糖、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、葉酸、維生素B12均無明顯相關。 4.VD大鼠模型海馬組織MIF、MCP-1的表達增高。大鼠海馬區(qū)周圍有炎癥反應發(fā)生及MIF、MCP-1免疫陽性細胞高表達,提示MIF、MCP-1可能是VD炎癥過程中的重要炎性介質(zhì),并揭示炎癥反應可能是VD的重要發(fā)病機制。 5.VD大鼠模型海馬區(qū)域MIF、MCP-1蛋白及其mRNA的表達增高,提示MIF、MCP-1可能參與了VD的非特異性免疫炎癥反應過程,干預MIF、MCP-1表達可能是今后VD防治研究的一條新途徑。
【學位單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2008
【中圖分類】：R749.16
【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
第一章 AD、VD患者外周血MIF、MCP-1的表達及其變化
    1.1 材料和方法
    1.2 結(jié)果
    1.3 討論
第二章 VD大鼠模型海馬組織MIF、MCP-1的表達變化
    2.1 材料與方法
    2.2 結(jié)果
    2.3 討論
結(jié)論
問題與展望
參考文獻
附錄一 英文縮略詞表
附錄二 中文版簡易智能狀態(tài)檢查
附錄三 總體衰退表
攻讀學位期間的論文發(fā)表情況
致謝
統(tǒng)計學審稿證明

【參考文獻】

相關期刊論文 前8條

1 梁婷,侯桂華;巨噬細胞移動抑制因子研究進展[J];國外醫(yī)學.臨床生物化學與檢驗學分冊;2004年02期

2 丁新生;重視Alzheimer病的診治[J];臨床神經(jīng)病學雜志;2005年04期

3 胡鏡清,溫澤淮,賴世隆;Morris水迷宮檢測的記憶屬性與方法學初探[J];廣州中醫(yī)藥大學學報;2000年02期

4 秦燕;小膠質(zhì)細胞在中樞神經(jīng)系統(tǒng)介導的免疫損傷與保護作用的研究進展[J];四川解剖學雜志;2005年01期

5 梅建勛,張伯禮,張云嶺;多發(fā)梗塞性癡呆動物模型的改進與應用[J];天津中醫(yī)學院學報;1997年02期

6 向敬，匡培根，張鳳英，蒲傳強;顳葉梗塞致學習記憶障礙的機制研究──微透析分析與超微結(jié)構觀察[J];心理學報;1994年02期

7 王蕊,楊秦飛,唐一鵬,房良敏,胡京紅,賈緒東,洪慶濤;大鼠擬“血管性癡呆”模型的改進[J];中國病理生理雜志;2000年10期

8 馬桂賢;王麗娟;單志新;林秋雄;張雄;王碩;劉新通;;腦梗死患者外周血巨噬細胞移動抑制因子的表達[J];中華神經(jīng)科雜志;2006年12期

本文編號：2890968