青少年期是物質(zhì)濫用的危險期,此期開始吸煙者占煙民的80%,而青少年期吸煙可以預(yù)測成年期的酒依賴。位于VTA的nAChR在乙醇的犒賞機制中起關(guān)鍵作用,可能是乙醇和尼古丁犒賞的共同作用點。本研究復(fù)制相應(yīng)的動物模型,對青少年期Wistar大鼠給以尼古丁暴露,在成年期建立酒依賴自身給藥模型,探討青少年期尼古丁暴露和成年期酒濫用的關(guān)系及VTA區(qū)nAChR所起的作用。 目的: 觀察大鼠青少年期尼古丁暴露對成年期乙醇自身給藥的影響,并檢測青少年期尼古丁暴露和成年期乙醇自身給藥對VTA腦區(qū)nAChR受體部分熱點亞單位mRNA表達的作用。 方法: Wistar大鼠出生后35天(PN35)開始為期十天的尼古丁(1.0mg/kg/day salt、)皮下注射,以生理鹽水作為對照處理。部分大鼠出生后60天(PN60)以Samson糖水遞減程序誘導(dǎo)建立乙醇雙瓶自由選擇自身給藥模型,觀測干預(yù)對Wistar大鼠乙醇消費量、酒偏好程度、總飲液量的影響。其后Real Time-PCR定量檢測各組大鼠VTA標本α4、α5、α7和β2nAChR亞單位mRNA,觀察尼古丁干預(yù)和乙醇自身給藥對α4、α5、α7和β2亞單位mRNA表達的影響。 結(jié)果: 青少年期尼古丁干預(yù)對成年期乙醇自身給藥的各項指標無明顯影響。 VTA區(qū)nAChR亞單位mRNA的表達:未建立酒依賴模型兩處理組間α4、α5、α7和β2亞單位mRNA表達無差異;建立酒依賴模型兩處理組間α4、α5、α7和β2亞單位mRNA表達都有不同程度的顯著性差異,其中尼古丁處理組α4、α5和β2表達上調(diào),生理鹽水處理組α7表達下調(diào)。因素分析顯示:兩因素對α4和α5亞單位表達都有調(diào)節(jié)作用;酒依賴模型因素對β2表達有調(diào)節(jié)作用;對α5、α7和β2亞單位表達兩因素有交互作用。 結(jié)論: 1.青少年期尼古丁干預(yù)可以調(diào)節(jié)nAChR亞單位α4、α5、α7、β2的表達,對成年期酒依賴的形成可能沒有促進作用。研究沒有能夠驗證理論假設(shè)。 2.尼古丁和乙醇共同作用于VTA區(qū)包含有α4、α5、α7、β2亞單位的nAChR亞型。包含有α4、α5、α7、β2亞單位的多種nAChR亞型參與酒依賴形成的過程,但對酒依賴形成可能不起關(guān)鍵作用。 3.有必要結(jié)合遺傳差異來考慮nAChR亞單位mRNA表達和酒依賴形成的關(guān)系。
【學(xué)位單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2009
【中圖分類】：R749.6
【部分圖文】：

nAChR結(jié)構(gòu)示意圖

首先利用反轉(zhuǎn)錄酶 PrimescriPtTxRTase將RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA，然后使用 RealTimePCR反應(yīng)用試劑，以合成的cDNA為模板，進行 RealTimePCR反應(yīng)，原理見圖1一3。在使用 TaKaRaExTa尹HS對樣本 cONA進行PCR擴增時，加入熒光染料 SYBRGreenl，使之與通過PCR反應(yīng)生成的雙鏈DNA結(jié)合發(fā)出熒光，原理如圖

碩士學(xué)位論文第一章前言1一4所示。實驗時實時監(jiān)測反應(yīng)體系中的SYBRGreenl熒光強度，通過檢測反應(yīng)液中SYBR⑧Greenl的熒光強度，達到監(jiān)控PCR產(chǎn)物擴增量的目的。此外通過檢測熒光不但可以檢測反應(yīng)體系中的DNA擴增量，同時還能測定擴增產(chǎn)物的DNA融解溫度。
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本文編號：2884827