發(fā)布時(shí)間：2020-10-26 17:44

　　 阿爾茨海姆病(Alzheimer's disease, AD)是一種神經(jīng)變性性疾病。AD發(fā)病機(jī)制中較為公認(rèn)的是中樞神經(jīng)膽堿能系統(tǒng)損傷學(xué)說(shuō)。本研究組以前的研究表明骨形態(tài)發(fā)生蛋白4(Bone morphogenetic protein4, BMP4)可在離體條件下誘導(dǎo)成年大鼠海馬區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞的膽堿能分化,并在在體條件下上調(diào)該區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的膽堿能表達(dá)。但BMP4是否僅誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞的膽堿能分化,對(duì)神經(jīng)元的膽堿能表達(dá)是否也具有上調(diào)作用,尚不了解。通過(guò)腦內(nèi)海馬齒狀回注入BMP4上調(diào)該區(qū)神經(jīng)細(xì)胞膽堿能表達(dá),是否對(duì)AD模型大鼠具有治療作用,國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)報(bào)道。 目的:通過(guò)觀察BMP4對(duì)離體培養(yǎng)的大鼠海馬區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞的分化和神經(jīng)元的膽堿能表達(dá)的影響,以進(jìn)一步了解BMP4對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞膽堿能誘導(dǎo)分化作用和明確對(duì)神經(jīng)元膽堿能表達(dá)是否具有上調(diào)作用;通過(guò)將BMP4注入成年大鼠海馬齒狀回區(qū),進(jìn)一步了解BMP4體內(nèi)對(duì)成年大鼠海馬齒狀回區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的膽堿能表達(dá)的作用;通過(guò)將BMP4注入海馬齒狀回區(qū),了解其對(duì)AD模型:大鼠是否具有治療作用。 方法:(1) 從幼齡SD大鼠海馬區(qū)分離并培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞,并行Nestin免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定。在培養(yǎng)液中加入或不加入BMP4,用ChAT免疫細(xì)胞化學(xué)染色及FITC標(biāo)記的流式細(xì)胞檢測(cè)法,鑒定膽堿能神經(jīng)細(xì)胞。(2) 從胎齡SD大鼠海馬及大腦皮層分離并培養(yǎng)神經(jīng)元,并行MAP2免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定。在培養(yǎng)液中加入或不加入BMP4,用ChAT免疫細(xì)胞化學(xué)染色及FITC標(biāo)記的流式細(xì)胞檢測(cè)法,鑒定膽堿能神經(jīng)細(xì)胞。(3)在腦立體定位儀下,將BMP4或NS注入成年大鼠左側(cè)海馬齒狀回,28天后取海馬齒狀回腦組織,行ChAT免疫組化染色,用Image-prog-plus圖像分析系統(tǒng)測(cè)量海馬齒狀回ChAT陽(yáng)性細(xì)胞面積,數(shù)據(jù)采用STATA7.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。(4) 在腦立體定位儀下,離斷成年大鼠左側(cè)穹隆海馬傘,建立AD模型。將BMP4或NS注入AD模型大鼠手術(shù)側(cè)海馬齒狀回區(qū),28天后用Mirros水迷宮檢測(cè)大鼠空間記憶行為;并取海馬齒狀回腦
【學(xué)位單位】：中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2005
【中圖分類】：R749.16
【部分圖文】：

圖1培養(yǎng)條件下幼鼠海馬區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞的形態(tài)變化倒置光學(xué)相差顯微鏡x200A為接種即刻，細(xì)胞呈圓形懸浮狀，胞膜清晰，胞質(zhì)透明，未見(jiàn)明顯胞核，細(xì)胞周圍有圈光暈(箭頭所示);B為接種即刻，呈自我旋轉(zhuǎn)狀態(tài)的細(xì)胞(箭頭所示);C為培養(yǎng)24h時(shí)部分細(xì)胞分裂形成啞鈴狀(箭頭所示)。D為培養(yǎng)4h8時(shí)，細(xì)胞分裂增殖成為細(xì)胞團(tuán)，部分細(xì)胞體向周邊伸出小的突起，成為前體樣細(xì)胞(箭頭所示);E為培養(yǎng)7d一sd時(shí)，貼壁生長(zhǎng)的部細(xì)胞胞體呈梭形，伸出較長(zhǎng)的突起，呈神經(jīng)元或膠質(zhì)細(xì)胞狀;其它細(xì)胞仍然呈懸浮狀態(tài)，圓或伸出小突起的前體細(xì)胞狀(箭頭所示)。

呈現(xiàn)棕黃色的CllAI，反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞，約占總細(xì)胞數(shù)的2.664士1.47%(圖3A);而在未加BMP4的對(duì)照組的培養(yǎng)皿中，僅有少數(shù)呈現(xiàn)棕黃色的ChAT反應(yīng)陽(yáng)性的細(xì)胞，約占總細(xì)胞數(shù)的13.42士1.33%(圖3B)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，BMP4組的Ch戶J陽(yáng)性細(xì)胞比例顯著高于無(wú)BMp4的對(duì)照組(P<0.02)，見(jiàn)表z。表1BMP4體外誘導(dǎo)分化幼鼠海馬神經(jīng)干細(xì)胞的Ch產(chǎn)T陽(yáng)性細(xì)胞比例(%)樣本BMP4組對(duì)照組126.815.3229.412.4324.417.6430.211.5522.410.3又士526.64士1.47**13.42土1.33**表示BMP4組與對(duì)照組比較，P<.001.2.2BMP4體外誘導(dǎo)分化的幼鼠海馬神經(jīng)干細(xì)胞的FITC標(biāo)記的膽堿能神經(jīng)細(xì)胞流式細(xì)胞術(shù)將加入或未加入BMP4培養(yǎng)10天的幼鼠海馬神經(jīng)干細(xì)胞行FITC標(biāo)記的膽堿能神經(jīng)細(xì)胞流式細(xì)胞檢測(cè)，測(cè)得BMP4組細(xì)胞的ChAT陽(yáng)性率為23.42%(圖4A)，而無(wú)BMP4對(duì)照組細(xì)胞的ChAT陽(yáng)性率為7.79%(圖4B)。BMP4組的ChAT陽(yáng)性細(xì)胞比例高于無(wú)BMP4的對(duì)照組。結(jié)果表明:BMP4可體外誘導(dǎo)幼鼠海馬區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞的膽堿能分化。

圖5培養(yǎng)條件下胎鼠海馬區(qū)神經(jīng)元的形態(tài)變化A、B倒置光學(xué)顯微鏡x400;C、D倒置光學(xué)顯微鏡ZxooA為接種即刻，細(xì)胞迅速開(kāi)始貼壁，星梭形，伸出2一3個(gè)短的突起，貼壁細(xì)胞胞體的周圍有顯的光暈。B、C為培養(yǎng)%h時(shí)，細(xì)胞呈神經(jīng)元樣形態(tài)，胞體伸出較長(zhǎng)的數(shù)量不等的突起，細(xì)胞的突起互相連接成網(wǎng)絡(luò)狀。D為培養(yǎng)7d一d8時(shí)，細(xì)胞胞體群集，突起有聚集成束的趨勢(shì)。
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 常艷,薛毅瓏,羅蕓,田磊,潘靜坤,崔忻;骨形態(tài)發(fā)生蛋白4對(duì)大鼠腦神經(jīng)干細(xì)胞的膽堿能誘導(dǎo)分化效應(yīng)[J];標(biāo)記免疫分析與臨床;2004年01期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 林秋霞;大腦皮層神經(jīng)元體外誘導(dǎo)分裂研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2004年

本文編號(hào)：2857305