發(fā)布時(shí)間：2020-09-18 17:51

　　 研究背景和目的 隨著人口老齡化的進(jìn)展,阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)和腦出血(Intracerebral hemorrhage, ICH)的發(fā)病率呈逐年增加趨勢(shì),已成為嚴(yán)重影響中老年人身心健康的重要疾病,迄今尚無特異性的臨床防治措施。因此,積極探索新的有效防治途徑和方法,仍然是當(dāng)今亟需解決的重要課題。Humanin(HN)是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種由24氨基酸組成的短肽,研究表明HN及其衍生物——S14G-HN(HNG)能夠有效地抑制目前所知的AD致病因子的毒性作用,且HNG生物活性作用較HN大1000倍。另有在體實(shí)驗(yàn)表明HNG對(duì)缺血性腦卒中亦具有較好的防治作用。雖然HN和HNG已被證明對(duì)部分神經(jīng)系統(tǒng)疾病顯示了較好的神經(jīng)保護(hù)作用,但其確切的有效作用途徑及機(jī)制仍不清楚。本項(xiàng)研究應(yīng)用實(shí)驗(yàn)性小鼠AD模型和大鼠ICH模型,通過觀察HN、HNG對(duì)β-淀粉樣蛋白(amyloid-beta protein,Aβ)以及ICH所致炎癥反應(yīng)的效應(yīng)作用,試圖明確HN和HNG抗Aβ神經(jīng)毒性的機(jī)制以及HNG對(duì)ICH的有效作用和機(jī)制。 研究方法和結(jié)果 (1)HN和HNG對(duì)Aβ所致炎癥反應(yīng)的有效抑制作用應(yīng)用立體定向注射Aβ25～35至海馬CA1區(qū)建立小鼠AD模型,觀察不同劑量HN和HNG對(duì)Aβ25～35所致炎癥反應(yīng)的療效。結(jié)果發(fā)現(xiàn)應(yīng)用HN和HNG治療的各組在3d、7d、14d時(shí),海馬區(qū)GFAP陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)數(shù)量較對(duì)照組均顯著減少(P0.01),且存在劑量依賴關(guān)系;100μmol/L HN較10μmol/L HN以及100nmol/L HNG較10nmol/L HNG對(duì)炎癥反應(yīng)的抑制作用更為顯著(P0.01)。這些研究結(jié)果表明,HN和HNG在體內(nèi)可有效地抑制Aβ毒性導(dǎo)致的GFAP表達(dá),能夠通過抗炎癥反應(yīng)途徑而發(fā)揮抗AD的神經(jīng)保護(hù)作用,且HNG的生物活性作用較HN更強(qiáng)。 (2)實(shí)驗(yàn)性大鼠ICH炎癥反應(yīng)及腦水腫演化規(guī)律及其神經(jīng)行為學(xué)變化應(yīng)用自體血注射建立大鼠ICH模型,分別于不同時(shí)間點(diǎn)觀察炎癥反應(yīng)、腦組織含水量和神經(jīng)行為學(xué)變化規(guī)律。結(jié)果發(fā)現(xiàn)血腫周圍GFAP、OX-42、MPO陽(yáng)性細(xì)胞于ICH后6h即出現(xiàn)增多,72h達(dá)到高峰,14d恢復(fù)至對(duì)照組水平;而TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞于12h開始增多,72h達(dá)到高峰,7d后下降,14d時(shí)與對(duì)照組比較仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)ICH后血腫周圍紋狀體和大腦皮層含水量在3h即開始形成并逐漸增加,24h達(dá)到高峰,72h開始消退,1w時(shí)恢復(fù)至對(duì)照組水平;對(duì)側(cè)大腦組織具有明顯的遠(yuǎn)隔影響效應(yīng),非出血側(cè)大腦皮層、紋狀體含水量亦有增加,但程度較輕且恢復(fù)快,72h后即可達(dá)到對(duì)照組水平;幕下結(jié)構(gòu)小腦組織無明顯影響。出血側(cè)皮層和紋狀體腦組織含水量與神經(jīng)行為學(xué)障礙呈負(fù)相關(guān)。研究結(jié)果表明在ICH早期即可出現(xiàn)炎性反應(yīng)和腦水腫形成,24～72h應(yīng)為防治腦水腫和炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵時(shí)期,為明確ICH最佳治療時(shí)間窗以及選擇性的抗炎癥治療和控制腦水腫提供了實(shí)驗(yàn)理論依據(jù)。 (3)HNG對(duì)大鼠ICH炎癥反應(yīng)的有效治療作用應(yīng)用上述方法建立的大鼠ICH模型,側(cè)腦室給予注射100nmol/L HNG 5μl,72h后觀察血腫周圍膠質(zhì)細(xì)胞和凋亡細(xì)胞的表達(dá)變化。研究發(fā)現(xiàn)HNG治療組GFAP、OX42、TUNEL表達(dá)數(shù)量較對(duì)照組明顯減少;星型膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞的胞體變小且突起短。結(jié)果表明HNG能夠通過有效地抑制炎癥反應(yīng)、抗凋亡等途徑而對(duì)ICH發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。 結(jié)論 本項(xiàng)研究首次證明了HN、HNG在體內(nèi)可有效地抑制Aβ毒性導(dǎo)致的GFAP表達(dá),提示通過抗炎癥反應(yīng)途徑可能是HN、HNG抗AD有效作用的重要機(jī)制之一。另外,研究表明在ICH早期即可出現(xiàn)炎性反應(yīng)和腦水腫形成,24～72h應(yīng)為防治腦水腫和炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵時(shí)期;早期應(yīng)用HNG能夠有效地抑制ICH的炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡的發(fā)生,HNG對(duì)ICH具有顯著的神經(jīng)保護(hù)作用。以上研究結(jié)果為進(jìn)一步探討HN、HNG有效神經(jīng)保護(hù)作用的機(jī)制及其在防治神經(jīng)疾病中的廣泛應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)理論依據(jù)。
【學(xué)位單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2007
【中圖分類】：R749.16;R743.34
【部分圖文】：

第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文表3： 腦出血后各時(shí)間點(diǎn)GFAP、OX42、MPO、TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)（ x ± s）時(shí)GFAP OX42 MPO TUNEL間 control ICH control ICH control ICH control ICH6h 53.5±3.05 65.4±4.22a1.8±0.55 9.7±2.96a8.7±0.92 28.9±4.72a3.3±1.26 4.6±0.912h 64.1±3.79 95.9±6.00a6.4±1.04 96.9±11.04a18.5±1.99 90.2±8.02a3.1±0.97 12.0±324h 72.5±4.07 114.2±6.40a10.4±2.41 104.7±15.95a29.3±2.45 205.4±16.15a6.1±1.83 35.4±648h 74.9±3.33 130.6±9.63a19.8±4.14 185.5±24.04a29.4±5.26 350.9±34.67a13.3±2.90 39.7±872h 74.3±4.99 141.3±8.22a21.6±4.99 212.5±15.12a30.7±5.00 346.1±30.02a14.1±3.88 47.3±17d 53.1±4.94 90.6±7.91a6.25±0.97 87.6±12.66a9.6±1.43 194.1±12.02a3.6±1.10 29.9±414d 43.4±3.20 44.2±5.32 1.1±1.05 1.5±0.69 8.9±1.52 11.8±3.12 3.85±1.13 10.3±3aP＜0.05, vs Control group

第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文2.6 ICH 后 OX-42 的表達(dá)變化正常大鼠腦組織中，小膠質(zhì)細(xì)胞為靜息狀態(tài)，OX-42 為陰性。對(duì)照組在針道周圍有少量陽(yáng)性 OX-42 表達(dá)。ICH 后，小膠質(zhì)細(xì)胞激活轉(zhuǎn)化為反應(yīng)狀態(tài)，ICH 后 6h，開始出現(xiàn) OX-42 陽(yáng)性細(xì)胞。12h，OX-42 深染明顯，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量增多，體積增大，突起伸長(zhǎng)變粗，突起上可見到小棘。ICH 后 72h，OX-42陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量和體積均達(dá)到高峰。隨后小膠質(zhì)細(xì)胞的反應(yīng)性開始逐漸減弱，14d 時(shí)，偶有少量的 OX-42 陽(yáng)性的細(xì)胞，細(xì)胞數(shù)恢復(fù)至對(duì)照組水平（。圖 2A~D；表 3）

第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文可見在血腫內(nèi)有大量的 MPO 陽(yáng)性細(xì)胞，陽(yáng)性細(xì)胞呈現(xiàn)圓形或類圓形，胞核深染，部分可見核分葉，在血腫周圍的腦組織中僅有少量的 MPO 陽(yáng)性細(xì)胞。ICH后 48h～72h，在血腫周圍的腦組織中中性粒細(xì)胞的浸潤(rùn)達(dá)到峰值，并有部分細(xì)胞體積變大，為巨噬細(xì)胞。血腫周圍腦組織浸潤(rùn)的 MPO 陽(yáng)性細(xì)胞數(shù) 7d 后開始減少。14d 血腫內(nèi)存在大量的含鐵血黃素沉積和少量 MPO 陽(yáng)性細(xì)胞，血腫周圍腦組織內(nèi)浸潤(rùn)的 MPO 陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)恢復(fù)至對(duì)照組水平。（圖 3A~D；表 3）

【參考文獻(xiàn)】

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1 關(guān)景霞,孫圣剛,曹學(xué)兵,陳志斌;腦血腫周圍細(xì)胞間黏附分子-1 mRNA表達(dá)及白細(xì)胞浸潤(rùn)的實(shí)驗(yàn)研究[J];臨床神經(jīng)病學(xué)雜志;2004年06期

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本文編號(hào)：2821973