目的 研究GLP-1類似物利拉魯肽對H202誘導的神經(jīng)母細胞瘤SH-SY5Y細胞的AD樣神經(jīng)退行性變的保護作用。 方法 本研究以人神經(jīng)母細胞瘤SH-SY5Y細胞作為研究對象,分為四組分別給予不同的藥物處理即對照組(Con)、氧化損傷組(H202處理24小時)、治療組(利拉魯肽Lira預處理組)、P13K抑制劑Wortmannin(Wt)阻斷組(應用利拉魯肽前給予1uM Wortmannin預處理1小時)。后三組細胞需要加入H202誘導神經(jīng)元氧化損傷模型,而治療組在給予H202損傷前進行利拉魯肽預處理4小時。MTT實驗檢測各組SH-SY5Y細胞活性、LDH實驗檢測各組SH-SY5Y細胞毒性、脂質氧化MDA檢測細胞氧化應激水平、annexin-Ⅴ/PI雙染后流式細胞儀分析不同處理組細胞凋亡百分比、免疫印跡實驗檢測各組SH-SY5Y細胞微管相關蛋白Tau和神經(jīng)絲蛋白(NFs)的磷酸化水平、Bcl-2家族成員凋亡相關蛋白Bax和存活相關蛋白Bcl-2的表達、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶caspase-3的表達以及PI3K-AKt信號通路中關鍵的激酶PKB/Akt和GSK-3p的磷酸化水平。 結果 與Con組相比,氧化損傷(H202)組SH-SY5Y細胞存活率顯著降低,乳酸脫氫酶(LDH)釋放率增高,細胞內脂質過氧化產(chǎn)物MDA水平顯著增高,細胞凋亡百分比顯著增高,細胞內Tau和NFs蛋白過度磷酸化,Bax水平明顯增高,Bcl-2水平顯著下降,活化的caspase-3增多,PKB/Akt和GSK-3β的磷酸化水平減弱；利拉魯肽干預治療(Lira)組與氧化損傷(H202)組相比,細胞存活率顯著增高,乳酸脫氫酶釋放率降低,細胞內脂質過氧化產(chǎn)物MDA水平明顯降低,細胞凋亡百分比顯著下降,細胞內Tau和NFs蛋白的磷酸化水平減弱,Bax水平降低,Bcl-2顯著增多,活化的caspase-3減少以及PKB/Akt和GSK-3p的磷酸化水平顯著提升。而Wortmannin (Wt)阻斷組相比Lira治療組其細胞存活率顯著降低,細胞毒性增加,細胞內脂質過氧化產(chǎn)物MDA水平增高,細胞凋亡百分比增高,胞內Tau和NFs蛋白過度磷酸化,Bax的表達明顯增多,Bcl-2的表達減少,活化的caspase-3增多以及PKB/Akt和GSK-3β的磷酸化水平減弱。 結論 利拉魯肽能夠對抗H202誘導的AD樣神經(jīng)退行性變,其機制可能通過激活PI3K-AKt信號傳導通路提高細胞的存活,抑制細胞凋亡,改善神經(jīng)細胞內Tau蛋白與NFs的異常磷酸化進而發(fā)揮神經(jīng)保護性作用。
【學位單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2014
【中圖分類】：R749.16

【參考文獻】

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1 李玲玲;劉蓉;葉蘭;徐運;;抗氧化劑在阿爾茨海默病治療中的地位和臨床應用前景[J];國際神經(jīng)病學神經(jīng)外科學雜志;2009年06期

2 于德紅;魏朝良;包永明;安利佳;;阿爾茨海默病與氧化應激[J];生物醫(yī)學工程學雜志;2006年05期

本文編號：2816783