血管性認知障礙(VCI)是指由腦血管因素所引起的認知功能的變化,腦卒中后產(chǎn)生的認知功能障礙占血管性認知障礙的主要部分。目前關于認知功能障礙的治療大都集中于對學習記憶功能障礙的研究,這既不符合認知域的界定標準,又使得與學習記憶功能障礙同時發(fā)生的情感相關負性情緒往往被忽視,而這種伴隨出現(xiàn)的情緒不僅更容易加重患者及家屬負擔、降低生活質(zhì)量,同時也是加重認知功能損害因素之一。本研究分別采用雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎(2-VO組)以及過度運動聯(lián)合雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎(OE+2-VO組)這兩種方式建立血管性認知障礙模型,以探究運動對血管性認知障礙的影響,研究過度運動能否加重情感相關負性情緒的發(fā)生機率,并為建立血管性認知障礙負性情緒相關模型提供實驗依據(jù)。同時對其在不同時間點采出的生物樣品進行檢測,監(jiān)測兩種模型神經(jīng)生物化學物質(zhì)的變化情況并找出其發(fā)生轉(zhuǎn)變的時間點,結(jié)合其行為學的變化情況,解釋其發(fā)生機制,找出兩者之間的相關性,為以后的研究奠定基礎。42d時采用Morris水迷宮對大鼠的學習記憶能力進行檢測,平均速度結(jié)果顯示三組大鼠之間并無明顯差異(P0.05),逃避潛伏期測定結(jié)果顯示2-VO組及OE+2-VO組顯著多于SO組,且這種趨勢會一直持續(xù)至測試期(P0.05),空間探索結(jié)果表明,與SO組相比,2-VO組大鼠穿越平臺次數(shù)顯著降低(P0.01),70d時對腦組織切片進行HE染色,結(jié)果顯示,2-VO組及OE+2-VO組腦組織都會出現(xiàn)不同程度的固縮、神經(jīng)元的丟失;為了考察運動的強度,應用紫外分光光度法對血清中乳酸脫氫酶的含量進行測定,結(jié)果顯示與2-VO組相比,OE+2-VO組在14d時乳酸脫氫酶的含量顯著下降(P0.05),在56d時,2-VO組乳酸脫氫酶的含量顯著增加(P0.05),即長時間間歇性的運動會導致血清中乳酸脫氫酶的含量下降;70d時OE+2-VO組腦組織中乳酸脫氫酶的含量顯著高于SO組;采用Elisa試劑盒對大鼠血清中皮質(zhì)醇和睪酮的含量進行測定,結(jié)果表明,皮質(zhì)醇與睪酮的比值含量并無明顯變化,且這種運動程度并未達到過度運動的狀態(tài),表明運動訓練對外周系統(tǒng)并無明顯影響,但是卻能夠加重中樞系統(tǒng)的損傷。采用超高效液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用的方法在模型成立后14、28、42、56、70d對大鼠腦脊液中乙酰膽堿的含量進行測定,結(jié)果表明,在模型建立42d時,2-VO組及OE+2-VO組乙酰膽堿含量明顯下降(P0.01),且這種下降趨勢會持續(xù)至56d(P0.01),其余各天各組大鼠之間含量并無明顯差異(P0.05),即雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎后會造成腦內(nèi)乙酰膽堿的含量變化;為了研究乙酰膽堿發(fā)生變化的原因,在模型成立70d采用免疫組化法對乙酰膽堿以及乙酰膽堿酯酶的含量進行了測定,結(jié)果表明,2-VO組乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶的含量顯著下降(P0.05),OE+2-VO組乙酰膽堿酯酶的含量顯著升高(P0.01),即2-VO組乙酰膽堿含量下降是合成過程受阻,而OE+2-VO組則加速了分解過程。同時還對與負性情緒相關的去甲腎上腺素以及多巴胺的含量進行了測定,在模型建立后14、28、42、56、70d對大鼠腦脊液進行采集,采用超高效液相色譜聯(lián)合質(zhì)譜的方法對腦脊液中多巴胺及去甲腎上腺素的含量進行測定,結(jié)果表明,OE+2-VO組在42d、56d時多巴胺的含量下降明顯(P0.01),且這種下降趨勢一直持續(xù)至70d(P0.05),即過度運動對多巴胺的變化會產(chǎn)生影響,對多巴胺含量的變化與行為學進行相關性分析發(fā)現(xiàn)多巴胺含量的變化與動物的社交行為、抑郁樣行為以及學習記憶能力有關;去甲腎上腺素測定結(jié)果表明,在模型成立后56d時,2-VO組及OE+2-VO組,去甲腎上腺素含量顯著降低(P0.05)相關性實驗結(jié)果表明,去甲腎上腺素含量的變化與動物的焦慮樣行為有關;為了分析多巴胺及去甲腎上腺素產(chǎn)生變化的原因,在70d時對腦內(nèi)合成過程中的酶酪氨酸羥化酶、多巴胺-β-脫氫酶的含量進行測定,結(jié)果表明,酪氨酸羥化酶的含量三組之間并沒有明顯變化(P0.05),OE+2-VO組多巴胺-β-脫氫酶的含量顯著高于SO組,即多巴胺含量的降低合成過程無關。雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎以及運動訓練聯(lián)合雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎能夠建立血管性認知障礙的模型,過度運動能增加中樞系統(tǒng)中乳酸脫氫酶的含量,造成中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損傷;血管性認知障發(fā)生的過程中會伴有神經(jīng)遞質(zhì)含量的變化,雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎阻礙乙酰膽堿的合成過程,OE+2-VO組加速了其分解過程;多巴胺含量并不是通過干擾多巴胺的合成過程而導致的多巴胺含量的下降,且多巴胺含量的變化與社交行為、抑郁樣行為、學習記憶功能有關;去甲腎上腺素含量的變化與焦慮樣行為具有相關性。
【學位單位】：哈爾濱商業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R749.13
【部分圖文】：

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滴加二抗，室溫下孵育２０ｍｉｎ；逡逑ＤＡＢ顯色，蘇木素染色：ＰＢＳ邋５ｍｉｎＸ３次，擦片后將其放于木板上。滴加ＤＡＢ顯逡逑色液，顯微鏡下觀察，待出現(xiàn)陽性細胞染色較深，背景未染色或染色較淺時，立即浸入逡逑ＰＢＳ緩沖液以終止染色。自來水沖２ｍｉｎ。用蘇木素液復染，使細胞核著色，用自來水沖逡逑洗ｌＯｍｉｎ，蒸飽水洗一次；逡逑脫水：８０％乙醇邋３ｍｉｎ，９０％乙醇邋３ｍｉｎ，９５％乙醇邋３ｍｉｎ，１００％乙醇邋３ｍｉｎ；逡逑透明：二甲苯５ｍｉｎＸ２次，使切片變透明；逡逑封片：將切片用吸水紙擦干，用中性樹膠封片，組織上不要有氣泡，烘干。在顯微逡逑鏡下觀察。逡逑３．４統(tǒng)計學處理方法逡逑統(tǒng)計方法同２．４項下內(nèi)容。逡逑３．５大鼠腦脊液中乙酰膽堿含量的方法學考察及其測定結(jié)果逡逑３．５．１乙酰膽堿方法學考察結(jié)果逡逑專屬性考察：精密吸取，５［ＪＬ乙酰膽堿進樣，色譜圖如３－２所示，乙酰膽堿分離較逡逑清，且無其他雜質(zhì)峰干擾，保留時間：ｌ．ＯＯｍｉｎ。逡逑

【參考文獻】

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本文編號：2809099