【摘要】： 目的：觀察阿爾茨海默病(Alzheimer's disease, AD)小鼠發(fā)病過程中下丘腦內(nèi)不同時(shí)期促性腺激素釋放激素(gonadotropin releasing hormone, GnRH)表達(dá)水平的變化,并探討GnRH與AD小鼠發(fā)病機(jī)制的相關(guān)性。方法：10周齡昆明種雌性小鼠140只,根據(jù)跳臺實(shí)驗(yàn)成績和體重分層后按取樣周期隨機(jī)分為七組：0d、30d、45d、60d、75d和90d組,每組20只,各組又設(shè)正常對照組和AD模型組各10只。正常對照組腹腔注射生理鹽水和灌胃三蒸水,AD模型組腹腔注射D-半乳糖(120mg·kg-1·d-1)和灌胃氯化鋁(10mg·kg-1·d-1),連續(xù)給藥時(shí)間按分組確定。跳臺實(shí)驗(yàn)觀察AD小鼠學(xué)習(xí)和記憶能力；蛋白免疫印跡法(Western blot)測定海馬蘇氨酸231位點(diǎn)磷酸化tau蛋白(Tau-pThr231)水平；酶聯(lián)免疫法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)測定血清雌二醇(Estradiol, E2)水平；免疫組織化學(xué)觀察小鼠腦組織中Aβ40、GnRH及其受體(gonadotropin releasing hormone receptor, GnRHR)的表達(dá)及分布；結(jié)果：(1)與正常對照組比較,AD模型組小鼠45d、60d、75d、90d時(shí)學(xué)習(xí)成績下降(P0.05),記憶錯(cuò)誤次數(shù)增多(P0.01),潛伏期縮短(P0.05)；(2)與正常對照組比較,AD模型組小鼠45d、60d、75d、90d時(shí)Aβ40和Tau-pThr231表達(dá)增高(P0.05)；(3)與正常對照組比較,AD模型組小鼠血清雌二醇水平隨造模給藥時(shí)間延長呈下降趨勢。90d時(shí)E2水平明顯降低(P0.05)；(4)與正常對照組比較,AD模型組小鼠60d、75d、90d時(shí)GnRH表達(dá)減少(P0.05); GnRHR未見差異。結(jié)論：(1)隨著造模給藥時(shí)間延長,AD小鼠學(xué)習(xí)記憶能力逐漸減退,腦組織中Aβ40的表達(dá)逐漸升高,Tau-pThr231表達(dá)水平呈增高趨勢,與Aβ40的表達(dá)呈正相關(guān),Tau-pThr231可以標(biāo)定AD模型小鼠的發(fā)病進(jìn)程。(2)血清雌二醇含量、下丘腦GnRH表達(dá)水平隨著AD小鼠發(fā)病的時(shí)間進(jìn)程呈下降趨勢,與AD的病理改變有相關(guān)性。其參與AD發(fā)病進(jìn)程的可能機(jī)制為：隨著AD病程的進(jìn)展,下丘腦分泌的GnRH減少,體內(nèi)雌二醇水平下降,從而使Aβ40沉積和Tau-pThr231表達(dá)增強(qiáng),進(jìn)而促進(jìn)了AD的病情發(fā)展。
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R749.16
【圖文】：

圖1小鼠下丘腦從前往后結(jié)構(gòu)示意圖(摘自Kei仇a.J.Fr肛水lin《TheMouseBraininstereotaxiccoor動(dòng)加ates》一seeondedition)實(shí)驗(yàn)免疫組織化學(xué)染色采用SABC法，具體步驟如下:(l)切片經(jīng)脫蠟致水:二甲苯I和二甲苯11脫蠟各IOmin，依次100%酒精I(xiàn)、100%酒精n、95%酒精、85%酒精、70%酒精，浸泡各smin，蒸餾水浸泡smin;(2)消除內(nèi)源性過氧化物酶活性:3%HZO:溶液新鮮配置，室溫孵育1smin，蒸餾水沖洗，sminX3次;(3)微波抗原修復(fù):將石蠟切片浸入0.o1M構(gòu)椽酸鹽緩沖液中，保鮮膜封口，微波爐加熱至沸騰后斷電，間隔IOmin后繼續(xù)加熱至沸騰后斷電，冷卻，PBS沖洗，sminx3次;(4)滴加5%BSA封閉液，置于37℃40min后甩去多余液體;

BCA法測定小鼠海馬組織蛋白勻漿的蛋白濃度，然后各組取等量蛋白上樣行SDS一PAGE后的電泳圖，同標(biāo)準(zhǔn)蛋白Marker比較，在68kDa處可見一較清晰條帶，目的蛋白分子量為68kDa與理論值相符，結(jié)果見如下圖2。團(tuán)a105-50es35—25_圖2各組海馬組織的SDS一隊(duì)GE F19.2SDS一 PAGEanalysisofhiPPoeamPusineachgrouP3.2蛋白免疫印 跡(Westemblot)用抗幾u(yù)一pThr231抗體對目的蛋白進(jìn)行鑒定，結(jié)果見圖2。正常對照組無免疫印跡條帶，說明Tau一pThr231在正常狀態(tài)下不表達(dá)或表達(dá)量極微。而AD模型組約30d時(shí)，Tau一pThr231開始有少量表達(dá)，并且隨造模時(shí)間延長表達(dá)量逐漸升高，75d時(shí)有所下降，但仍在高位表達(dá)。Lane 123生 5678幾u(yù)一Tbr231必礁簇68kDap一aetin42kDa圖3海馬組織Tau一pThrZ引蛋白免疫印跡 F193:WesternblotoftauProtein(tau一 PThr231)inrathiPPoeamPus.注:1至7泳道依次為正常對照組:od、15d、30d、45d、60d、75d和90d條帶;9至15泳道依次為AD模型組:od、15d、30d、45d、60d、75d和90d條帶;第8泳道為MarkerNote:Lanel一7， ControlgrouPod、 1sd、30d、45d、60d、 75dand90d:Laneg一15

50es35—25_圖2各組海馬組織的SDS一隊(duì)GEF19.2SDS一PAGEanalysisofhiPPoeamPusineachgrouP3.2蛋白免疫印跡(Westemblot)用抗幾u(yù)一pThr231抗體對目的蛋白進(jìn)行鑒定，結(jié)果見圖2。正常對照組無免疫印跡條帶，說明Tau一pThr231在正常狀態(tài)下不表達(dá)或表達(dá)量極微。而AD模型組約30d時(shí)，Tau一pThr231開始有少量表達(dá)，并且隨造模時(shí)間延長表達(dá)量逐漸升高，75d時(shí)有所下降，但仍在高位表達(dá)。Lane123生5678

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2769593