【摘要】：目的:探討胰島素樣生長因子-1(insulin-like growth factor 1, IGF-1)對大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤(pheochromocytoma 12, PC12)細(xì)胞淀粉樣前體蛋白(amyloid precursor protein, APP)代謝的影響。方法:體外培養(yǎng)PC12細(xì)胞,用不同劑量IGF-1(20, 40和80 ng/ml)作用PC12細(xì)胞,以等體積細(xì)胞培養(yǎng)液用作對照,24 h后ELISA法檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中Aβ1-42水平,Western blotting法檢測APP、C99及C83的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:①IGF-1降低Aβ1-42的水平,隨著IGF-1濃度的增加,這種作用更加顯著;②IGF-1降低C99蛋白表達(dá)水平,同時增加C83的水平,這種作用亦具有濃度依賴性;③IGF-1對APP的蛋白表達(dá)水平無顯著影響。結(jié)論:在PC12細(xì)胞,IGF-1能誘導(dǎo)APP代謝從β途徑向α途徑轉(zhuǎn)變,這種作用具有劑量依賴性。 目的:觀察IGF-1對PC12細(xì)胞β位淀粉樣前體蛋白裂解酶1(β-site amyloid precursor protein cleaving enzyme 1, BACE-1)的影響,探討IGF-1對APP代謝途徑的轉(zhuǎn)變作用是否為BACE-1水平改變所至。方法:體外培養(yǎng)PC12細(xì)胞,用不同劑量IGF-1(20, 40和80 ng/ml)作用PC12細(xì)胞,以等體積細(xì)胞培養(yǎng)液用作對照,24 h后熒光定量PCR法檢測BACE-1的mRNA水平,Western blotting法檢測BACE-1的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:①IGF-1降低BACE-1的mRNA水平,隨著IGF-1濃度的增加,這種作用更加明顯;②IGF-1降低BACE-1的蛋白表達(dá)水平,這種作用亦具有濃度依賴性。結(jié)論:①IGF-1能降低PC12細(xì)胞中BACE-1的mRNA及蛋白表達(dá)水平;②IGF-1對APP代謝途徑的轉(zhuǎn)變作用可能與BACE-1的水平降低有關(guān)。 第三部分:胰島素樣生長因子-1對PC12細(xì)胞中PI3-K/Akt及MAPKs信號通路的影響 目的:探討IGF-1對PC12中PI3-K/Akt及MAPKs信號通路的影響。 方法: PC12細(xì)胞分為6個組:對照組、IGF-1 80 ng/ml組、IGF-1 80 ng/ml+LY294002 25μmol/L組、IGF-1 80 ng/ml+LY294002 50μmol/L組、IGF-1 80 ng/ml+PD98059 25μmol/L組、IGF-1 80 ng/ml+PD9805950μmol/L組。PC12細(xì)胞在加入IGF-1 80 ng/ml前30 min,先加入LY294002 (PI3-K抑制劑)或PD98059 (MEK抑制劑)。24 h后Western blotting法檢測Akt、pAkt、ERK1/2、pERK1/2、p38MAPK、pp38MAPK、JNK、pJNK的水平。結(jié)果:①IGF-1增加pAkt及pERK1/2的水平;②IGF-1對pp38MAPK及pJNK水平無明顯影響;③LY294002具有抑制IGF-1對pAkt的作用;④PD98059具有抑制IGF-1對pERK1/2的作用。結(jié)論:①在PC12細(xì)胞中,IGF-1能激活PI3-K/Akt及MAPK/ERK1/2信號通路;②IGF-1對BACE-1、C99、C83及Aβ1-42的影響可能與PI3-K/Akt及MAPK/ERK1/2信號通路激活有關(guān)。 第四部分:PI3-K/Akt及MAPK/ERK1/2信號通路對IGF-1改變APP代謝及BACE-1表達(dá)的影響 目的:觀察LY294002及PD98059對IGF-1改變BACE-1、APP、C99、C83及Aβ1-42表達(dá)的影響,探討IGF-1對APP代謝途徑轉(zhuǎn)變及BACE-1表達(dá)作用的細(xì)胞信號機(jī)制。方法:PC12細(xì)胞分為6個組:對照組、IGF-1 80 ng/ml組、IGF-1 80 ng/ml+LY294002 25μmol/L組、IGF-1 80 ng/ml+LY294002 50μmol/L組、IGF-1 80 ng/ml+PD98059 25μmol/L組、IGF-1 80 ng/ml+PD98059 50μmol/L組。PC12細(xì)胞在加入IGF-1 80 ng/ml前30 min,先加入LY294002或PD98059,24 h后熒光定量PCR法檢測BACE-1的mRNA水平,Western blotting法檢測BACE-1、APP、C99及C83的蛋白表達(dá)水平,ELISA法檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中Aβ1-42水平。結(jié)果:①LY294002及PD98059抑制IGF-1降低BACE-1的mRNA水平;②LY294002及PD98059抑制IGF-1降低BACE-1、C99及Aβ1-42的蛋白表達(dá)水平;③LY294002及PD98059抑制IGF-1增加C83的蛋白表達(dá)水平。結(jié)論:①LY294002及PD98059抑制IGF-1對APP代謝及BACE-1表達(dá)的作用,這種作用具有劑量依賴性;②IGF-1對APP代謝途徑及BACE-1表達(dá)的影響可能與PI3-K/Akt及MAPK/ERK1/2信號通路激活有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R749.16
【圖文】：

* p<0.01 as compared with control2.2.2IGF-1 不顯著影響 PC12 細(xì)胞本身 APP 的表達(dá)IGF-1 對 PC12 細(xì)胞 APP 表達(dá)的影響如圖 4 所示：與對照組相比，各濃度的IGF-1 對 PC12 細(xì)胞的 APP 表達(dá)無顯著影響(p>0.05)。圖 4：IGF-1 對 PC12 細(xì)胞 APP 表達(dá)的影響Fig 4. Effects of IGF-1 on the expression of APP in PC12 cells

圖 1B：BACE-1 的擴(kuò)增曲線Fig 1B: The amplification curve of BACE-1 張華：胰島素樣生長因子-1對PC12細(xì)胞APP代謝和BACE-1表達(dá)的影響及其機(jī)制的研究 E071-

49* p<0.01 as compared with IGF-1 80 ng/ml group2.2 IGF-1 激活 MAPK/ERK1/2 信號通路IGF-1 對 MAPK/ERK1/2 信號通路的影響如圖 2 所示：與對照組相比，80 ng/mlIGF-1 作用于 PC12 細(xì)胞 24 h 后，pERK1/2 水平明顯增加，約為對照組的 144.05%(p<0.01)。在進(jìn)行抑制性研究中，80 ng/ml IGF-1 作用于 PC12 細(xì)胞前 30 min 分別加入 MEK 抑制劑 PD98059 25 μmol/L 和 50 μmol/L，隨著 PD98059 濃度的增加，

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本文編號：2764975