【摘要】：目的:觀察杏仁核和海馬齒狀回(dentate gyrus,DG)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖和分化對(duì)成年Wistar Kyoto(WKY)大鼠抑郁樣行為的影響。方法:本實(shí)驗(yàn)共分三個(gè)組:(1)正常對(duì)照(Wistar)組:選取9周齡Wistar大鼠,給予生理鹽水3周;(2)抑郁模型(WKY)組:選取同齡WKY大鼠并經(jīng)行為學(xué)測(cè)定后篩選出抑郁大鼠作為抑郁模型組,給予生理鹽水3周;(3)陽性對(duì)照(AMI+WKY)組:選取同齡WKY抑郁大鼠,給予阿米替林3周。選用免疫熒光染色細(xì)胞增殖標(biāo)記物Ki67、未成熟神經(jīng)元標(biāo)志物DCX(doublecortin,微管相關(guān)蛋白)檢測(cè)大鼠的杏仁核和海馬神經(jīng)再生水平;應(yīng)用糖水偏好實(shí)驗(yàn)(Sucrose preference test,SPT)、曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)(Open-field test,OFT)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)(Forced swimming test,FST)檢測(cè)各組大鼠的抑郁樣行為學(xué)變化。結(jié)果:(1)WKY抑郁大鼠杏仁核的細(xì)胞增殖標(biāo)記物Ki67~+細(xì)胞數(shù)和未成熟神經(jīng)元標(biāo)志物DCX~+細(xì)胞數(shù)較Wistar大鼠分別降低了35.01%(P0.01)和34.06%(P0.01);類似地,其海馬DG區(qū)的Ki67~+細(xì)胞數(shù)和DCX~+細(xì)胞數(shù)較正常對(duì)照組分別降低了32.88%(P0.01)和39.23%(P0.01)。(2)與抑郁模型組大鼠相比,阿米替林給藥后使杏仁核的細(xì)胞增殖標(biāo)記物Ki67~+細(xì)胞數(shù)和未成熟神經(jīng)元標(biāo)志物DCX~+細(xì)胞數(shù)分別增加了26.76%(P0.05)和37.92%(P0.01);類似地,阿米替林對(duì)照組海馬DG區(qū)Ki67~+細(xì)胞數(shù)和DCX~+細(xì)胞數(shù)較抑郁模型組大鼠分別增加了43.11%(P0.01)和46.68%(P0.01)。(3)與Wistar大鼠相比,WKY抑郁大鼠糖水偏好程度明顯降低(P0.01),曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中運(yùn)動(dòng)總距離和中心停留時(shí)間顯著減少(P0.01),強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中不動(dòng)時(shí)間明顯延長(zhǎng)(P0.01)和游泳時(shí)間明顯縮短(P0.01);阿米替林治療可顯著改善WKY大鼠的上述抑郁樣行為。結(jié)論:(1)成年WKY抑郁大鼠的杏仁核及海馬神經(jīng)干細(xì)胞的增殖和分化能力較正常對(duì)照組顯著降低,提示成年WKY抑郁大鼠的神經(jīng)再生受損;(2)改善杏仁核和海馬受損的神經(jīng)再生可以部分逆轉(zhuǎn)成年WKY大鼠的抑郁樣行為。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R749.4
【圖文】：

好實(shí)驗(yàn)在給藥的第16-18天進(jìn)行，曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)在第19天進(jìn)行，強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)在第20-21天進(jìn)行。在第22天，用4%水合氯醛將大鼠麻醉并處死，然后進(jìn)行免疫熒光實(shí)驗(yàn)。圖1. 實(shí)驗(yàn)流程圖圖注：糖水偏好實(shí)驗(yàn)(Sucrosepreferencetest,SPT)，曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)(Open-fieldtest,OFT)，強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)(Forced swimming test, FST)。1.4 免疫熒光實(shí)驗(yàn)1.4.1 灌注行為實(shí)驗(yàn)結(jié)束后的第二天，使用 4%水合氯醛（1ml/100g）對(duì)大鼠進(jìn)行腹腔麻醉。麻醉好后，使用醫(yī)用膠帶將大鼠四肢固定在手術(shù)臺(tái)上。從胸骨劍突處剪開腹部，向上剪至完全暴露心臟。手持輸液針從心尖處進(jìn)針，插至升主動(dòng)脈，固定輸液針。打開調(diào)

10圖 2 比較三組大鼠杏仁核神經(jīng)干細(xì)胞增殖數(shù)：圖 A 是各組大鼠杏仁核的 Ki67 免疫熒光染色的代表性圖片；圖 B 是各組大鼠杏仁胞增殖數(shù)的柱狀圖。Ki67 是一種增殖相關(guān)的核抗原，表達(dá)呈紅色；DAPI 標(biāo)記細(xì)胞核色。阿米替林（Amitriptyline,AMI），**P < 0.01 vs. Wistar，#P < 0.05 vs. WKY

11圖 3 比較三組大鼠海馬 DG 區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞增殖數(shù)：圖 A 是各組大鼠海馬 DG 的 Ki67 免疫熒光染色的代表性圖片；圖 B 是各組大鼠海經(jīng)干細(xì)胞增殖數(shù)的柱狀圖。Ki67 是一種增殖相關(guān)的核抗原，表達(dá)呈紅色；DAPI 標(biāo)記細(xì)呈藍(lán)色。阿米替林（Amitriptyline,AMI），**P < 0.01 vs. Wistar，##P < 0.01 vs. WKY

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