【摘要】： 目的 以阿爾茨海默病區(qū)域選擇性損傷的內(nèi)在機制為出發(fā)點,探討小腦神經(jīng)元代謝物對大鼠和轉(zhuǎn)基因小鼠大腦皮層和海馬區(qū)β淀粉樣蛋白(β-Amyloid, Aβ)含量的影響及可能的作用機制,同時探討不同腦區(qū)PPARγ活性差異在阿爾茨海默病區(qū)域選擇性損傷中的作用及作用機制,并由此提供一種治療阿爾茨海默病的新思路。 方法 利用腦立體定位儀第四腦室抽取小腦腦脊液或通過細胞培養(yǎng)收集并濃縮小腦條件培養(yǎng)基,注射到大鼠及轉(zhuǎn)基因小鼠的側腦室內(nèi),飼養(yǎng)一周后,斷頭法處死取海馬及皮層組織,通過免疫組織化學、熒光染色和酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測大腦皮層和海馬區(qū)的Aβ含量和Aβ斑塊沉積量,并用Western Blot的方法檢測胰島素降解酶(insulin-degrading enzyme, IDE)和中性內(nèi)肽酶(neprilysin, NEP)的表達情況。 同時,利用腦立體定位儀向APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠的第四腦室中注入PPARγ抑制劑GW9662,飼養(yǎng)一周后進行行為學檢測,然后斷頭法處死取海馬及皮層組織,通過酶聯(lián)免疫吸附試驗、熒光染色和免疫組織化學檢測小腦Aβ含量和Aβ斑塊沉積量,并用Western Blot的方法檢測胰島素降解酶(insulin-degrading enzyme, IDE)的表達情況。 結果 大鼠小腦腦脊液自體輸入減少其海馬區(qū)Aβ斑塊沉積,降低其大腦皮層中可溶性和不可溶性Aβ的含量,并上調(diào)大鼠大腦皮層區(qū)IDE的表達;小腦條件培養(yǎng)基中的小腦神經(jīng)元代謝物可以促進神經(jīng)元對Aβ的清除,并降低APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠皮層和海馬中的Aβ含量和斑塊沉積量,改善APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠的學習記憶能力,同時使得海馬神經(jīng)元IDE及NEP的表達量增加。另外,小腦腦脊液中的小腦神經(jīng)元代謝物同樣也能降低APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠皮層和海馬中的Aβ含量和斑塊沉積量,并改善APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠的學習記憶能力。 此外,抑制APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠小腦的PPARγ活性可以顯著增加其小腦可溶性Aβ和不可溶性Aβ的含量,增加小腦Aβ斑塊沉積量,并使得APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠的運動協(xié)調(diào)功能發(fā)生障礙;同時,小腦IDE的表達存在顯著下調(diào)。 結論 小腦神經(jīng)元代謝物可以降低大鼠及APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠大腦皮層和海馬區(qū)內(nèi)的Aβ含量及改善APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠的認知障礙。這種保護作用是通過上調(diào)IDE和NEP的表達來實現(xiàn)的;并且小腦PPARγ的高活性對于ΑD的病理損傷也具有抵抗作用,這種保護作用可能是通過上調(diào)IDE的表達、增加Aβ的降解從而實現(xiàn)小腦對AD病理損傷抵抗的。以上研究結果為阿爾茨海默病區(qū)域選擇性損傷的機制做出了積極的探索,并為阿爾茨海默病的臨床治療提供了一個新的思路。
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R749.1
【圖文】：

16圖3.1.1 大鼠小腦腦脊液自體輸入減少其海馬區(qū)Aβ斑塊沉積 。（A）免疫組織化學顯示大鼠海馬區(qū)Aβ斑塊沉積。紅色箭頭所示為對照組Aβ斑塊的褐色沉積（×100，蘇木精染色）；（B）ImageJ 軟件定量分析免疫組織化學切片上Aβ斑塊的光密度值。與對照組相比，差異有統(tǒng)計學意義。*P < 0.05。Fig 3.1.1 Auto-transplantation of cerebellar cerebrospinal fluid reduced the deposition of Aβ inhippocampus on rat.(A) Immunohistochemistry showed: the deposition of Aβ plaque in the experimental group andcontrol group. Red arrow indicates : Red arrow indicated the deposition of Aβ. (×100, dyed byhematoxylin) (B) Aβ plaque in Immunohistochemistry slices was quantified using ImageJ Software.Asterisk indicated statistically significant (*P < 0.05).3.1.2 大鼠小腦腦脊液自體輸入降低其大腦皮層中可溶性和不可溶性 Aβ的含量ELISA 結果顯示，實驗組大鼠大腦皮層接受自體小腦腦脊液注射后，其可溶性 Aβ 含量(圖 3.1.2A)和不可溶性 Aβ 含量(圖 3.1.2B)均明顯低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P < 0.05)。(B)

腦脊液自體輸入減少其大腦皮層中可溶性和不可溶性 Aβ顯示大鼠接受自體小腦腦脊液輸入后其大腦皮層中 (A) 含量。與對照組相比，差異有統(tǒng)計學意義。*P < 0.05。ansplantation of cerebellar cerebrospinal fluid decreasedl in cerebral cortex on rat. indicated: the level of Aβ in the experimental group and contrd statistically significant (*P < 0.05).腦脊液自體輸入上調(diào)大鼠大腦皮層區(qū) IDE 的表達lot 結果顯示：實驗組大鼠大腦皮層接受自體小腦腦平較對照組明顯升高。差異有統(tǒng)計學意義(P < 0.0

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本文編號：2718994