發(fā)布時間：2020-06-14 05:37

【摘要】：目的:探討醌氧化還原酶1(NQO1)基因mRNA和蛋白在甲基苯丙胺(METH)依賴人群的病理生理作用,NQO1 609 C/T(rs1800566)多態(tài)性等位基因和基因型與METH依賴者相關性及其影響因素,分析NQO1609C/T基因型是否影響NQO1基因的轉錄和翻譯水平變化,為METH依賴的預防和治療提供分子生物學依據(jù)。方法:收集392例中國漢族METH依賴者(實驗組)和669例中國漢族無METH依賴的健康體檢者(對照組)的人口學特征、實驗室檢查資料及外周血樣;實時熒光定量聚合酶鏈反應(qPCR)檢測NQO1 mRNA在PBMCs的相對表達量,酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測血漿蛋白的表達水平,NQO1 609C/T多態(tài)性采用限制片段長度多態(tài)性聚合酶鏈反應(RFLP-PCR)和直接測序基因分型技術進行檢測。利用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對所得的實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析,以P0.05為檢驗有統(tǒng)計學差異。結果:實驗組在年齡、性別、紅細胞計數(shù)和收縮壓與對照者均沒有統(tǒng)計學差異(P0.05);實驗組身體質(zhì)量指數(shù)(BMI)20.44±5.14 kg/m~2明顯低于對照組BMI 22.19±3.13kg/m~2(P0.01);實驗組的白細胞計數(shù)、血紅蛋白量和舒張壓均顯著高于對照組(P0.01)。NQO1 mRNA實驗組的相對表達量3.2650±2.2943明顯高于對照組相對表達量1.0125±0.7959(P0.001),NQO1血漿蛋白在實驗組表達水平0.2368±0.1486顯著低于對照組表達水平0.5844±0.1742(P0.001)。392例實驗組和669例對照組完成NQO1 609C/T等位基因和基因型分型,NQO1 609C/T多態(tài)性基因型頻率在對照組人群具有較好的代表性(基因型頻率分布符合HWE,P=0.06)。實驗組NQO1 609C/T多態(tài)性T等位基因頻率46.56%明顯高于對照組T等位基因頻率41.78%(P=0.032,OR=1.214,95%CI=1.017-1.450)。實驗組NQO1 609C/T多態(tài)性CC、CT、TT基因型頻率分別為24.49%、57.91%和17.60%,對照組CC、CT、TT基因型頻率分別為32.14%、52.17%和15.69%;在同質(zhì)遺傳模式(TT vs CC)、異質(zhì)遺傳模式(TC vs CC)、顯性遺傳模式(TC+TT vs CC)和隱性遺傳模式(TT vs TC+CC)分析NQO1 609C/T多態(tài)性基因型與METH依賴人群的風險關系發(fā)現(xiàn)在異質(zhì)遺傳模式和顯性遺傳模式下差異均有統(tǒng)計學意義(TC vs CC:P=0.012,OR=1.457,95%CI=1.087-1.952;TC+TT vs CC:P=0.008,OR=1.460,95%CI=1.102-1.935),在同質(zhì)遺傳模式和隱性遺傳模式下差異無統(tǒng)計學差異(TT vs CC:P=0.051,OR=1.472,95%CI=0.999-2.168;TT vs TC+CC:P=0.418,OR=1.147,95%CI=0.822-1.601)。多因素Logistic回歸分析調(diào)整年齡和性別后,仍得到類似結果。實驗組按照同質(zhì)遺傳模式和異質(zhì)遺傳模式對年齡、性別、BMI、血壓和血常規(guī)進行分層分析發(fā)現(xiàn)NQO1 609C/T多態(tài)性基因型無論在同質(zhì)遺傳模式或異質(zhì)遺傳模式下均無統(tǒng)計學意義。NQO1 609C/T多態(tài)性的功能評價采用對照組基因型與其mRNA和蛋白是否存在統(tǒng)計學差異進行評價,結果表明NQO1 609C/T多態(tài)性CT、TT和CT/TT基因型與NQO1 mRNA和血漿蛋白無統(tǒng)計學差異(P0.05);實驗組也得出類似結果。結論:(1)METH依賴可能引起人體身體素質(zhì)和生理生化指標的改變;(2)NQO1基因mRNA和蛋白在METH依賴的病理生理過程中起著重要的作用;(3)NQO1 609C/T多態(tài)性可能與中國漢族METH依賴人群的遺傳易感性有關,并不受年齡、性別、BMI、血壓和炎癥狀態(tài)等因素影響;(4)NQO1 609C/T多態(tài)性可能不引起NQO1轉錄和翻譯水平的變化。 【學位授予單位】：川北醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R749.64

【圖文】：

圖 1 總 RNA 瓊脂糖凝膠電泳圖Fig 1 The total RNA of electrophoretogramCR 擴增特異性和擴增效率的檢測 擴增的特異性檢驗：圖 2 顯示的是 β-actin 和 NQO峰值分別為 85.9℃和 83.9℃，兩者的溶解曲線均呈峰，無雜峰，表明擴增產(chǎn)物具有良好的特異性。

圖 2 β-actin 和 NQO1 的熔解曲線Fig2 The melting curve of β-actin and NQO1A：β-actin 熔點峰值：85.9℃；B：NQO1 熔點峰值：83.9℃；A：The melting peak of β-actin was 85.9℃ ；B：The melting peak of NQO1 was 83.9℃qPCR 擴增效率的檢驗：圖 3 顯示的是 β-actin 和 NQO1 的標準準品經(jīng) 10 倍濃度梯度稀釋后進行 qPCR 擴增而獲得的，β-acO1 的直線相關系數(shù)（R2）分別 0.997 和 0.991，斜率（slope）分614 和-3.3349，經(jīng)公式換算后擴增效率分別為 94.49%和 99.46%直線的相關性好，擴增效率高，qPCR 反應體系和條件適宜；圖是 β-actin 和 NQO1 標準品 10 倍濃度梯度稀釋的 qPCR 擴增曲滑，復孔高度一致，，濃度梯度間距基本一致；表明在此條件下

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本文編號：2712366