【摘要】： 目的 本課題通過應(yīng)用重復(fù)經(jīng)顱磁刺激,從行為學(xué)、形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)等不同層面綜合研究重復(fù)經(jīng)顱磁刺激對(duì)血管性癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響,探討其作用的分子機(jī)制,為血管性癡呆的臨床治療提供有價(jià)值的實(shí)驗(yàn)依據(jù)和方法。 方法 將Wistar大鼠隨機(jī)分為以下四組:①正常對(duì)照組、②癡呆模型組、③重復(fù)經(jīng)顱磁刺激低頻治療組(簡稱低頻刺激組)、④重復(fù)經(jīng)顱磁刺激高頻治療組(簡稱高頻刺激組)。癡呆模型組、低頻刺激組和高頻刺激組均采用兩血管阻斷法(2VO)制備血管性癡呆模型。 造模前、造模后和重復(fù)經(jīng)顱磁刺激治療后均進(jìn)行Morris水迷宮行為學(xué)測(cè)試,包括定位航行試驗(yàn)和空間探索試驗(yàn),計(jì)算全時(shí)程平均逃避潛伏期和游泳路程,計(jì)算在原平臺(tái)象限的游泳時(shí)間和在原平臺(tái)象限游泳路程占總游泳路程的百分比。低頻刺激組大鼠接受頻率0.5Hz重復(fù)經(jīng)顱磁刺激(六個(gè)療程,每療程持續(xù)5天),高頻刺激組大鼠接受頻率5Hz重復(fù)經(jīng)顱磁刺激(六個(gè)療程,每療程持續(xù)5天)。各組大鼠斷頭取腦,應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)海馬CA1區(qū)BDNF、NMDAR1、SYN蛋白表達(dá)情況。應(yīng)用HE染色,光鏡觀察各組大鼠海馬CA1區(qū)細(xì)胞形態(tài)。應(yīng)用透射電鏡觀察各組大鼠海馬CA1區(qū)突觸形態(tài)、數(shù)量等超微結(jié)構(gòu)。 結(jié)果 1.Morris水迷宮測(cè)試結(jié)果 大鼠造模后2天進(jìn)行水迷宮定位航行試驗(yàn),癡呆模型組、低頻刺激組、高頻刺激組大鼠的全時(shí)程平均逃避潛伏期和游泳路程比正常對(duì)照組延長(p＜0.05),空間探索試驗(yàn)中在原平臺(tái)象限的游泳時(shí)間和在原平臺(tái)象限的游泳路程占總路程百分比比正常對(duì)照組縮短(p＜0.05)。重復(fù)經(jīng)顱磁刺激治療6個(gè)療程后,低頻刺激組和高頻刺激組大鼠全時(shí)程平均逃避潛伏期和游泳路程比癡呆模型組縮短(p＜0.05),低頻刺激組與高頻刺激組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05),空間探索試驗(yàn)中在原平臺(tái)象限的游泳時(shí)間和在原平臺(tái)象限的游泳路程占總路程百分比比癡呆模型組延長(p＜0.05),低頻刺激組與高頻刺激組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。 2.免疫組化染色結(jié)果:癡呆模型組大鼠BDNF、NMDAR1、SYN蛋白表達(dá)量比正常對(duì)照組大鼠減低(p＜0.05),低頻刺激組和高頻刺激組BDNF、NMDAR1、SYN蛋白表達(dá)量比癡呆模型組增高(p＜0.05),低頻刺激組與高頻刺激組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。 3.光鏡觀察顯示,癡呆模型組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞層次數(shù)量明顯減少,排列松散,細(xì)胞受損嚴(yán)重,大量萎縮,輪廓不清,細(xì)胞深染,出現(xiàn)核固縮,細(xì)胞器結(jié)構(gòu)不清。低頻刺激組和高頻刺激組多數(shù)細(xì)胞排列較整齊,細(xì)胞形態(tài)較完好,僅見少量核固縮。 4.電鏡下觀察,癡呆模型組突觸數(shù)量雖多于正常組,但突觸體積明顯減小,形態(tài)改變,為長形或不規(guī)則形;高倍觀,突觸前區(qū)變形,突觸小泡減少并聚集,線粒體凝聚,突觸后區(qū)體積減小,突觸前后膜增厚,融合,突觸間隙消失,失去其正常形態(tài)。低頻刺激組和高頻刺激組的部分突觸結(jié)構(gòu)近于正常,部分突觸前后膜略見增厚,但突觸間隙可辨認(rèn)。 結(jié)論 1.本研究從行為學(xué)、形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)等不同水平,研究了血管性癡呆的特點(diǎn),通過對(duì)血管性癡呆大鼠海馬CA1區(qū)BDNF、NMDAR1、SYN等幾個(gè)蛋白的表達(dá)情況綜合分析,結(jié)果表明BDNF、NMDAR、SYN蛋白表達(dá)的增加有利于學(xué)習(xí)記憶功能的恢復(fù)。 2.重復(fù)經(jīng)顱磁刺激對(duì)血管性癡呆認(rèn)知功能障礙有恢復(fù)治療作用,主要表現(xiàn)為影響了突觸可塑性,其可能的機(jī)制為: (1)rTMS對(duì)突觸后可塑性的影響:rTMS促進(jìn)BDNF等神經(jīng)營養(yǎng)因子的表達(dá),進(jìn)而可通過增加NMDA受體通道的開放頻率,特異性地增強(qiáng)突觸后致密物上NMDA亞單位的磷酸化。NMDA受體被激活時(shí),使鈣離子通透性增加,進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。鈣離子可進(jìn)一步激活細(xì)胞內(nèi)鈣離子依賴的酶,從而引起一系列生化過程,并且促進(jìn)了NMDA受體依賴的長時(shí)程增強(qiáng)的產(chǎn)生,改變突觸的傳遞效能,促使學(xué)習(xí)記憶功能的增強(qiáng)。 (2)rTMS對(duì)突觸前可塑性的影響:rTMS使突觸前區(qū)內(nèi)的SYN表達(dá)增加,具有促進(jìn)突觸再建和增強(qiáng),提高突觸效能的作用,促進(jìn)神經(jīng)損傷修復(fù)和功能重塑,對(duì)于血管性癡呆大鼠的學(xué)習(xí)記憶有恢復(fù)作用。 3.本研究為血管性癡呆的臨床治療提供了新的線索,為臨床應(yīng)用重復(fù)經(jīng)顱磁刺激治療血管性癡呆提供了有價(jià)值的理論依據(jù),同時(shí)為血管性癡呆的藥物治療提供了可能的新的作用靶點(diǎn)。
【圖文】：

各組大鼠逃避潛伏期進(jìn)一步下降，但下降趨勢(shì)偏緩，并且逐漸趨于穩(wěn)定。各組大鼠全時(shí)程平均逃避潛伏期和尋找水下平臺(tái)的游泳路程無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。見表l及圖5，6。表1造模前定位航行鋇l試中各組大鼠連續(xù)3天的全時(shí)得彩敏蜘魏琳期及游泳路程(x北)組別全時(shí)程平均逃避潛伏期(s)游泳路程(cm)正常對(duì)照組癡呆模型組低頻刺激組高頻刺激組27.54士5.6126.52士5.15*25.98士5.74*27.3肚5.31*675.82土54.19642.28士51.28*640.77士49.25*673.53士53.33*與正常對(duì)照組卜以友，*孫0.05，

本文編號(hào)：2661310