【摘要】：目的:探究在阿爾茨海默病(AD)大鼠腦內(nèi)共同移植嗅鞘細胞(OECs)和神經(jīng)干細胞(NSCs),OECs在腦內(nèi)對NSCs的增殖和定向分化的影響,為干細胞腦移植治療AD提供新的理論依據(jù)。 方法: 1.從新生5-7d大鼠嗅球分離培養(yǎng)嗅鞘細胞,進行細胞純化和鑒定。 2.從新生24h內(nèi)大鼠海馬內(nèi)分離培養(yǎng)神經(jīng)干細胞,形成原代克隆神經(jīng)細胞球后傳代培養(yǎng),以免疫細胞化學法和免疫熒光法進行鑒定,移植前使細胞被5-嗅脫氧尿嘧啶核苷(BrdU)標記。 3.大鼠立體定位儀下將Aβ1-42注入大鼠海馬CA1區(qū)制備成AD大鼠模型,應用Morris水迷宮和病理學HE染色進行模型鑒定。 4.將生理鹽水,NSCs和NSCs+OECs分別注射入AD模型大鼠海馬CA1區(qū),分別于移植7d,14d,21d和28d后,對大鼠學習記憶能力進行Morris水迷宮行為學檢測,并行大鼠腦組織切片免疫組織化學染色檢測BrdU,神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)和膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(ChAT)陽性表達情況,分析移植細胞在AD大鼠腦內(nèi)的增殖和定向分化情況。 結(jié)果: 1.嗅鞘細胞培養(yǎng)4-7d時突起逐漸變長,主要二至三極的細胞,呈NGFRp75和GFAP免疫細胞化學染色陽性,純度可至90%以上。 2.神經(jīng)干細胞原代培養(yǎng)7d時會形成較大的神經(jīng)細胞球,分離傳代后,經(jīng)Nestin和BrdU免疫熒光染色,細胞呈陽性染色,經(jīng)免疫細胞化學染色呈NSE,GFAP和ChAT陽性染色。 3.造模后大鼠行動減少,水迷宮檢測逃避潛伏期和穿越平臺次數(shù)較造模前明顯減少(P㩳0.01),學習記憶能力顯著降低,HE染色顯示細胞羅列層次減少,細胞雜亂,部分細胞核固縮深染。 4.細胞移植后實施Morris水迷宮行為學檢測,從14d時間點開始,神經(jīng)干細胞移植組大鼠的平均逃避潛伏期則顯著低于鹽水組(P㩳0.01),聯(lián)合移植組的各時間點的平均潛伏期均明顯低于鹽水組,21d和28d聯(lián)合移植組的平均潛伏期明顯低于神經(jīng)干細胞移植組,提示學習記憶能力開始得以恢復。 5.細胞移植后腦組織切片免疫組織化學染色顯示,聯(lián)合移植的細胞存活數(shù)量明顯高于NSCs獨立移植的數(shù)目(P㩳0.01)。各時間點間比較,NSCs獨立移植組的細胞存活數(shù)、NSE陽性細胞數(shù)和ChAT陽性細胞數(shù)差異不顯著,7d,14d和21d聯(lián)合移植組的細胞數(shù)量、NSE陽性細胞數(shù)和ChAT陽性細胞數(shù)增長趨勢顯著,差異具有顯著性統(tǒng)計學意義(P㩳0.01),21d-28d增長趨勢變緩(P㩳0.05)。 結(jié)論: 1.從新生大鼠海馬和嗅球分別分離培養(yǎng)的神經(jīng)干細胞和嗅鞘細胞共同移植到AD大鼠腦內(nèi),嗅鞘細胞能夠促使神經(jīng)干細胞存活,增殖和向膽堿能神經(jīng)元分化。 2.嗅鞘細胞和神經(jīng)干細胞聯(lián)合移植能夠明顯提高AD模型大鼠的學習和記憶能力。
【學位授予單位】：佳木斯大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R749.16

【參考文獻】

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本文編號：2612038