【摘要】： 目的 隨著人類期望壽命的延長，人口老齡化和癡呆的發(fā)病率呈上升趨勢。老年期癡呆不僅是個體疾病，而且因其帶來的巨大社會負擔，也成為一個重要的社會公共問題。阿爾茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是老年期癡呆的一個重要類型，，AD是一種原發(fā)變性型老年性癡呆，其特點是發(fā)病年齡較早，多在65歲以前，故又稱為早老性癡呆，病程進展緩慢，主要表現(xiàn)為近期記憶力明顯減退，在神經(jīng)化學方面，往往多種神經(jīng)遞質系統(tǒng)受損。發(fā)達國家對此病的研究較早，也較深入。我國對老年期癡呆的研究也已取得了一定的成果。 AD最早病變主要是海馬病變所致記憶缺損，接著是大腦皮層病變，不僅導致記憶惡化，而且其他認知功能如語言、空間結構能力亦受到損害。關于AD的病理機制，目前較為明確的是：(1)基底前腦核群內乙酰膽堿(acetylcholine，Ach)能神經(jīng)元的變性和丟失；(2)患者腦內形成神經(jīng)元纖維纏結(Neurofibrillary tangle，NFT)；(3)新皮質和海馬結構內出現(xiàn)大量的淀粉樣沉積，其數(shù)量的多寡與AD的嚴重程度呈正相關。建立一個可靠的AD動物模型是研究AD的重要前提，建立AD動物模型的方法很多，各有其優(yōu)缺點，迄今為止尚無一種公認的最理想的方法。這里我們選取了離斷穹隆海馬傘通路來建立AD模型，此種方法主要是通過切斷隔-海馬通路，破壞膽堿能及非膽堿能纖維傳入，導致實驗動物行為及神經(jīng)化學方面的缺損，造成動物空間定向和記憶障礙及膽堿能神經(jīng)元的丟失。 泛素是一種相對分子質量為8，565的小分子熱休克蛋白，由76個氨基酸組成，由多泛素基因和單泛素融合基因編碼，它僅存在于真核生物中，蛋白結構在不同物種之間差異很小。泛素是ATP依賴性溶酶體外蛋白降解 系統(tǒng)的啟動信號，主要降解正常的短時效蛋白和異常蛋白。通過泛素途徑 降解的底物蛋白至少具備2個條件：氨基酸N末端和賴氨酸殘基。泛素被 活化酶激活后，傳遞給泛素結合酶，并通過泛素連接酶與底物蛋白結合，而 后在26s蛋白酶體的作用下降解。泛素分子之間通過48位賴氨酸連接形 成的多泛素鏈是啟動蛋白降解的必要條件。 蛋白激酶Chrotein kinase C，PKC）是廣泛分布于真核細胞特別是哺 乳動物細胞中的一種蛋白激酶，是由多種同工酶組成的蛋白質家族，它們的 結構相似，但各具有不同的生化特性及生理功能。通過分子克隆方法證明， PKC不是單一分子的酶，而是一組密切相關的有多種亞型的蛋白質家族。 PKC有多種亞型，各亞型顯示了不同的酶學特性及不同的組織表達和特定 的細胞酶定位。目前已明確在動物組織中有12種亞型，且已分組并命名。 膠質細胞源性的神經(jīng)營養(yǎng)因子（glial cell line－derived llltrOPhiC faC－ tor，GDNF）是一種強的神經(jīng)營養(yǎng)因子，可以增進中腦多巴胺能神經(jīng)元的存 活。GDNF是一種糖基化的二硫鍵同二聚體，是轉化生長因子叭（TG p）超 家族的遠親。GDNF含有7個保守的半腕氨酸殘基，與TGF 6超家族的所 有成員有同樣的相對空間特點。胚胎中腦培養(yǎng)，GDNF促進多巴胺能神經(jīng) 元的存活和形態(tài)學分化，并能增強對多巴胺攝取的高親和性。 絲裂原激活蛋白激酶（mitogen activated protein kinase，MAPK）是80年 代末期在研究生長因子受體磷酸化產(chǎn)物時發(fā)現(xiàn)的一類絲／蘇氨酸蛋白激酶。 可被生長因子、細胞因子、激素、神經(jīng)遞質、細胞應激等廣泛刺激激活，不僅 在細胞增殖中起中心作用，還在細胞分化、發(fā)育、凋亡、惡性轉化中扮演重要 角色。在哺乳動物中，MAPK包括 5個亞類：即胞外調節(jié)蛋白激酶hxtra cellular。吵ated protein kinase，ERK）上－inn氨基末端激酶（Jun N－te而－ nal kinase，hKXp38上RK3／4上。這些激酶的信號通路具有高度保守 性，即都經(jīng)3個關鍵激酶通過級聯(lián)信號將胞外刺激傳遞到胞核，通過磷酸化 轉錄因子調節(jié)細胞功能。不同的激酶也有相對獨立的信號通路，作用于不 同的底物介導不同的細胞效應。 ERK通刪究最早最深人，ERK包括兩個高度同源的亞類ERKI和 ERKZ。胞外刺激可經(jīng)G蛋白受體、生長因子受體和酪氨酸蛋白激酶受體， 經(jīng) Raf一MEK－ERK級聯(lián)信號激活 ERK，調節(jié)轉錄因子（女 Elki、AWl、C－ MyC、STAT等）和一些激酶活性，促進細胞增殖，蛋白質的合成。 ·2· 我們檢測了穹隆海馬傘切斷大鼠海馬的 PKC，ERK和 GDNF水平，進 而探討它們之間的關系，對研究A／D的信號轉導機制有一定的意義。并希 望通過干預不同信號轉導通路為人。D治療提供新的思路和途徑。 材料和方法 1．用腦立體定位儀建立穹隆海馬傘切斷AD大鼠模型，用Y型迷宮對 大鼠進行學習和記憶觀察。 2．應用免疫組織化學技術檢測泛素在大鼠腦中的分布。 3．應用同位素檢測了大鼠海馬PKC和ERK的活性。 4．應用蛋白質印跡技術，檢測了大鼠海馬泛素、GDNF和ERK的水平。 5，應用RT－PCR技術檢測了大鼠海馬的ERKZ表達。 結 果 1．Y型迷宮測試大鼠行為學顯；示假手術組和正常對照組大鼠迷宮學習 記憶
【學位授予單位】：中國醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2002
【分類號】：R749.16

【參考文獻】

相關期刊論文 前8條

1 徐勇,黃頌敏;MAPK家族與糖尿病并發(fā)癥[J];國外醫(yī)學.內分泌學分冊;2001年01期

2 劉凌志;肺疾病中有關蛋白激酶C的研究進展[J];國外醫(yī)學.呼吸系統(tǒng)分冊;1999年04期

3 錢亦華,胡海濤;建立Alzheimer病動物模型的方法[J];神經(jīng)解剖學雜志;1999年01期

4 李翠風;老年性癡呆與信號轉導[J];生命的化學;2000年06期

5 蔡圣蕓,肖林,邱儉,倪鑫,陳宜張;雌激素的神經(jīng)保護作用[J];生命的化學;2001年02期

6 張璐,張琳,姜勇,趙克森;絲裂原激活蛋白激酶信號轉導通路在細胞凋亡中的作用[J];生命的化學;1998年04期

7 張璐,姜勇,張琳;絲裂素活化蛋白激酶信號轉導通路研究進展[J];國外醫(yī)學(生理、病理科學與臨床分冊);1999年02期

8 張巍,袁云,陳清棠;運動神經(jīng)元病的病理進展和泛素陽性包涵體[J];中華神經(jīng)科雜志;2001年05期

本文編號：2592553