【摘要】：阿爾茨海默病(Alzheimer's disease, AD)是一種最常見的神經退行性疾病,約占癡呆原因的60%,典型病理特征包括老年斑的形成,神經纖維纏結以及神經元死亡。目前研究認為β淀粉樣蛋白(beta amyloid, Aβ)誘導的氧化應激和線粒體功能障礙在AD發(fā)病中發(fā)揮關鍵作用。 目的：探討坡壘酚甲(Hopeahainol A, Hop A)和甘草酸二銨(Diammonium glycyrrhizinate,DG)對Ap1-42誘導神經毒性的保護作用。 方法：(1)第一部分研究利用高效液相色譜法,電鏡以及染色法評價HopA對于Aβ1-42體內外聚集能力的影響。ELISA法檢測HopA處理APP/PS1轉基因小鼠腦組織氧化應激水平的變化,電生理學檢測HopA對于APP/PS1轉基因小鼠海馬長時程電位(long term potential, LTP)的影響,行為學檢測HopA對于APP/PS1轉基因小鼠的認知以及記憶功能的影響。(2)第二部分研究利用MTT, LDH以及AnnexinV/PI染色判斷DG對Aβ1-42處理神經元細胞活性的影響,Real-time PCR和Western blot檢測DG對于過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活因子-1α(peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator la, PGC-la)水平的表達,并通過報告基因技術探討DG的可能作用位點。同時行為學檢測DG對于Aβ1-42誘導AD小鼠的認知以及記憶功能的影響。 結果：(1)野生型B6小鼠經尾靜脈注射HopA,可以在血清,腦組織以及腦脊液檢測到HopA的存在。HopA能夠顯著降低APP/PS1小鼠腦皮質和海馬區(qū)蛋白,脂質以及核酸過氧化產物3-NT,4-HNE以及8-OHGD的水平,電鏡以及剛果紅染色結果證實HopA可以抑制Aβ1-42的纖維化和沉積；電生理結果顯示HopA明顯改善APP/PS1小鼠突觸功能以及海馬CA1區(qū)的LTP誘導功能；行為學結果顯示HopA明顯減少APP/PS1小鼠找到平臺的潛伏期以及上臺前路程,同時增加其穿過平臺的次數。(2)MTT, LDH以及AnnexinV/PI染色證實DG能夠顯著提高神經元細胞活力并減少其凋亡水平,DG能夠部分代償Aβ1-42所致的神經元線粒體膜電位降低,同時明顯降低細胞色素c的釋放以及下游caspase-9和caspase-3的活性。DG能夠顯著上調PGC-1α的mRNA和蛋白水平,而特異性抑制PGC-1α則部分抑制了其保護作用。對PGC-1α的啟動子分析顯示,DG可能通過上調CREB從而誘導PGC-1α的轉錄。行為學結果顯示DG明顯減少AD小鼠找到平臺的潛伏期以及上臺前路程,同時增加其穿過平臺的次數。 結論：氧化應激在AD的發(fā)病機制中發(fā)揮重要作用,而針對氧化應激過程中兩種靶分子ABAD和PGC-1α的藥物HopA與DG通過抑制氧化應激抑制Aβ-42誘導的神經毒性,提示HopA與DG是兩種潛在治療AD的新型藥物。
【學位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R749.16

【參考文獻】

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本文編號：2565667