【摘要】：獎賞通路在藥物成癮和戒斷中發(fā)揮了重要的作用。伏隔核（NAc）是這條通路中的一個重要核團(tuán)。已知，表達(dá)于突觸前膜的大麻素1型受體（CB1Rs）廣泛地分布于NAc上。并且，CB1Rs和NAc一樣，也參與了對藥物成癮的調(diào)節(jié)。早先的研究發(fā)現(xiàn)，可卡因間斷給藥1周后，CB1Rs參與了對紋狀體γ 氨基丁酸（GABA）突觸的調(diào)節(jié)。受此啟發(fā)，我們研究了大鼠在嗎啡（MOR）戒斷時，CB1Rs對NAc突觸的傳遞調(diào)節(jié)功能的影響。在本研究中，7天的重復(fù)皮下給藥（MOR）可以成功地誘導(dǎo)大鼠的條件性位置偏愛（CPP）模型。運(yùn)用電生理學(xué)方法可以看到，CB1Rs激動劑WIN55,212 2對NAc神經(jīng)元的自發(fā)抑制性突觸后電流（sIPSC）、微小抑制性突觸后電流（mIPSC）以及刺激誘發(fā)的抑制性突觸后電流（eIPSC）的抑制作用在3天MOR組和3周MOR組中較同時間的生理鹽水組（SAL組）明顯增強(qiáng)，并且這個增強(qiáng)作用可以被預(yù)先灌流的CB1Rs抑制劑AM251阻斷。而在5周MOR組和5周SAL組的比較中，這種抑制增強(qiáng)作用消失。用同樣方法觀察興奮性突觸后電流（EPSCs），結(jié)果顯示，WIN55,212 2對NAc神經(jīng)元的自發(fā)興奮性突觸后電流（sEPSC）、微小興奮性突觸后電流（mEPSC）以及刺激誘發(fā)的興奮性突觸后電流（eEPSC）的影響，與SAL組在3天、3周和5周時比較沒有統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05）。根據(jù)以上結(jié)果，我們對比了MOR組和SAL組在3天、3周以及5周時的CPP變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，3天MOR組和3周MOR組的大鼠保留了對MOR配對空間的偏愛，而在5周時這種現(xiàn)象消失。由此我們得出結(jié)論，在MOR戒斷時，大鼠NAc中CB1Rs的含量增多和（或者）功能增強(qiáng)，并且GABA電流的敏化作用是逐漸可逆的。以上結(jié)果表明，調(diào)節(jié)CB1Rs對于治療阿片類藥物成癮可能具有重要的理論和現(xiàn)實意義。本實驗分為四個部分： 第一部分:大鼠嗎啡戒斷模型的建立以及WIN55,212 2實驗濃度的確定 運(yùn)用CPP方法，研究人員可以預(yù)測人類和動物對成癮藥物的依賴性和渴求性。因此CPP實驗是一項被廣泛應(yīng)用于檢測藥物成癮的行為學(xué)方法。在本研究中，我們應(yīng)用此法觀察7天皮下間斷注射MOR是否可以成功誘導(dǎo)大鼠對MOR的偏愛，進(jìn)而制成穩(wěn)定的大鼠嗎啡CPP模型。結(jié)果顯示，反復(fù)的MOR注射可以成功地誘導(dǎo)大鼠的CPP形成（P 0.05），而用SAL處理的大鼠卻沒有形成對SAL的偏愛（P0.05）。因此，通過CPP方法，我們可以成功地建立大鼠MOR戒斷模型。 為了保證本研究的穩(wěn)定性和可重復(fù)性，我們進(jìn)行了劑量依賴性實驗。我們發(fā)現(xiàn)，0.1μM的Win55,212 2對MOR組和SAL組較實驗前沒有統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05）。然而，0.3μM，1μM，2μM，4μM的Win55,212 2能夠劑量性地抑制MOR組和SAL組的sIPSC的頻率和eIPSC的幅度（P 0.05）。因此，，為了保證實驗的穩(wěn)定性并且盡量避免藥物的毒性作用，我們選擇Win55,212 2的實驗濃度為1μM。 第二部分：CB1Rs激動劑和抑制劑對NAc中的MSNs的EPSCs的影響 已知在NAc神經(jīng)元中，突觸前刺激CB1Rs可以減少谷氨酰胺能神經(jīng)傳遞。因此，為了觀察谷氨酰胺能傳遞是否參與了CB1Rs對藥物成癮和戒斷的影響，在全細(xì)胞記錄模式下，我們運(yùn)用電壓鉗技術(shù)，首先給包含NAc結(jié)構(gòu)的腦片灌流bicuculline，分離sEPSC。接著我們又加入河豚毒素（TTX），分離出mEPSC。而后，用電刺激包含NAc的腦片，檢測了eEPSC的變化情況。 Win55,212 2對MOR組的sEPSC的頻率和幅度、mEPSC的頻率和幅度以及eEPSC的幅度與SAL組相比，沒有統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05）。 第三部分:CB1Rs激動劑和抑制劑對于NAc中的MSNs的IPSCs的影響以及CPP留存情況 在全細(xì)胞記錄模式下，我們運(yùn)用電壓鉗技術(shù)，首先給包含NAc結(jié)構(gòu)的腦片灌流NMDA受體拮抗劑APV和非NMDA受體拮抗劑CNQX，分離自發(fā)抑制性突觸后電流（sIPSC），檢測GABA突觸的電生理活性。接著我們又加入TTX，分離出微小抑制性突觸后電流（mIPSC）。而后，用電刺激含NAc的腦片，檢測了刺激誘發(fā)的抑制性突觸后電流（eIPSC）的變化情況。以上所有的電流均可被GABA受體阻斷劑bicuculline阻斷。 與SAL組相比，Win55,212 2可以顯著地降低3天MOR組和3周MOR組的sIPSC的頻率、mIPSC的頻率和eIPSC的幅度（P 0.05），而這些效果可以被預(yù)先灌流的AM251阻斷（P 0.05），這意味著GABA能突觸對CB1Rs刺激反應(yīng)性的增加。但是，Win55,212 2對5周MOR組的sIPSC的頻率、mIPSC的頻率和eIPSC的幅度的抑制作用，與SAL組相比，沒有統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05）。 我們根據(jù)實驗分組中的時間指標(biāo)檢查了SD大鼠的CPP留存情況。結(jié)果顯示，3天MOR組和3周MOR組大鼠依舊保留了對造模時MOR配對空間的偏愛（P 0.05）。而5周MOR組的這種現(xiàn)象消失（P0.05）。 第四部分：CB1Rs激動劑對雙脈沖比（PPR）的影響以及NAc中MSNs的形態(tài)學(xué)研究 我們運(yùn)用PPR法確認(rèn)CB1Rs對NAc的GABA能傳遞的刺激作用是否為突觸前機(jī)制。在MOR組和SAL組的大鼠腦片上，將間隔刺激時間設(shè)為50ms，我們發(fā)現(xiàn)Win55,212 2對PPR的反應(yīng)顯著增強(qiáng)（eIPSC2eIPSC1）（P 0.05）。這個實驗結(jié)果說明了CB1Rs的作用是突觸前機(jī)制。 在本實驗中，我們在倒置顯微鏡下，以大鼠腦解剖圖譜為依據(jù)，在鼠腦的冠狀位上找到并確認(rèn)了NAc區(qū)域。我們通過前聯(lián)合定位NAc。并且，在NAc的背側(cè)和內(nèi)側(cè)可以發(fā)現(xiàn)大量的MSNs。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R749.61

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2369869