本文選題：骨髓間充質干細胞 + 神經(jīng)元樣細胞��； 參考：《山西醫(yī)科大學》2012年碩士論文

【摘要】：目的：觀察不同傳代倍數(shù)骨髓間充質干細胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)向神經(jīng)元樣細胞分化后移植對認知功能障礙大鼠學習記憶能力的影響,為中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病的干細胞移植治療提供理論和實驗依據(jù)。 方法：BMSCs取自健康3月齡雄性Wistar大鼠股骨,全骨髓貼壁法分離、培養(yǎng)、擴增、傳代Wistar大鼠BMSCs。取第3代BMSCs用流式細胞儀檢測CD29、CD4、CD34以鑒定純度。分別選取第3、4、5代BMSCs用含有20%胎牛血清的lmmol/L BME預誘導24h。去掉預誘導液后,加入20ng/mL bFGF進行誘導分化48h。取誘導后的第3代BMSCs采用免疫細胞化學法鑒定神經(jīng)細胞特異性抗原標記神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)和神經(jīng)膠質纖維酸性蛋白(GFAP)的表達。自然衰老Wistar大鼠通過Morris水迷宮篩選后隨機分為4組,每組10只。對照組大鼠雙側海馬注入生理鹽水,3、4、5代細胞組大鼠分別注入向神經(jīng)元樣細胞誘導后的3、4、5代BMSCs。大鼠的學習記憶能力在移植前和實驗后4周通過Morris水迷宮試驗測定。采用免疫組織化學染色法觀察比較移植后各組大鼠海馬膽堿乙�；�(ChAT)陽性細胞數(shù)。 結果：成功分離培養(yǎng)Wistar大鼠BMSCs,流式細胞儀檢測表面標記為：CD29(+)、D44(+)、CD34(-),符合BMSCs的表型特征。3、4、5代BMSCs經(jīng)誘導后大部分分化為神經(jīng)元樣細胞,誘導后的第3代BMSCs采用免疫細胞化學法鑒定神經(jīng)細胞特異性抗原標記NSE表達陽性,GFAP表達陰性。Morris水迷宮試驗結果：與移植前相比,對照組大鼠學習記憶成績下降,但差異無顯著性(P0.05)；3、4、5代細胞組大鼠學習記憶成績均有提高(P0.05)。與對照組相比,3、4、5代細胞組大鼠學習記憶成績均有提高(P0.05)。3、4、5代細胞組兩兩比較,差異均有顯著性(P0.05)。移植后各組大鼠海馬ChAT陽性結果：與對照組相比,3、4、5代細胞組大鼠海馬ChAT陽性細胞數(shù)均有所增加(P0.05)。3、4、5代細胞組兩兩比較,差異無顯著性(P0.05)。 結論：3、4、5代大鼠BMSCs向神經(jīng)元樣細胞分化后移植均可提高認知功能障礙大鼠的學習記憶能力,且4代細胞移植效果優(yōu)于3代和5代。
[Abstract]:Aim: to observe the effect of transplantation of bone marrow mesenchymal stem cell (marrow mesenchymal stem cells, BMSCs) into neuron-like cells on learning and memory ability in rats with cognitive impairment. To provide theoretical and experimental basis for stem cell transplantation treatment of central nervous system degenerative diseases. Methods BMSCs were isolated from the femur of healthy 3-month-old male Wistar rats. The whole bone marrow adherent method was used to isolate, culture, amplify and subculture BMSCs of Wistar rats. The third passage BMSCs was used to determine the purity of CD29, CD4 and CD34 by flow cytometry. The 4th and 5th generation of BMSCs were preinduced with lmmol/L BME containing 20% fetal bovine serum for 24 h. After removing the pre-induction solution, 20ng/mL bFGF was added to induce differentiation for 48 h. The expression of neuron-specific enolase (BMSCs) and glial fibrillary acidic protein (glial fibrillary acidic protein) were detected by immunocytochemistry. Natural aging Wistar rats were selected by Morris water maze and randomly divided into 4 groups with 10 rats in each group. In the control group, the rats in the control group were injected into the hippocampus of the control group and the rats in the control group were injected into the rat hippocampus of the 5th passage of normal saline. The rats in the control group were injected into the neuron-like cells induced by BMSCs for 5 passages. The learning and memory abilities of rats were measured by Morris water maze test before and 4 weeks after transplantation. The number of choline acetylase (Chat) positive cells in hippocampus of rats after transplantation was observed by immunohistochemical staining. Results: BMSCs of Wistar rats were isolated and cultured successfully. The surface markers of BMSCs were detected by flow cytometry. The results showed that the cells were differentiated into neuron-like cells after induction of BMSCs, which was in line with the phenotypic characteristics of BMSCs, and most of them were differentiated into neuron-like cells. Immunocytochemistry was used to identify the positive expression of NSE labeled with specific antigen of nerve cells. Morris water maze test showed that the learning and memory scores of the control group were lower than those before transplantation. However, there was no significant difference in the learning and memory performance of rats in the P0.05 / 4 ~ (5) passage group. Compared with the control group, the learning and memory scores of the rats in the control group were significantly higher than those in the control group. Compared with the control group, the number of ChAT positive cells in the hippocampus of the rats in the control group was significantly higher than that in the control group. There was no significant difference in the number of ChAT positive cells between the two groups. Conclusion BMSCs transplantation into neuron-like cells can improve the learning and memory ability of rats with cognitive impairment after differentiation into neuron-like cells. The effect of cell transplantation in 4th generation is better than that in 3rd and 5th generation.
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R749.16

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