本文選題：β位點裂解酶-　切入點：核心啟動子　出處：《重慶醫(yī)學(xué)》2017年03期

【摘要】：目的對人β位點裂解酶-1(BACE1)基因核心啟動子進行克隆,構(gòu)建攜帶BACE1基因啟動子的熒光素酶報告載體,篩選穩(wěn)定表達細胞株并分析其轉(zhuǎn)錄活性。方法提取人胚腎HEK293細胞基因組DNA,以其為模板,PCR擴增BACE1核心啟動子(-691~+67)并克隆至熒光素酶報告載體pGL4.21中,構(gòu)建BACE1基因啟動子熒光素酶報告載體pGL4.21-BACE1,將其轉(zhuǎn)染HEK293細胞(無啟動子的pGL4.21載體作陰性對照),利用嘌呤霉素篩選穩(wěn)定表達株后檢測其轉(zhuǎn)錄活性。結(jié)果成功擴增到758bp的BACE1核心啟動子,pGL4.21-BACE1載體經(jīng)雙酶切鑒定正確;HEK293細胞被該載體轉(zhuǎn)染后經(jīng)嘌呤霉素篩選得到6株穩(wěn)定表達BACE1啟動子的細胞株,其轉(zhuǎn)錄活性分別是對照組(HEK293/pGL4.21)的(134.7±22.3)、(634.0±13.9)、(437.6±6.1)、(805.5±5.5)、(492.8±59.1)、(1 021.1±46.6)倍(P=0.001)。結(jié)論成功構(gòu)建了人BACE1基因啟動子熒光素酶報告載體。
[Abstract]:Objective to clone the core promoter of human 尾 -locus lyase (尾 -locus) and construct a luciferase report vector carrying the promoter of BACE1 gene to screen the stable expressed cell line and analyze its transcriptional activity.Methods the genomic DNA of human embryonic kidney HEK293 cells was extracted, and the core promoter of BACE1 was amplified by PCR. It was cloned into luciferase report vector pGL4.21.BACE1 gene promoter luciferase report vector pGL4.21-BACE1 was constructed and transfected into HEK293 cells (pGL4.21 vector without promoter was used as negative control). The transcriptional activity of pGL4.21-BACE1 was detected by purine mycin screening.Conclusion the luciferase reporter vector of human BACE1 gene promoter was successfully constructed.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院神經(jīng)病學(xué)重點實驗室;重鋼總醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金國際合作重大項目(81220108010);國家自然科學(xué)基金(81171197) 重慶市衛(wèi)生局重點基金(2011-1-018)
【分類號】：R749.16

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 趙慧,鄭文嶺,崔東,馬文麗;泛素啟動子的研究進展[J];廣東醫(yī)學(xué);2003年12期

2 高剛;魯艷芹;韓金祥;趙麗;;雙啟動子對增強型綠色熒光蛋白表達的影響[J];中國生物制品學(xué)雜志;2009年10期

3 程元橋,林菊生,王文琦,廖家智,姜曉丹,馮瑋,熊平;誘導(dǎo)型一氧化氮合酶基因啟動子-969G→C多態(tài)性的功能[J];世界華人消化雜志;2004年09期

4 吳志香;邵敬偉;袁鳳山;;胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-1啟動子的克隆與序列分析[J];生物技術(shù)通訊;2005年06期

5 王秀亮;陳衛(wèi);梁光萍;陳建;蘇踴躍;楊程;羅向東;;人β1整合素啟動子核心啟動序列初步分析[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展;2009年01期

6 周天鴻,李月琴,朱嘉明,云泓若,肖小敏;真核細胞轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)啟動T7啟動子起始的研究[J];暨南大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)與醫(yī)學(xué)版);2000年03期

7 朱立紅;倪培華;應(yīng)雅韻;張潔;金磊;樊綺詩;;血脂與肝脂酶啟動子514C/T多態(tài)性的關(guān)系[J];診斷學(xué)理論與實踐;2005年06期

8 朱愛華,彭大新,劉秀梵,張如寬;雞痘病毒載體啟動子的優(yōu)化[J];病毒學(xué)報;2000年04期

9 丁清泉,戴順英;σ~(38)識別的啟動子-35區(qū)核酸序列特征研究[J];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報;1999年01期

10 黃小東,張俊武,陽學(xué)賢,王以弘,趙華路;人Aγ-珠蛋白基因-173T→C突變對啟動子功能的影響[J];中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報;1999年04期

相關(guān)會議論文 前10條

1 徐昌杰;胡桂兵;張上隆;;果實成熟特異啟動子研究進展[A];中國園藝學(xué)會第五屆青年學(xué)術(shù)討論會論文集[C];2002年

2 蕭鳳回;段承俐;薛剛平;;快速檢測干旱和脫水可誘導(dǎo)植物啟動子瞬間表達特性的方法[A];中國遺傳學(xué)會七屆一次青年研討會暨上海高校模式生物E——研究院第一屆模式生物學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2005年

3 龍海濤;李洪清;李玲;;藍豬兒捕獲啟動子系統(tǒng)建立[A];2006中國植物細胞發(fā)育與分子生物學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2006年

4 楊俊;劉繼紅;郭小林;王濤;王軍凱;陳美元;王少剛;葉章群;;人腎組織GGCX基因啟動子區(qū)克隆與活性分析[A];第十五屆全國泌尿外科學(xué)術(shù)會議論文集[C];2008年

5 馬小娟;侯林;陳曦;馬飛;;人類選擇性剪接基因與選擇性啟動子關(guān)聯(lián)的系統(tǒng)分析[A];“基因、進化與生理功能多樣性”海內(nèi)外學(xué)術(shù)研討會暨中國生理學(xué)會第七屆比較生理學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2009年

6 陳慧峰;林育純;林麗娜;方飛;陳雯;林忠寧;;蛋白磷酸酶2A不同亞基基因啟動子區(qū)遺傳變異性位點篩查[A];遺傳學(xué)進步與人口健康高峰論壇論文集[C];2007年

7 李靜;劉學(xué)群;王春臺;;一個煙草葡糖基轉(zhuǎn)移酶基因啟動子的克隆與誘導(dǎo)表達[A];湖北省植物生理學(xué)會第十五次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2007年

8 呂杰;趙瑩子;黃玉屏;沈萍;陳向東;;嗜鹽古生菌Haloarcula hispanica淀粉酶基因啟動子的研究及其跨域表達載體的構(gòu)建[A];基因開啟未來：新時代的遺傳學(xué)與科技進步——湖北省遺傳學(xué)會第八次代表大會暨學(xué)術(shù)討論會論文摘要匯編[C];2009年

9 夏定國;張婷婷;趙巧玲;張國政;裘智勇;;家蠶脂肪酶Ⅰ基因的啟動子分析[A];第十屆家（柞）蠶遺傳育種及良種繁育學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2013年

10 王小華;姜廣水;吳欽貞;姜萍萍;劉浩;江浩;;二價雙啟動子防齲DNA疫苗的構(gòu)建及鑒定[A];2007年第七次全國牙體牙髓病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

相關(guān)重要報紙文章 前3條

1 記者　錢錚;人類DNA上啟動子數(shù)量可能超過十九萬[N];人民日報;2006年

2 錢錚;人類DNA上啟動子數(shù)量可能超過19萬個[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2006年

3 ;兒童系統(tǒng)性紅斑狼瘡中白細胞介素－10啟動子區(qū)單核苷酸多態(tài)性對自身表達水平的影響[N];中國醫(yī)藥報;2003年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 馬洪鑫;ZHX2調(diào)控脂蛋白脂酶參與脂肪肝及肝細胞肝癌的作用及機制研究[D];山東大學(xué);2015年

2 宋劍平;基質(zhì)金屬蛋白酶-3基因啟動子區(qū)多態(tài)與散發(fā)性腦動靜脈畸形的遺傳易感性分析與功能研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

3 田媛;關(guān)于人腦膠質(zhì)瘤中miR-144/451啟動子區(qū)甲基化水平的實驗研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

4 王相玲;ICP4促進miR-101表達及miR-101調(diào)節(jié)HSV-1復(fù)制機制的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

5 呂東梅;蘋果HMGR基因家族啟動子的克隆及功能分析[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

6 束進;人IRF-5基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2016年

7 楊予濤;一個光合組織特異表達啟動子的克隆、功能分析及其轉(zhuǎn)錄因子的鑒定[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

8 楊曉敏;環(huán)加氧酶-2啟動子區(qū)抑制性結(jié)合蛋白的鑒定和功能分析[D];南京醫(yī)科大學(xué);2007年

9 柳小慶;玉米胚特異性高表達啟動子的基因組規(guī)模篩選、克隆和功能鑒定[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2014年

10 李哲;釀酒酵母和大腸桿菌的啟動子特性及其代謝工程應(yīng)用研究[D];北京理工大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 余霜;家蠶血細胞特異啟動子的篩選與鑒定[D];西南大學(xué);2015年

2 王璇;水曲柳節(jié)律基因LHY啟動子克隆及功能研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2015年

3 趙夏云;芥菜開花整合子SOC1的啟動子克隆及其與FLC、SVP蛋白相互作用[D];西南大學(xué);2015年

4 張鑫平;擬南芥和油菜花藥特異表達啟動子的克隆與功能分析[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

5 于璐;受體相互作用蛋白激酶3轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)特性研究[D];蘇州大學(xué);2015年

6 李玉姣;豬肝臟特異性TTR基因啟動子驅(qū)動扣囊復(fù)膜孢酵母菌BGL1基因在轉(zhuǎn)基因鼠中的表達驗證[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

7 郭凱慶;反向PCR精確定位人結(jié)腸癌SW480細胞CD133基因啟動子區(qū)脫氧核糖核酸酶Ⅰ高敏感位點[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

8 楊丹;大豆誘導(dǎo)型NAC轉(zhuǎn)錄因子基因啟動子克隆及功能研究[D];山東大學(xué);2015年

9 李杰;楊樹木質(zhì)部特異性啟動子的功能及JCesAP關(guān)鍵調(diào)控域研究[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

10 汪澤宇;c1orf109結(jié)合cyclin D1啟動子序列特征研究[D];哈爾濱工業(yè)大學(xué);2015年

，

本文編號：1691391