發(fā)布時(shí)間：2017-12-05 07:39

  本文關(guān)鍵詞：PKA-CREB抑制tau蛋白的表達(dá)

  更多相關(guān)文章： CRE CREB PKA tau蛋白 轉(zhuǎn)錄調(diào)控

【摘要】：目的阿爾茨海默病(AD),又稱老年性癡呆,是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病,該病常見于老年人。異常過度磷酸化的tau蛋白是阿爾茨海默病患者腦中神經(jīng)元纖維纏結(jié)(NFTs)的主要組成成分,并且患者癡呆程度與神經(jīng)元纖維纏結(jié)的數(shù)量呈明顯的正相關(guān),在神經(jīng)退行性疾病中tau蛋白的病理性聚集是其主要特征之一。cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CREB)是一種主要的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,在神經(jīng)元保護(hù)轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)中起到至關(guān)重要的作用。根據(jù)本課題組之前的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),與正常人的大腦相比,AD患者腦中總tau含量是上升的,CREB含量和活性是下降的,又因?yàn)镃REB是一種重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子并且在AD患者腦中PKA-CREB信號(hào)通路有所下調(diào),所以本課題主要旨在分子水平、細(xì)胞水平,動(dòng)物水平來探討CREB是否會(huì)影響tau蛋白的轉(zhuǎn)錄以及如何影響tau蛋白的轉(zhuǎn)錄。方法(1)用不同濃度的forskolin側(cè)腦室注射兩個(gè)月齡的ICR小鼠,腦勻漿Western blots和qPCR分析tau蛋白和tau mRNA的變化。(2)取兩月齡的ICR小鼠神經(jīng)元原代細(xì)施進(jìn)行照代培養(yǎng),罔不周濃度的forskolin處理,之后做Western blots 和 qPCR分析TAU蛋白和tau mRNA的變化；用PCI-neo/CREB轉(zhuǎn)染SH-SY5Y細(xì)胞,之后做Western blots和RT-PCR分析tau蛋白和tau mRNA的變化。(3)依據(jù)軟件分析,把Tau啟動(dòng)子區(qū)、點(diǎn)突變和缺失突變構(gòu)建到含luciferase報(bào)告基因載體pGL3-basic中,利用雙報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng),研究CREB對(duì)tau基因的表達(dá)調(diào)控作用：通過凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)(Electrophoretic mobility shift assay, EMS A)和染色缽免疫共沉淀(Chromatin immunoprecipitation, ChIP)實(shí)驗(yàn),分別住胞外和胞內(nèi)證實(shí)tau肩動(dòng)了區(qū)CRE與CREB之間的特異性結(jié)合。結(jié)果(1)forskolin側(cè)腦室注射后,tau的蛋白水平和mRNA水平均F降。(2)forskolin處理神經(jīng)元冗代細(xì)胞,tau的蛋白水平和mRNA水平均下降：用PCI-neo/CREB轉(zhuǎn)染SY5Y細(xì)胞,tau的蛋白水平和mRNA水平均下降。(3)MatInspector軟件分析發(fā)現(xiàn)Tau啟動(dòng)子區(qū)含三個(gè)cAMP反應(yīng)元件,分別命軹為CRE-1、CRE-2和CRE-3, CREB過表達(dá)可明顯地抑制tau啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的螢光素酶的表達(dá)：凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)和染色體免疫共沉淀證明CREB可以特異性地結(jié)合于Tau啟動(dòng)子區(qū)的CRE1和CRE3元件;tau啟動(dòng)子區(qū)的各敲擊除突變體和點(diǎn)突變表明在CREB抑制tau蛋白基因的轉(zhuǎn)錄中CRE1起到主要作用。結(jié)論(1)CREB主要結(jié)合在tau promotor區(qū)的CRE1和CRE3元件,而不是CRE2元件。(2)在CREB抑制tau蛋白基因的轉(zhuǎn)錄中CRE1起到主要作用。(3) CREB可通過PKA信號(hào)通路被活化進(jìn)而從轉(zhuǎn)錄水平來抑制Tau蛋白的表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：南通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R749.16

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 趙永玲;楊敬華;劉秋芳;靳翠紅;巫生文;劉慧穎;蔡原;;出生前后鑭染毒對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶與海馬PKA-CREB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響[J];環(huán)境與健康雜志;2013年11期

2 ;[J];;年期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 黃國付;張紅星;張?zhí)品?劉悅平;;PKA-CREB信號(hào)在電針結(jié)合rTMS激活腦缺血后內(nèi)源性神經(jīng)再生中的作用及機(jī)制[A];中國針灸學(xué)會(huì)2009學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（上集）[C];2009年

2 黃國付;黃曉琳;;電針結(jié)合重復(fù)經(jīng)顱磁刺激對(duì)局灶性腦缺血大鼠PKA-CREB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響[A];2011中國針灸學(xué)會(huì)年會(huì)論文集（摘要）[C];2011年

3 黃國付;黃曉琳;;電針結(jié)合重復(fù)經(jīng)顱磁刺激對(duì)局灶性腦缺血大鼠PKA-CREB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響[A];中國針灸學(xué)會(huì)臨床分會(huì)全國第十九屆針灸臨床學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2011年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 何袁芳;針刺對(duì)糖尿病大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)PKA-CREB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響[D];中國中醫(yī)科學(xué)院;2010年

2 趙繼敏;PKA-CREB和p38MAPK-ATF2通路調(diào)控DNA polβ表達(dá)在食管癌中的作用[D];鄭州大學(xué);2009年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 劉煥良;PKA-CREB抑制tau蛋白的表達(dá)[D];南通大學(xué);2016年

2 楊麗萍;α硫辛酸對(duì)阿爾茨海默病模型大鼠海馬區(qū)PKA-CREB信號(hào)通路的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

3 陶哠嫣;PKA-CREB信號(hào)通路在異丙酚損害大鼠大腦發(fā)育中的作用[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2013年

4 于爽;運(yùn)動(dòng)性疲勞所致學(xué)習(xí)記憶能力改變的證候特點(diǎn)及基于PKA-CREB信號(hào)通路的機(jī)制研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2010年

，

本文編號(hào)：1254046