本文關鍵詞：aFGF和TAT-aFGF對ADDLs損傷的大鼠原代皮質(zhì)神經(jīng)元突起的保護作用研究

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【摘要】：目的:利用β淀粉樣蛋白(amyloid beta,Aβ)寡聚體(Aβ-derived diffusible ligands,ADDLs)處理培養(yǎng)6天(DIV6)的SD乳鼠皮質(zhì)神經(jīng)元,建立阿爾茨海默病(Alzheimer disease,AD)體外模型,觀察酸性成纖維細胞生長因子(a FGF)及其改構(gòu)體(TAT-a FGF)對皮質(zhì)神經(jīng)元突起的保護作用,并探索其相關神經(jīng)保護作用的機制。方法:(1)制備和鑒定ADDLs。用不同濃度的ADDLs(125、250、500、1000 n M)處理DIV6原代新生大鼠皮質(zhì)神經(jīng)細胞,MTT檢測細胞活力,免疫熒光檢測各組MAP2陽性神經(jīng)元的形態(tài),確定最佳造模劑量,建立AD體外細胞模型。(2)不同濃度的a FGF預保護原代皮質(zhì)神經(jīng)元2 hrs,用最佳造模濃度250 n M的ADDLs與相應濃度a FGF或TAT-a FGF共同處理細胞24 hrs,MTT法檢測細胞活力,免疫熒光檢測各組MAP2陽性神經(jīng)元的形態(tài),確定a FGF和TAT-a FGF最佳作用濃度。(3)選用最佳作用濃度的aFGF或TAT-aFGF作用ADDLs損傷的原代神經(jīng)元,免疫印記檢測CREB磷酸化水平、PI3K/AKT及MEK/ERK信號通路以及突觸相關蛋白(MAP2、PSD95)的表達情況,同時采用PI3K抑制劑LY294002或ERK1/2抑制劑PD98059分組進行干預實驗,檢測各組細胞存活率、信號通路分子以及突觸相關蛋白的改變情況。結(jié)果:MTT與免疫熒光實驗證明ADDLs最佳造模濃度為250 n M,細胞活力為66.3%;建立了ADDLs誘導皮質(zhì)神經(jīng)損傷模型,篩選并確定a FGF和TAT-a FGF最佳作用濃度均為1000 ng/m L,在該濃度下a FGF或TAT-a FGF均能很好地拮抗ADDLs對皮質(zhì)神經(jīng)元造成的損傷,發(fā)揮神經(jīng)保護效應;通路蛋白和突觸相關蛋白檢測發(fā)現(xiàn):(1)在PI3K/AKT通路中,a FGF或TAT-a FGF作用24hrs后PI3K、AKT、GSK3β的磷酸化水平以及MAP2與PSD95的表達水平顯著上調(diào),加入PI3K抑制劑LY294002后其上調(diào)作用得到明顯抑制,同時細胞存活率也分別降至62.0%和61.8%。(2)在MEK/ERK通路中,a FGF或TAT-a FGF作用24hrs后ERK、CREB的磷酸化水平及MAP2和PSD95的蛋白表達水平也顯著上調(diào)。加入ERK1/2抑制劑PD98059后,其上調(diào)作用得到明顯抑制,同時細胞活率分別降至61.4%和62.8%。結(jié)論:a FGF和TAT-a FGF通過PI3K/AKT/GSK3β和ERK上調(diào)CREB磷酸化水平,促進突觸相關蛋白MAP2與PSD95表達,拮抗ADDLs誘導皮質(zhì)神經(jīng)元突起損傷,發(fā)揮其神經(jīng)保護效應。
【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R749.16

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中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 何向;aFGF和TAT-aFGF對ADDLs損傷的大鼠原代皮質(zhì)神經(jīng)元突起的保護作用研究[D];暨南大學;2016年

2 林健聰;Tat-aFGF融合蛋白在大腸桿菌中的高效表達、純化及對海馬神經(jīng)元的保護作用[D];暨南大學;2010年

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本文編號：1194693