本文關鍵詞：在APPSwInd小鼠中基于iTRAQ技術的蛋白質組學分析研究阿爾茨海默癥的早期改變

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【摘要】：背景 阿爾茨海默癥(Alzheimer's Disease)是一種神經(jīng)退行性疾病,多發(fā)于70歲以上人群中,發(fā)病率隨著年齡增加而上升。在目前社會逐步老齡化的當下,已經(jīng)成為65歲以上人群中第四大死亡原因,是一個日趨嚴重的公共衛(wèi)生問題�；颊邥霈F(xiàn)抑郁、淡漠、煩躁、焦慮、攻擊等精神癥狀,以及更為普遍的記憶損傷、認知障礙、執(zhí)行能力損害,逐漸發(fā)展到生活不能自理,最終昏迷,死于感染等并發(fā)癥。AD病因包括家族遺傳,頭部外傷,軀體疾病,社會心理因素等,然而發(fā)病機制尚不明確,并且缺乏早期診斷標準和早期干預手段,在中晚期階段確診后再進行藥物干預治療等措施難以逆轉病情。所以尋找AD早期診斷標志物是一個亟待解決的事情。目的 在質譜結果中探究早期AD小鼠模型中出現(xiàn)的生物分子方面變化,篩選出能夠在兩種AD模型小鼠腦部均有顯著改變,并能夠影響體外培養(yǎng)神經(jīng)細胞中淀粉樣蛋白前體蛋白(APP)表達的潛在AD早期生物標志物以及治療靶點。方法使用同位素標記相對和絕對定量技術(iTRAQ)對早期AD模型小鼠J20海馬部位與野生型小鼠海馬區(qū)進行質譜檢測,得到表達量有顯著差異的蛋白。用實時熒光定量PCR (RT-PCR)檢測在J20及雙轉基因小鼠APP/PSEN1海馬中待篩選蛋白mRNA表達量。用Western Blot檢測APP/PSEN1小鼠的不同腦區(qū)待篩選蛋白表達量與野生型小鼠中的差異。通過構建蛋白shRNA質粒進行細胞轉染后敲減目的蛋白,用RT-PCR和Westren Blot驗證敲減效應,并用Western Blot和細胞免疫熒光染色(ICC)進行細胞APP表達情況分析。結果用iTRAQ技術我們發(fā)現(xiàn)了700余種蛋白質在J20小鼠海馬區(qū)有改變,其中有顯著改變的有400余種,根據(jù)蛋白功能不同,將蛋白分成32類。我們發(fā)現(xiàn)胞外區(qū)域蛋白質以及代謝過程有關蛋白質大部分表現(xiàn)為增加,而突觸有關蛋白全部為表現(xiàn)為降低。將mRNA的結果與質譜結果結合進一步分析發(fā)現(xiàn),在蛋白表達和mRNA表達水平上,兩種轉基因小鼠是有區(qū)別的。在APP/PSEN1小鼠不同腦區(qū)進行western檢測中發(fā)現(xiàn)Rac1蛋白在小腦區(qū)顯著增加,β-spectrin在海馬和皮層區(qū)域顯著降低。體外細胞培養(yǎng)實驗中發(fā)現(xiàn)β-spectrin蛋白的敲減對APP表達產(chǎn)生明顯影響。 結論綜合上述結果,我們得到了一批潛在的AD生物標記物,并且發(fā)現(xiàn)了β-spectrin在AD早期對APP的轉運有一定影響。
【關鍵詞】：阿爾茨海默癥 生物標志物 淀粉樣前體蛋白 β-spectrin
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R749.16
【目錄】：

• 致謝4-5
• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 縮略語9-11
• 1. 引言11-15
• 1.1 阿爾茨海默癥(Alzheimer's Disease)11-12
• 1.2 蛋白質組學與iTRAQ12-13
• 1.3 AD模型小鼠13-15
• 2. 材料和方法15-38
• 2.1 主要儀器設備和試劑15-16
• 2.2 實驗所用抗體16-17
• 2.3 實驗試劑及配制17-21
• 2.4 實驗方法21-38
• 3. 實驗結果38-52
• 3.1 J20小鼠海馬區(qū)與野生型小鼠海馬區(qū)蛋白表達量的改變38-41
• 3.2 驗證在改變蛋白兩類AD模型小鼠海馬中蛋白mRNA的表達水平41-44
• 3.3 APP/PSEN1小鼠不同腦區(qū)中蛋白表達量與野生型小鼠的比較44-45
• 3.4 β-spectrin在J20小鼠海馬中蛋白水平改變的確認45-46
• 3.5 蛋白敲減對N2A/APP細胞APP表達情況的影響46-52
• 4. 結論52-53
• 5. 討論53-56
• 參考文獻56-60
• 綜述60-70
• 參考文獻68-70
• 作者簡歷及在讀期間所取得的科研成果70

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 ;Effect of amyloid peptides on serum withdrawal-induced cell differentiation and cell viability[J];Cell Research;2004年06期

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本文編號：1046317