發(fā)布時間：2017-09-29 23:34

  本文關鍵詞：REG3A誘導SHP-1調節(jié)非感染傷口TLR3-依賴型炎癥發(fā)生的功能機制

  更多相關文章： 胰再生源蛋白3A EXTL3 SHP-1 炎癥

【摘要】：傷口愈合是機體維持穩(wěn)態(tài)的一個不可或缺的生理過程,其中炎癥期對于傷口愈合過程至關重要。適度的炎癥反應有助于清除細菌和細胞碎片,促進組織修復,而過度的炎癥反應會導致傷口的難以愈合、組織壞死甚至多器官衰竭。長久以來科學家們研究的熱點集中在微生物感染導致的炎癥反應,而忽略了非微生物感染引發(fā)的過度炎癥帶來的危害。因此,對非感染傷口炎癥機制的探究迫在眉睫。REG3A是一種多功能蛋白,雖然能夠抑制胰腺炎、腸炎和角膜炎等炎癥反應的發(fā)生,但對皮膚炎癥的調節(jié)作用尚未有報道,其機制的研究更是空白。本課題首次發(fā)現(xiàn)除了已知的MyD88信號通路外,非依賴于接頭分子MyD88的TLR3信號通路也能介導REG3A的表達,較于野生型小鼠傷口,TLR3基因敲除小鼠非感染傷口皮膚中RegⅢγ表達明顯降低,并且在原代角質形成細胞中沉默TLR3受體后,poly(I:C)誘導的REG3A也明顯變少。此外,小鼠背部皮間注射重組蛋白RegⅢγ后能夠抑制非感染傷口TLR3依賴性炎癥因子的產生,重組蛋白REG3A在原代角質形成細胞中也能夠抑制poly(I:C)誘導的炎癥因子的表達,表明REG3A對非感染傷口炎癥的負調節(jié)功能。揭示了機體中存在的一種“穩(wěn)態(tài)”機制,即TLR3的激活促進炎癥反應的同時還會誘導抗炎蛋白REG3A的表達,防止過度炎癥的發(fā)生。隨后,我們詳盡的探究了REG3A的抗炎機制。首先我們純化得到不同結構域的REG3A蛋白與poly(I:C)共刺激角質形成細胞,發(fā)現(xiàn)REG3A的CTLD (C類凝集素結構域)是其發(fā)揮抗炎功能的主要片段。在角質形成細胞中通過抑制劑篩選發(fā)現(xiàn)TLR3主要通過激活JNK信號通路誘導炎癥因子的產生,而REG3A正是通過抑制TLR3介導的JNK2的磷酸化從而發(fā)揮抗炎功能,小鼠在體實驗也證明了這一點。為了進一步證明REG3A是如何發(fā)揮去磷酸化功能的,我們對REG3A刺激角質形成細胞樣品進行檢測,發(fā)現(xiàn)REG3A并不能誘導TLR下游負調節(jié)子A20、SARM或TRAF1的表達,卻能夠誘導負調節(jié)子SHP-1轉錄水平和蛋白水平的表達,并且小鼠背部皮間注射RegⅢγ也發(fā)現(xiàn)能夠時間依賴性誘導SHP-1的表達。而REG3A主要是通過結合其受體EXTL3 (1-141aa)激活AKT-STAT3信號通路,從而誘導角質形成細胞中負調節(jié)子SHP-1的表達。將SHP-1基因沉默后,REG3A將不能夠使JNK2去磷酸化及抑制TLR3介導的炎癥反應,表明REG3A是通過誘導SHP-1的表達使TLR3介導的JNK2去磷酸化從而抑制炎癥反應的產生。綜上所述,我們的研究首次發(fā)現(xiàn)了TLR3信號通路的激活能夠介導REG3A的表達,并且REG3A能夠通過誘導負調節(jié)子SHP-1使JNK2去磷酸化從而抑制非感染傷口TLR3-依賴型炎癥的過表達,詳盡的證明了其中的調控機制,為防止非感染傷口的發(fā)炎提供了一種非抗生素治療的新方法。
【關鍵詞】：胰再生源蛋白3A EXTL3 SHP-1 炎癥
【學位授予單位】：華東師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R641
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-12
• 第一章 綜述12-28
• 1. 皮膚傷口愈合過程12-15
• 1.1 皮膚的組成結構12-13
• 1.2 傷口愈合過程13-15
• 2. TLR與傷口炎癥反應15-20
• 2.1 Toll樣受體(TLR)15-17
• 2.2 角質形成細胞中TLR介導的炎癥反應17-20
• 3. 胰再生源蛋白3A(REG3A)20-26
• 3.1 Reg蛋白與受體20-21
• 3.2 Reg蛋白的功能21-24
• 3.3 Reg蛋白的表達調節(jié)24-26
• 4. 負調節(jié)子SHP-1在炎癥反應中的調節(jié)作用26-28
• 第二章 REG3A誘導SHP-1調節(jié)TLR3依賴性炎癥的發(fā)生的功能機制28-83
• 一、引言28-29
• 二、實驗材料29-35
• 三、實驗方法35-50
• 四、結果與分析50-80
• 1. Tlr3介導皮膚傷口處RegⅢγ表達50-51
• 2. TLR3介導皮膚角質形成細胞中REG3A表達51-52
• 3. RegⅢγ抑制小鼠皮膚傷口Tlr3介導的炎癥因子表達52-53
• 4. RegⅢγ抑制小鼠皮膚傷口炎性細胞的浸潤53-54
• 5. REG3A在角質形成細胞中抑制poly(I：C)誘導的炎癥應答54-55
• 6. REG3A通過CTLD抑制poly(I：C)誘導的炎癥因子的表達55-56
• 7. REG3A通過其CTLD抑制poly(I：C)誘導的趨化因子的表達56-57
• 8. poly(I：C)在角質形成細胞中通過激活JNK2誘導炎癥應答57-59
• 9. TLR3通過JNK2信號通路介導皮膚傷口處炎癥因子表達59-60
• 10. REG3A通過阻斷JNK pathway抑制poly(I：C)誘導的炎癥因子表達60-63
• 11. REG3A在角質形成細胞中不誘導TRAF1、SARM及A20的表達63-64
• 12. REG3A在角質形成細胞中誘導負調節(jié)子SHP-1的表達64-65
• 13. C-REG3A在角質形成細胞中誘導負調節(jié)子SHP-1的表達65-66
• 14. RegⅢγ體內誘導負調節(jié)子SHP-1蛋白水平表達66-67
• 15. 體外超表達SHP-1能抑制poly(I：C)誘導的炎癥應答67-68
• 16. REG3A抑制poly(I：C)誘導的炎癥應答依賴于SHP-168-69
• 17. REG3A與受體EXTL3氮端(1-141aa)相互作用69-70
• 18. REG3A通過CTLD與受體EXTL3氮端(1-141aa)相互作用70-71
• 19. REG3A通過EXTL3誘導SHP-1抑制poly(I：C)誘導的炎癥應答71-72
• 20. REG3A通過STAT3及AKT信號通路誘導SHP-1表達72-74
• 21. REG3A通過AKT-STAT3信號通路誘導SHP-1表達74
• 22. SHP-1功能缺陷突變質粒的構建74-75
• 23. REG3A通過誘導SHP-1抑制poly(I：C)誘導的JNK2的磷酸化75-77
• 24. REG3A誘導SHP-1能與JNK2相互作用77-78
• 25. JNK2不依賴于其磷酸化位點與SHP-1相互結合78-80
• 五、討論80-83
• 第三章 總結83-86
• 參考文獻86-90
• 附錄90-91
• 碩士期間發(fā)表研究論文91-92
• 致謝92-93

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本文編號：944913