本文關(guān)鍵詞：NSCs植入大鼠缺損皮膚后對創(chuàng)面及神經(jīng)修復(fù)的影響

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【摘要】：第一部分SD大鼠BMSCs誘導(dǎo)為NSCs的培養(yǎng)、鑒定 目的：體外培養(yǎng)、純化、鑒定大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrowesenchymal stem cells,BMSCs）；酸性成纖維細(xì)胞生長因子（acidicibroblast growth factor,aFGF）誘導(dǎo)大鼠BMSCs分化為神經(jīng)干細(xì)胞neural stem cells,NSCs），觀察其生物學(xué)特性并鑒定。 方法：采用全骨髓貼壁培養(yǎng)法培養(yǎng)出大鼠BMSCs，根據(jù)骨髓中各細(xì)胞的貼壁時間選取出原代BMSCs，通過細(xì)胞換液及傳代培養(yǎng)來純BMSCs。在高倍顯微鏡下查看貼壁細(xì)胞的形狀及其增生方式；通過MSCs標(biāo)志物對其進(jìn)行鑒定。用80ng/ml aFGF誘導(dǎo)BMSCs分化為SCs，在高倍顯微鏡下觀察細(xì)胞誘變過程中的形狀改變。在aFGF進(jìn)誘導(dǎo)6小時后檢測NSCs的特異性標(biāo)記物NSE的表達(dá)。 結(jié)果：全骨髓貼壁培養(yǎng)法培殖后的細(xì)胞呈貼壁、長梭形、多角形。0ng/ml aFGF誘導(dǎo)BMSCs分化6h后，部分細(xì)胞的胞體收縮為不規(guī)則并伴有局部胞體凸出；可檢測到NSCs特異性標(biāo)志物NSE。 結(jié)論：采用全骨髓貼壁培養(yǎng)法培養(yǎng)出的BMSCs在80ng/ml濃度下的aFGF進(jìn)行體外誘導(dǎo)，從BMSCs形態(tài)學(xué)改變及特異性標(biāo)記物檢測對 誘導(dǎo)后的細(xì)胞進(jìn)行鑒定，發(fā)現(xiàn)BMSCs可被aFGF誘導(dǎo)分化為NSCs。 第二部分NSCs植入大鼠缺損皮膚對創(chuàng)面神經(jīng)修復(fù)的影響 目的：探討aFGF體外誘導(dǎo)大鼠BMSCs分化為NSCs后，植入缺損皮膚對創(chuàng)面神經(jīng)修復(fù)的作用及方式。 方法：體外獲得SD大鼠BMSCs在適宜的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)。用aFGF誘導(dǎo)其向NSCs分化，熒光劑DAPI標(biāo)記。將81只SD大鼠背部作皮膚全層缺損創(chuàng)面，，隨機(jī)分為局部創(chuàng)面注射NSCs（A）組、尾靜脈注射NSCs (B)組、NSCs+血漿支架(局部外敷料，C）組、局部創(chuàng)面注射BMSCs（D）組、尾靜脈注射BMSCs (E)組、BMSCs+血漿支架(局部外敷料組，F(xiàn))組、血漿支架(局部外敷料G)組、局部創(chuàng)面注射等量生理鹽水（H）組、尾靜脈注射等量生理鹽水（I）組，每組9只。創(chuàng)面模型在干細(xì)胞移植處理后的第4、5、7周搜集標(biāo)本，并進(jìn)行免疫熒光檢測，RT-PCR檢測皮膚神經(jīng)組織特異性標(biāo)記物PGP9.5的表達(dá)。 結(jié)果：PGP9.5在創(chuàng)面愈合后第4、5、7周的熒光密度分布，在時間上采用重復(fù)資料分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=427.03，P=0.000），干細(xì)胞移植對神經(jīng)修復(fù)特異性表達(dá)有差異；在分組上采用重復(fù)資料分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=130.44，P=0.000），干細(xì)胞移植在時間及分組上的相互作用結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=3.543，P=0.001）。A組神經(jīng)修復(fù)作用較B組明顯（P=0.001），B組神經(jīng)修復(fù)較C組明顯（P=0.000）；A組神經(jīng)修復(fù)作用較D組明顯（P=0.000），D組神經(jīng)修復(fù)作用較H組明顯（P=0.000）；G組與H組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.014），H組與I組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.446）。RT-PCR檢測PGP9.5基因表達(dá)的測定更進(jìn)一步說明了以上結(jié)果。 結(jié)論：aFGF誘導(dǎo)BMSCs分化為NSCs后，通過不同移植方式將干細(xì)胞植入皮膚缺損，可促進(jìn)皮膚創(chuàng)面神經(jīng)修復(fù)；在同一種移植方式下其修復(fù)作用比BMSCs顯著；同種細(xì)胞的不同移植方式時，以局部注射神經(jīng)修復(fù)作用最為顯著。 第三部分NSCs促進(jìn)大鼠背部創(chuàng)面愈合的實(shí)驗(yàn)研究 目的：探討NSCs植入全層皮膚缺損后對創(chuàng)面修復(fù)的影響。 方法：體外獲得SD大鼠BMSCs，在適宜的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)，用aFGF誘導(dǎo)其向NSCs分化，熒光劑DAPI標(biāo)記。將27只SD大鼠背部制作皮膚缺損創(chuàng)面。隨機(jī)分局部創(chuàng)面注射NSCs (A)組、局部創(chuàng)面注射BMSCs (B)組、局部創(chuàng)面注射等量生理鹽水（C）組，每組9只。記錄創(chuàng)面愈合時間；術(shù)后3、7、14天觀察創(chuàng)面的愈合率，組織切片HE染色和VG染色觀察皮膚創(chuàng)面炎癥反應(yīng)及組織膠原纖維的修復(fù)情況。 結(jié)果：干細(xì)胞移植SD大鼠體內(nèi)后，A組創(chuàng)口閉合較快，未見出血、積膿、壞死，組織學(xué)高倍顯微鏡下觀察，局部炎癥反應(yīng)輕微，創(chuàng)口閉合時間較B、C組時間短(p=0.000)；A組愈合率明顯高于B組，B組高于C組(p=0.000)。 結(jié)論NSCs作為種子細(xì)胞，進(jìn)行局部多點(diǎn)注射式移植皮膚創(chuàng)面后，可促進(jìn)創(chuàng)面愈合，縮短創(chuàng)面時間，對皮膚缺損創(chuàng)面有修復(fù)作用。
【關(guān)鍵詞】：全骨髓貼壁培養(yǎng)法 BMSCs aFGF NSCs 誘導(dǎo)分化 aFGF BMSCs NSCs 細(xì)胞治療 神經(jīng)再生 NSCs 皮膚創(chuàng)面修復(fù) 細(xì)胞治療 aFGF
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R641
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-7
• 摘要7-11
• ABSTRACT11-17
• 前言17-23
• 參考文獻(xiàn)19-23
• 第一部分 SD 大鼠 BMSCs 誘導(dǎo)為 NSCs 的培養(yǎng)、鑒定23-28
• 1 材料和方法23-26
• 2 結(jié)果26-27
• 參考文獻(xiàn)27-28
• 第二部分 NSCs 植入大鼠缺損皮膚對創(chuàng)面神經(jīng)修復(fù)的影響28-42
• 1 材料和方法28-34
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料28-29
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法29-33
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析33-34
• 2 結(jié)果34-38
• 3 討論38-40
• 參考文獻(xiàn)40-42
• 第三部分 NSCs 促進(jìn)大鼠背部創(chuàng)面愈合的實(shí)驗(yàn)研究42-50
• 1 材料和方法42-44
• 2 結(jié)果44-47
• 3 討論47-49
• 參考文獻(xiàn)49-50
• 全文總結(jié)50-51
• 文獻(xiàn)綜述51-61
• 參考文獻(xiàn)56-61
• 致謝61-62
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文62-63

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：736808