本文關(guān)鍵詞：人臍帶間質(zhì)干細胞來源exosomes介導miR-92b參與修復大鼠急性心肌梗死損傷機制

  更多相關(guān)文章： 人臍帶間質(zhì)干細胞 exosomes 急性心肌梗死 損傷 修復 miR-92b Smad7

【摘要】：目的體內(nèi)外分別構(gòu)建穩(wěn)定高效的exosomes修復SD大鼠AMI模型及exosomes修復原代培養(yǎng)的心肌細胞缺血缺氧損傷模型,明確exosomes對AMI的治療作用,找出exosomes修復AMI過程中起關(guān)鍵作用的miRNAs,探討其修復機制,為exosomes用于臨床心肌梗死病人的治療提供實驗依據(jù)。方法通過蔗糖重水層密度梯度離心法與分子篩超濾法相結(jié)合的方法分離濃縮hucMSC-exosomes,用納米顆粒分析儀進行鑒定;采用結(jié)扎左冠狀動脈前降支構(gòu)建體內(nèi)SD大鼠AMI模型,經(jīng)超聲心動圖和western blot驗證;在分離獲得hucMSC-exosomes以及成功構(gòu)建體內(nèi)外缺氧模型的基礎(chǔ)上,通過給予hucMSC-exosomes治療,分別采用超聲心動圖及western blot檢測hucMSC-exosomes體內(nèi)外對心肌的影響;通過熒光定量PCR確定相關(guān)microRNA在exosomes中含量,通過生物信息學分析進行靶基因預測,轉(zhuǎn)染miR-92b mimics及inhibitor,驗證Smad7在mRNA及蛋白水平變化,探討hucMSC-exosomes對AMI損傷修復過程中microRNA可能的分子機制。結(jié)果成功分離了hucMSC-exosomes及構(gòu)建體內(nèi)外exosomes修復心肌細胞缺氧損傷模型。熒光定量PCR檢測出exosomes中miR-92b含量較高;exosomes修復的心肌梗死大鼠中,血清mi R-92b上調(diào);同時,心肌組織中的miR-92b也上調(diào)。Exosomes治療及轉(zhuǎn)染miR-92b mimics后心肌細胞Smad7上調(diào)。結(jié)論在exosomes修復心肌梗死過程中,exosomes中富含的miR-92b可能是通過調(diào)節(jié)Smad7進而促進心功能恢復。
【關(guān)鍵詞】：人臍帶間質(zhì)干細胞 exosomes 急性心肌梗死 損傷 修復 miR-92b Smad7
【學位授予單位】：江蘇大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R542.22
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-14
• 第一章 緒論14-24
• 1.1 間質(zhì)干細胞與缺血性心臟病14-15
• 1.1.1 間質(zhì)干細胞來源及生物學特征14
• 1.1.2 間質(zhì)干細胞與缺血性心臟病14-15
• 1.2 exosomes與心血管疾病15-16
• 1.2.1 exosomes的來源及生物學特性15
• 1.2.3 exosomes與心血管疾病15-16
• 1.3 microRNA與心肌梗死16-22
• 1.3.1 microRNA生物合成及作用方式16
• 1.3.2 microRNA與心肌梗死16-22
• 1.4 小結(jié)22-24
• 第二章 研究目的、方法、實驗設(shè)計方案和意義24-26
• 2.1 研究目的24
• 2.2 研究方法24-25
• 2.3 實驗設(shè)計方案25
• 2.4 研究意義25-26
• 第三章 exosomes修復急性心肌梗死過程中相關(guān)microRNA表達量測定26-48
• 3.1 材料與儀器26-28
• 3.1.1 主要材料26-27
• 3.1.2 主要儀器27-28
• 3.2 方法28-35
• 3.2.1 hucMSC的分離培養(yǎng)、hucMSC-CM的制備及hucMSC-exosomes的分離純化鑒定保存28-29
• 3.2.2 乳鼠原代心肌組織來源細胞培養(yǎng)29
• 3.2.3 細胞凍存、復蘇、培養(yǎng)、傳代與計數(shù)29-30
• 3.2.4 構(gòu)建SD大鼠急性心肌梗死模型30-31
• 3.2.5 小動物高頻彩色超聲儀檢測術(shù)后大鼠心功能31
• 3.2.6 大鼠原代心肌細胞缺氧模型的建立31-32
• 3.2.7 Western blot32
• 3.2.8 組織與血清標本的處理及保存32-33
• 3.2.9 細胞及組織中總RNA的提取33
• 3.2.10 血清及exosomes中總RNA提取33-34
• 3.2.11 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)及熒光定量RT-PCR34-35
• 3.2.12 實驗數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計35
• 3.3 結(jié)果35-42
• 3.3.1 hucMSC的形態(tài)特征35-36
• 3.3.2 hucMSC-exosomes大小及濃度檢測36-38
• 3.3.3 乳鼠原代心肌組織細胞的形態(tài)特征38
• 3.3.4 實驗動物分組38-39
• 3.3.5 給予hucMSC-exosomes治療后大鼠心臟功能改善39
• 3.3.6 exosomes減少缺氧誘導的原代心肌細胞凋亡相關(guān)蛋白表達39-40
• 3.3.7 exosomes中microRNAs表達變化40-41
• 3.3.8 心肌梗死大鼠血清中microRNA變化41
• 3.3.9 心肌梗死大鼠心臟組織中microRNA變化41-42
• 3.4 討論42-48
• 第四章 miR-92b影響損傷心肌細胞修復的機制探討48-62
• 4.1 材料與儀器48-49
• 4.1.1 主要材料48
• 4.1.2 主要儀器48-49
• 4.2 方法49-51
• 4.2.1 生物信息學分析49
• 4.2.2 miRNA-mimics/Inhibitor轉(zhuǎn)染49
• 4.2.3 提取蛋白49-50
• 4.2.4 蛋白定量（BCA Protein Assay Kit，，PIERCE, Inc.）50
• 4.2.5 引物設(shè)計50-51
• 4.2.6 定量PCR檢測Smad7的mRNA變化51
• 4.2.7 Western blot檢測Smad7變化51
• 4.2.8 統(tǒng)計學處理51
• 4.3 結(jié)果51-59
• 4.3.1 microRNA-92b的生物信息學特征51-52
• 4.3.2 microRNA-92b靶基因預測及驗證52-56
• 4.3.3 exosomes處理心肌細胞H9C2(2-1) Smad7的mRNA變化56-57
• 4.3.4 miRNA-mimics/Inhibitor轉(zhuǎn)染濃度摸索57-58
• 4.3.5 Western blot檢測miR-92b靶基因Smad7變化58-59
• 4.4 討論59-62
• 結(jié)論與展望62-63
• 參考文獻63-73
• 致謝73-74
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術(shù)論文及參加會議74

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本文編號：674082