本文關(guān)鍵詞：組蛋白去乙酰化酶抑制劑對(duì)燙傷大鼠小腸腸屏障損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究

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【摘要】：目的：以往研究表明，嚴(yán)重?zé)齻蠼M織缺氧能激活缺氧誘導(dǎo)因子1（HIF-1）信號(hào)通路，損害腸上皮屏障功能，組蛋白去乙�；敢种苿℉DACIs）能保護(hù)腸缺血引起的胃腸道屏障及遠(yuǎn)隔器官損害，但其具體的機(jī)制還不十分清楚，本研究假設(shè)HDACIs通過(guò)增加HIF-1乙酰化水平、抑制HIF-1功能，保護(hù)燙傷應(yīng)激時(shí)腸上皮細(xì)胞的屏障功能。研究?jī)?nèi)容包括：1.采用大鼠50%TBSAⅢ度燙傷模型，研究腹腔內(nèi)給予HDACIs能否減少HIF-1的表達(dá)，減輕腸屏障功能損害；2.通過(guò)腸上皮細(xì)胞低氧培養(yǎng)模型，研究HDACIs下調(diào)HIF-1、保護(hù)腸上皮屏障功能的可能機(jī)制。 方法： 1動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 動(dòng)物分組：64只清潔級(jí)大鼠，體重240g-260g，購(gòu)入后適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。術(shù)前12小時(shí)禁食，自由飲水。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為4組①假燙對(duì)照組（SC組）②燙傷組（SN組）③SAHA治療燙傷組（SS組）④VPA治療燙傷組（SV組）；每組根據(jù)觀察時(shí)間點(diǎn)不同又分燙傷后3h（S3）和燙傷后6h（S6）兩個(gè)亞組，（每個(gè)亞組n=8） 模型制作：取大鼠，，稱重，標(biāo)號(hào)，戊巴比妥鈉（50mg/kg）腹腔內(nèi)注射，麻醉成功后，備背部和腹部皮膚，假燙對(duì)照組大鼠置于37℃溫水中，燙傷組大鼠置于100℃熱水中，背部浸潤(rùn)15s，腹部浸潤(rùn)8s，假燙后在假燙對(duì)照組大鼠腹腔內(nèi)注射生理鹽水0.25ml，燙傷后在燙傷組大鼠腹腔內(nèi)依次注射0.25ml生理鹽水、SAHA(7.5mg/kg，溶于0.25ml生理鹽水中)、丙戊酸鈉(300mg/kg，溶于0.25ml生理鹽水中)，分別在傷后3h和6h從腹主動(dòng)脈取血標(biāo)本、于回腸末端留取腸組織。 指標(biāo)檢測(cè):①紫外分光光度計(jì)檢測(cè)血清中二胺氧化酶(DAO)活性；②熒光顯微鏡觀察免疫熒光雙標(biāo)法標(biāo)記后的腸上皮細(xì)胞中ZO-1的變化；③用免疫印跡的方法測(cè)定腸組織中ZO-1和HIF-1α的含量；④運(yùn)用多普勒血流儀監(jiān)來(lái)測(cè)定腸黏膜血流量（IMBF）的變化； 2細(xì)胞實(shí)驗(yàn) 細(xì)胞分組：取凍存Caco-2細(xì)胞，快速?gòu)?fù)蘇后進(jìn)行培養(yǎng)細(xì)胞，將細(xì)胞隨機(jī)分為四組①正常對(duì)照組（NC組）②缺氧組（H組）③SAHA治療缺氧組(5uM)（HS組）④VPA治療缺氧組（2mM）（HV組）； 模型制作:細(xì)胞融合達(dá)到95%以上時(shí)，分別用DMSO、Cocl2(1mM)+DMSO、 Cocl2(1mM)+SAHA (5uM)、 Cocl2(1mM)+VPA(2mM)+DMSO、刺激24h，24h后留取上清液，取胞漿液。 指標(biāo)檢測(cè)：①紫外分光光度計(jì)檢測(cè)血清液中二胺氧化酶(DAO)活性；②用免疫印跡的方法測(cè)定胞漿中HIF-1α的含量；③免疫共沉淀方法檢測(cè)胞漿中HIF-1α乙�；� 結(jié)果： 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)： 1血清中DAO活性：燙傷組DAO活性較假燙對(duì)照組明顯升高，（P0.05），HDACIs治療燙傷組較燙傷組明顯降低，（P0.05），SAHA治療燙傷組（SS組）較VPA治療燙傷組（SV組）明顯降低，（P0.05）。 2腸組織中緊密連接蛋白ZO-1：（1）免疫印跡法分析，與假燙對(duì)照組比較，燙傷組蛋白表達(dá)明顯減少；HDACIs治療燙傷組顯著高于燙傷組，SAHA治療燙傷組（SS組）較VPA治療燙傷組（SV組）高；（2）觀察免疫熒光，相比燙傷組，假燙對(duì)照組腸粘膜ZO-1呈陽(yáng)性顯示，熒光信號(hào)強(qiáng)，呈現(xiàn)出連續(xù)的狀態(tài)；HDACIs治療燙傷組熒光信號(hào)強(qiáng)于燙傷組（P 0.05），SAHA治療燙傷組（SS組）熒光信號(hào)強(qiáng)于VPA治療燙傷組（SV組）（,P 0.05）。 3HIF-1α Western blot：較假燙對(duì)照組，燙傷組HIF-1α表達(dá)顯著增多（P0.05），而HDACIs治療燙傷組低于燙傷組（P 0.05），SAHA治療燙傷組（SS組）低于VPA治療燙傷組（SV組），(P 0.05)。 4腸黏膜血流量：相比假燙對(duì)照組，燙傷組IMBF明顯降低，（P 0.05），HDACIs治療燙傷組較燙傷組明顯升高，（P 0.05），SAHA治療燙傷組（SS組）較VPA治療燙傷組（SV組）明顯上升，（P 0.05）。 細(xì)胞實(shí)驗(yàn): 1上清液中DAO活性 缺氧組DAO活性相比空白對(duì)照組明顯增大，（P 0.05），而HDACIs治療缺氧組較缺氧組明顯降低，（P0.05），SAHA治療缺氧組較VPA治療缺氧組明顯降低，（P0.05）。 2HIF-1α Western blot：缺氧組HIF-1α蛋白水平較空白對(duì)照組顯著升高（P0.05），而HDACIs治療缺氧組HIF-1α蛋白水平較缺氧組較顯著減少（P0.05）， SAHA治療缺氧組較VPA治療缺氧組顯著減少（P0.05）。 3HIF-1α乙酰化水平：通過(guò)免疫共沉淀方法能夠檢測(cè)HIF-1α乙�；剑毖踅MHIF-1α乙�；讲幻黠@， HDACIs治療缺氧組HIF-1α乙�；捷^缺氧組顯著升高（P0.05）。 結(jié)論： 1HDACIs能抑制大鼠燙傷后腸上皮ZO-1的降解，降低腸上皮細(xì)胞通透性，保護(hù)腸屏障功能，SAHA的保護(hù)作用優(yōu)于VPA。 2HDACIs能夠增加HIF-1α乙�；剑瑴p少HIF-1α的表達(dá)，保護(hù)腸屏障，這可能是HDACIs保護(hù)腸粘膜屏障的重要作用機(jī)制之一。
【關(guān)鍵詞】：組蛋白去乙�；敢种苿� 燙傷 缺氧誘導(dǎo)因子-1 緊密連接蛋白ZO-1 腸屏障
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R644
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 前言11-13
• 第一部分 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)13-19
• 材料與方法13-17
• 結(jié)果17-18
• 結(jié)論18-19
• 第二部分 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)19-35
• 引言19
• 材料與方法19-22
• 結(jié)果22-23
• 附圖23-29
• 附表29-31
• 討論31-34
• 結(jié)論34-35
• 參考文獻(xiàn)35-38
• 綜述 組蛋白去乙�；敢种苿┛谷毖毖醯难芯窟M(jìn)展38-46
• 參考文獻(xiàn)42-46
• 致謝46-47
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷47

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 陳秀凱 ,蒲踐一 ,邱方 ,程愛(ài)國(guó) ,劉剛;二胺氧化酶與D-乳酸對(duì)腦損傷大鼠腸屏障功能的監(jiān)測(cè)意義[J];中國(guó)煤炭工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志;2003年07期

本文編號(hào)：667438