本文關(guān)鍵詞：外源性一氧化碳對(duì)大腸桿菌誘導(dǎo)的感染小鼠炎癥反應(yīng)的抑制作用和分子機(jī)制

  更多相關(guān)文章： 大腸桿菌 膿毒癥 外源性一氧化碳 NF-κB

【摘要】：背景與目的膿毒癥是由感染、創(chuàng)傷或各種疾病引發(fā)的系統(tǒng)性炎性反應(yīng),是一種復(fù)雜的嚴(yán)重的臨床綜合征。盡管在危重病的診斷與救治已經(jīng)高度發(fā)展的今天,其發(fā)病率及病死率仍舊居高不下。據(jù)最新的流行病學(xué)調(diào)查顯示,在美國每年罹患膿毒癥的病人數(shù)約為其人口總數(shù)的3%,并且其中有四分之一的病人死亡。這些膿毒癥病例中由細(xì)菌感染引起的約占總數(shù)的95%,而由革蘭氏陰性桿菌感染引起的病例占所有膿毒癥患者的62.2%,其中大腸桿菌是重要的感染源(占總數(shù)的16%)。在膿毒癥后期,患者腸道功能紊亂,腸道屏障功能降低,作為條件致病菌的大腸桿菌能發(fā)生菌群移位,從而進(jìn)一步加重膿毒癥患者的感染。本研究旨在探索外源性一氧化碳釋放分子Ⅱ(CORM-2)對(duì)體外大腸桿菌(ATCC25922)生長的抑制作用以及CORM-2對(duì)大腸桿菌誘導(dǎo)的感染小鼠炎癥反應(yīng)的抑制作用,并分析其作用機(jī)制。方法本研究分為兩部分。第一部分,觀察CORM-2對(duì)體外大腸桿菌生長的抑制作用。本節(jié)研究中,將大腸桿菌在體外與CORM-2或無活性的iCORM2共同孵育培養(yǎng),通過觀察細(xì)菌48小時(shí)的生長曲線和對(duì)應(yīng)的菌落計(jì)數(shù)來驗(yàn)證CORM-2對(duì)大腸桿菌的抑制作用。第二部分,小鼠腹腔注射大腸桿菌,建立大腸桿菌誘導(dǎo)的小鼠感染模型。再應(yīng)用CORM2對(duì)大腸桿菌誘導(dǎo)的感染小鼠進(jìn)行干預(yù),驗(yàn)證CORM-2對(duì)感染小鼠的炎癥反應(yīng)的抑制作用及其機(jī)制。實(shí)驗(yàn)分組為對(duì)照組、細(xì)菌組、細(xì)菌+CORM-2組、細(xì)菌+iCORM-2組。細(xì)菌組小鼠于腹腔注射預(yù)先制備的大腸桿菌懸液0.5ml；對(duì)照組腹腔注射同等劑量的NaCl溶液；CORM-2和iCORM-2組于腹腔注射大腸桿菌懸液后分別尾靜脈注射CORM-2或iCORM-2 (8mg/kg),觀察各組小鼠36小時(shí)生存率。另取小鼠制作模型,于6小時(shí)后分別收集各組小鼠血清和肝肺組織,蘇木精一伊紅(HE)染色的方法觀察肝、肺組織病理學(xué)改變；終點(diǎn)顯色法檢測(cè)血清中內(nèi)毒素LPS的含量；通過測(cè)定肺組織濕干重比(W／D)來判斷肺部的水腫情況；通過血清轉(zhuǎn)氨酶的測(cè)定來判斷肝臟功能、肝細(xì)胞的損傷情況；使用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測(cè)血清及肝、肺組織勻漿中早期炎癥因子腫瘤壞死因子(TNF-α)和白細(xì)胞介素-1p(IL-Iβ)的表達(dá)水平；通過檢測(cè)肝、肺組織勻漿中髓過氧化物酶(MPO)活性來反應(yīng)中性粒細(xì)胞的浸潤、聚集程度；使用實(shí)時(shí)定量熒光PCR的方法檢測(cè)一氧化氮合酶(iNOS) mRNA表達(dá)；使用菌落計(jì)數(shù)檢測(cè)腹腔灌洗液、血、肝肺組織中大腸桿菌的數(shù)目；使用Western-blot蛋臼質(zhì)印跡法檢測(cè)核因子κB (NF-κB)活性。結(jié)果1、CORM-2對(duì)體外大腸桿菌的生長有抑制作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示與細(xì)菌組和細(xì)菌+iCORM2組比較,細(xì)菌+CORM-2組細(xì)菌的生長明顯被抑制,進(jìn)入增殖活性平臺(tái)期的時(shí)間明顯滯后,且同期菌落計(jì)數(shù)表明,細(xì)菌數(shù)明顯減少。2、CORM-2能夠提高大腸桿菌引起的膿毒癥小鼠的生存率,對(duì)細(xì)菌感染引起的小鼠炎癥反應(yīng)有抑制作用。使用CORM-2干預(yù)能降低細(xì)菌感染小鼠血清中LPS水平,減輕其肺間質(zhì)水腫程度,保護(hù)肝臟的功能,減少血漿及肝肺臟中炎癥因子TNF-α、IL-1β的表達(dá)水平,減少重要臟器白細(xì)胞的浸潤和大腸桿菌的數(shù)量,降低iNOS mRNA表達(dá),同時(shí)亦抑制了重要炎癥信號(hào)分子NF-KB的活化,提高細(xì)菌感染小鼠36h的生存率。結(jié)論CORM-2能夠直接抑制體外大腸桿菌的生長,抑制大腸桿菌誘導(dǎo)的感染小鼠的炎癥反應(yīng),保護(hù)重要臟器,提高感染小鼠生存率,這可能與CORM-2抑制炎癥信號(hào)分子NF-KB的活化有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：大腸桿菌 膿毒癥 外源性一氧化碳 NF-κB
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R459.7
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 引言10-12
• 第一部分 外源性一氧化碳對(duì)體外大腸桿菌生長的抑制作用12-16
• 1 材料與方法12-14
• 2 結(jié)果14-15
• 3 結(jié)論15
• 4 討論15-16
• 第二部分 外源性一氧化碳(CORM-2)對(duì)大腸桿菌誘導(dǎo)的感染小鼠炎癥反應(yīng)的抑制作用及分子機(jī)制16-47
• 第一節(jié) 大腸桿菌誘導(dǎo)感染小鼠模型的建立16-21
• 1 材料與方法16-18
• 2 結(jié)果18-19
• 3 結(jié)論19
• 4. 討論19-21
• 第二節(jié) 外源性一氧化碳(CORM-2)對(duì)大腸桿菌誘導(dǎo)的感染小鼠炎癥反應(yīng)的抑制作用21-40
• 1 材料與方法21-26
• 2 結(jié)果26-37
• 3 結(jié)論37
• 4. 討論37-40
• 第三節(jié) 外源性一氧化碳(CORM-2)抑制大腸桿菌誘導(dǎo)的感染小鼠炎癥反應(yīng)的機(jī)制40-47
• 1 材料與方法40-42
• 2. 結(jié)果42-45
• 3 結(jié)論45-46
• 4 討論46-47
• 全文總結(jié)47-49
• 參考文獻(xiàn)49-57
• 致謝57-58
• 攻讀碩士研究生期間發(fā)表相關(guān)文獻(xiàn)目錄58-59
• (一) 文獻(xiàn)綜述 新的基因毒素的出現(xiàn)體現(xiàn)了大腸桿菌侵襲的多樣性59-63
• 參考文獻(xiàn)62-63
• 附錄（二） 英文縮寫索引63-64

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 趙艷玲,劉軍,肖小河,蔡光明,賀承山;肝得寧片對(duì)體外乙型肝炎病毒標(biāo)志物的抑制作用[J];傳染病藥學(xué);2003年02期

2 ;更正啟示[J];中國動(dòng)脈硬化雜志;2010年01期

3 李柏濤,凌允禮,侯健存;亞硒酸鈉對(duì)人補(bǔ)體溶血功能的抑制作用[J];中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);1991年03期

4 唐中,周京國;丹參液在體外對(duì)血小板活化的抑制作用研究[J];現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生;2003年10期

5 朱英;;(一)-羅漢松脂素體外對(duì)酪蛋白激酶的強(qiáng)抑制作用[J];國外醫(yī)藥(植物藥分冊(cè));2004年05期

6 梅鎮(zhèn)彤;沈克飛;;皮仛桘刺激\ 胃分泌的抑制作用，

本文編號(hào)：534676