發(fā)布時間：2024-03-07 18:40

　　目的:中暑是一種嚴重的熱性疾病,主要表現(xiàn)為體溫過高與中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙,嚴重的中暑可導致多臟器功能衰竭,具有較高的死亡率與致殘率。當前研究認為,下丘腦主動參與體溫調節(jié)功能障礙,在重癥中暑發(fā)生過程中具有關鍵作用,但目前具體病理生理機制尚未明確。本研究中通過建立重癥中暑小鼠模型,利用組織病理學、二維熒光差異凝膠電泳分析、基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜明確下丘腦的損傷并分析鑒定下丘腦差異表達的蛋白質,進一步通過嗜鉻細胞瘤-12(PC12)神經(jīng)元細胞系建立熱打擊神經(jīng)元細胞模型研究海馬鈣結合蛋白對細胞凋亡的作用,以揭示重癥中暑神經(jīng)元細胞的病理過程。最后,通過在體、體外研究烏司他丁在熱打擊動物與細胞中的作用及具體可能作用機制,并進一步驗證HPAC的作用,為重癥中暑的臨床治療以及研究提供基礎與新思路。方法:在體實驗中利用仿真氣候艙建立中暑小鼠模型,利用組織病理學檢測不同中暑程度小鼠下丘腦損傷情況;通過熒光二維差異凝膠電泳分析下丘腦中14種差異表達的蛋白質,并通過基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜鑒定,并選擇海馬鈣結合蛋白(HPAC)作為我們的研究對象,應用TUNEL、Western blot、免疫...

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
第一章 文獻研究
    第一節(jié) 流行病學
    第二節(jié) 下丘腦損傷在重癥中暑發(fā)病中的作用
    第三節(jié) 重癥中暑腦損傷的病理生理機制
    第四節(jié) HPAC在下丘腦損傷中的研究現(xiàn)狀
    第五節(jié) 烏司他丁在中暑中的治療
第二章 材料與方法
    第一節(jié) 實驗材料
        一、動物與細胞
        二、主要儀器
        三、主要試劑
        四、主要試劑配制
    第二節(jié) 實驗方法
        一、重癥中暑小鼠模型制備與冷卻處理方法
        二、給藥方案
        三、組織病理學分析
        四、雙向熒光差異凝膠電泳和基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜分析
        五、細胞培養(yǎng)和熱打擊方案
        六、MTT法細胞活力檢測
        七、總蛋白提取及BCA法蛋白定量
        八、Caspase-3活性測定
        九、流式細胞術分析
        十、細胞轉染
        十一、免疫組化
        十二、TUNEL原位檢測凋亡細胞
        十三、統(tǒng)計學方法
第三章 結果
    第一節(jié) 熱打擊致下丘腦損傷的在體研究
        一、熱打擊致下丘腦組織神經(jīng)元損傷
        二、熱打擊小鼠下丘腦中差異表達蛋白質的鑒定結果
        三、熱打擊小鼠下丘腦中HPAC的表達顯著下調
    第二節(jié) HPAC在熱打擊下丘腦神經(jīng)元細胞凋亡中的作用研究
        一、熱打擊PC12細胞HPAC表達下降
        二、熱打擊至PC12細胞凋亡
        三、HPAC過表達可降低熱打擊誘導的PC12細胞凋亡
        四、HPAC表達下調增加熱打擊誘導的PC12細胞凋亡
    第三節(jié) 烏司他丁在中暑下丘腦損傷的保護作用
        一、烏司他丁可抑制熱打擊PC12細胞HPAC表達的下調
        二、烏司他丁可減輕熱打擊PC12細胞凋亡
        三、烏司他丁抑制中暑小鼠下丘腦HPAC表達的下降
        四、烏司他丁預處理可降低中暑小鼠下丘腦神經(jīng)元細胞凋亡水平
        五、烏司他丁可降低中暑小鼠下丘腦病理損傷評分
        六、烏司他丁可延長中暑小鼠中心體溫變化平臺期增加小鼠耐熱性
第四章 討論
結語
    參考文獻
附錄
在校期間發(fā)表論文情況
致謝
附件



本文編號：3921570