目的:通過分離、培養(yǎng)人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cell,MSC),構(gòu)建肝細(xì)胞生長因子(hepatocyte growth factor,HGF)低表達(dá)的人胎盤MSC細(xì)胞株,作用于急性肺損傷(acute lung injury,ALI)肺血管內(nèi)皮細(xì)胞及動(dòng)物模型,探究人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞HGF下調(diào)對急性肺損傷肺血管內(nèi)皮修復(fù)的影響。方法:(1)(1)采用酶消化法分離人胎盤MSC。(2)光鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)及生長狀況,特定培養(yǎng)條件下誘導(dǎo)其向脂肪、骨、軟骨細(xì)胞分化,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞抗原表型,鑒定分離的細(xì)胞具備MSC的一般特性。(3)比較人胎盤、骨髓、脂肪來源的間充質(zhì)干細(xì)胞HGF分泌水平。(2)(1)檢測人胎盤MSC對LPS誘導(dǎo)的肺血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性的影響及HGF分泌水平:構(gòu)建人胎盤MSC與人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞(human pulmonary microvascular endothelial cell,HPMVEC)Transwell共培養(yǎng)體系,設(shè)置正常對照組(Control組)、ALI模型組(LPS組)、人胎盤MSC組(LPS+MSC組),Transwell共培養(yǎng)體系共...

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-1光鏡下人胎盤MSC形態(tài)特征

碩士學(xué)位論文第一部結(jié)果充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)及生長情況間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)特征-1所示，從胎盤組織獲取的原代細(xì)胞，培養(yǎng)48h后，倒置顯微鏡下觀察壁生長，呈短梭形或長條狀，形態(tài)不均一。隨著傳代次數(shù)的增加，細(xì)呈長梭形或纖維細(xì)胞樣，核明顯，增殖旺盛，呈現(xiàn)旋渦狀或輻射狀生

圖1-3人胎盤MSC抗原表型的鑒定

圖1-2細(xì)胞生長曲線2.人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞抗原表型的鑒定如圖1-3所示，第3代人胎盤MSC表面標(biāo)記分子CD105、CD90、CD73陽性率分別為99.1%、96.0%、99.8%，CD45、CD34、CD14陽性率分別為1.0%、0.3%、0.3%，符....

圖1-2細(xì)胞生長曲線

圖1-2細(xì)胞生長曲線人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞抗原表型的鑒定如圖1-3所示，第3代人胎盤MSC表面標(biāo)記分子CD105、CD90、CD799.1%、96.0%、99.8%，CD45、CD34、CD14陽性率分別為1.0%、0.3典型的MSC抗原表型特征。

圖1-4成脂誘導(dǎo)分化

學(xué)碩士學(xué)位論文間充質(zhì)干細(xì)胞多向分化潛能的鑒定導(dǎo)分化4代分裂增殖的人胎盤MSC接種于6孔板，當(dāng)細(xì)胞貼壁融合度達(dá)的成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基，于誘導(dǎo)第6d，可見孔內(nèi)有細(xì)小、折誘導(dǎo)時(shí)間的延長，脂肪顆粒數(shù)目逐漸增多，互相融合呈泡狀，肪顆粒，細(xì)胞逐漸變得圓鈍，直至誘導(dǎo)第21d....

本文編號：3892419