目的:本研究探究膿毒癥狀態(tài)下白細胞介素（Interleukin）-33表達水平與小鼠脾臟樹突狀細胞（DC）焦亡、功能改變的關(guān)系及其與免疫功能障礙的內(nèi)在聯(lián)系。方法:正常小鼠隨機分為假傷組、CLP組、sST2干預組。采用盲腸結(jié)扎穿孔（Cecal ligation and puncture,CLP）方法復制膿毒癥小鼠模型;假傷組（Sham組）除不進行盲腸穿孔外,其與處理方法同CLP組;sST2（可溶性ST2受體,可結(jié)合IL-33,拮抗其生物學功能）干預組于CLP術(shù)后1 h經(jīng)腹腔注射重組sST2（每只10μg,溶于200μL PBS中）,同批對照CLP組同時給予200μL PBS腹腔注射。另設IL-33處理組,給予正常小鼠腹腔注射重組IL-33（每只5μg,溶于200μL PBS中）,同批正常對照組給予200μL PBS腹腔注射。采用免疫磁珠分離提純小鼠脾臟DC。正常小鼠脾臟DC體外培養(yǎng)并給予不同濃度（0、1、10、100 ng/mL）、不同時間（12和24 h）重組IL-33刺激。采用流式細胞術(shù)檢測各組DC焦亡情況以及DC表面標志分子CD80、CD86、主要組織相容性復合物-II（MHC-I... 

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 緒論
    1.1 膿毒癥簡介
    1.2 樹突狀細胞與膿毒癥的研究進展
        1.2.1 樹突狀細胞分類
        1.2.2 樹突狀細胞在膿毒癥免疫調(diào)控中的作用
    1.3 IL-33的研究進展
        1.3.1 IL-33分子特征與生物活性
        1.3.2 IL-33介導炎癥反應
        1.3.3 IL-33與膿毒癥
    1.4 焦亡的研究進展
        1.4.1 細胞焦亡的簡介
        1.4.2 細胞焦亡分子機制
        1.4.3 細胞焦亡對免疫反應的調(diào)控作用
    1.5 研究目的及意義
第2章 實驗材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 實驗儀器及試劑
    2.2 實驗方法
        2.2.1 盲腸結(jié)扎穿孔(CLP)小鼠膿毒癥模型建立及分組
        2.2.2 小鼠脾臟樹突狀細胞的分離制備
        2.2.3 流式細胞術(shù)檢測小鼠脾臟DC表面標志分子表達
        2.2.4 流式細胞術(shù)檢測小鼠脾臟DC焦亡
        2.2.5 裂解法提小鼠脾臟DC蛋白
        2.2.6 裂解法提小鼠組織蛋白
        2.2.7 蛋白印跡法(Western blot)檢測蛋白表達水平
        2.2.8 共聚焦顯微鏡觀測細胞內(nèi)蛋白表達
    2.3 統(tǒng)計學處理實驗結(jié)果
第3章 實驗結(jié)果
    3.1 不同時間點CLP膿毒癥模型小鼠脾臟DC焦亡情況
        3.1.1 流式細胞術(shù)檢測CLP小鼠脾臟DC焦亡率
        3.1.2 激光共聚焦檢測CLP小鼠脾臟DC焦亡
        3.1.3 蛋白印跡檢測CLP小鼠脾臟DC焦亡相關(guān)蛋白表達
    3.2 CLP小鼠脾臟IL-33表達水平
        3.2.1 CLP小鼠脾臟組織IL-33蛋白表達水平
        3.2.2 CLP小鼠脾臟DC胞內(nèi)IL-33 表達水平
    3.3 CLP小鼠脾臟DC表面標志物表達情況
    3.4 重組IL-33(rmIL-33)對小鼠脾臟DC焦亡及功能狀態(tài)的直接影響
        3.4.1 體外重組IL-33對小鼠脾臟DC功能狀態(tài)的直接影響
        3.4.2 重組IL-33對小鼠脾臟DC焦亡及功能狀態(tài)的直接影響
    3.5 sST2干預對小鼠脾臟DC焦亡率的影響
    3.6 sST2干預對小鼠脾臟DC表面標志分子的影響
第4章 討論
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻
附錄
攻讀碩士學位期間發(fā)表論文情況
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]白細胞介素-33對膿毒癥小鼠脾臟樹突狀細胞免疫功能的影響[J]. 陰月,王麗雪,董寧,吳瑤,童亞林,祝筱梅,姚詠明.  感染、炎癥、修復. 2019(04)
[2]HBV感染者血清IL-33表達水平與疾病進展的相關(guān)性研究[J]. 張玉麗,黃天壬,鄧偉,黃月瑩,曾潔,吳玲紅.  應用預防醫(yī)學. 2018(02)
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[4]炎癥復合體與炎癥反應[J]. 祝筱梅,姚詠明,盛志勇.  生物化學與生物物理進展. 2010(02)
[5]膿毒癥——挑戰(zhàn)與對策[J]. 林洪遠.  中國危重病急救醫(yī)學. 2004(06)



本文編號：3726410