第一部分20-HETE抑制劑對幼鼠創(chuàng)傷性腦損傷后小膠質(zhì)細(xì)胞激活的影響目的:探討幼鼠創(chuàng)傷性腦損傷（Traumatic brain injury,TBI）后小膠質(zhì)細(xì)胞的激活特點(diǎn),以及使用20-HETE抑制劑后對腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞的影響。方法:選用生后9天的雄性SD大鼠,隨機(jī)分為Sham組,TBI+Vehicle組,TBI+HET0016組。Sham組僅行開顱和縫合處理。其余兩組均使用控制性皮層沖擊損傷（Controlled cortical impact,CCI）儀復(fù)制創(chuàng)傷性腦損傷模型。TBI+HET0016組在損傷后5分鐘及3小時腹腔注射20-HETE抑制劑HET0016溶液（1mg/kg）,TBI+Vehicle組在相同時間點(diǎn)腹腔注射同等劑量的45%β-環(huán)糊精溶液。在TBI后3天,腦組織不同區(qū)域冰凍切片進(jìn)行Iba-1的DAB染色,觀察小膠質(zhì)細(xì)胞的區(qū)域分布特點(diǎn)以及創(chuàng)傷性腦損傷后小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)變化。皮層區(qū)進(jìn)行CD68/Iba-1免疫熒光,觀察腦損傷后小膠質(zhì)細(xì)胞的激活特點(diǎn)以及HET0016對皮層區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞的影響。海馬區(qū)進(jìn)行CD68免疫熒光染色,觀察小膠質(zhì)細(xì)胞變化情況以及HET0016對海馬區(qū)小... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

開顱位置

圖 1-2 控制性皮層損傷儀Figure1-2 Controlled cortical impact device1.2.2 標(biāo)本的處理和取材SD 大鼠于 TBI 后 3 天 1.5%戊巴比妥鈉（2ml/kg）腹腔麻醉，待大鼠對疼痛無反應(yīng)后仰臥固定于泡沫板上，固定四肢。沾取一定量生理鹽水將腹部毛發(fā)打濕，左手持鑷子夾起腹部皮膚，右手持剪刀沿腹中線和胸骨劍突中線向上將皮膚剪開，將皮膚翻向兩側(cè)，用骨科剪沿胸骨中線剪開胸骨，沿膈肌向兩側(cè)切開，并用止血鉗將胸骨及胸部皮膚鉗緊，將止血鉗翻向外側(cè)以充分暴露心臟。分離出主動脈，穿一根絲線，將左心室尖用眼科剪剪開一小口，迅速插入灌注針，用絲線結(jié)扎牢固。打開調(diào)節(jié)閥，灌注生理鹽水。剪開右心耳，使血液流出，觀察肝臟逐漸變?yōu)榘咨?流出液體清亮后更換固定液。4%多聚甲醛固定液進(jìn)入大鼠血管后，逐漸出現(xiàn)四肢抽動，待抽動完全停止，全身組織變硬即可取

圖 1-3 TBI 后 3 天大鼠大腦 Iba-1 抗體 DAB 染色 ×400 (各組 n=4)A.損傷周圍皮質(zhì)區(qū)； B.皮質(zhì)區(qū)；C.胼胝體；D.海馬；E.紋狀體；F.丘腦，G.梨狀皮層1.患側(cè)大腦半球 2.對側(cè)大腦半球 3.正常大腦半球Figure1-3 Iba-1 DAB staining in SD rat‘s brain after 3d of TBIA.Injured area surrounding cortex; B.Cortex; C. Corpus callosum; D. Hippocampus; E.Corpus striatum; F. Thalamus; G. Piriform cortex; 1. Hemisphere of injured side 2.Hemisphere of another side 3. Hemisphere of sham group2.2 皮層區(qū) CD68 和 Iba-1 表達(dá)使用 CD68 標(biāo)記活化的小膠質(zhì)細(xì)胞，Iba-1 標(biāo)記小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞。如圖1-4，通過免疫熒光染色，可見 DAPI 標(biāo)記的細(xì)胞核呈藍(lán)色熒光，F(xiàn)ITC 標(biāo)記的 CD68顯示活化小膠質(zhì)細(xì)胞呈綠色熒光，Alexa Flour 標(biāo)記的 Iba-1 顯示小膠質(zhì)細(xì)胞呈紅色熒光。如圖 1-4 所示，與 Sham 組比較，創(chuàng)傷性腦損傷（TBI+Vehicle）組CD68 和 Iba-1 表達(dá)明顯增加。HET0016 治療（TBI+HET0016）組與 TBI+Vehicle


本文編號：3244066