目的:探討自噬流與脂多糖（LPS）誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞（HK-2細(xì)胞）炎癥反應(yīng)的關(guān)系,檢測(cè)Toll樣受體（TLR4）是否參與其中。方法:實(shí)驗(yàn)分為以下5組:陰性對(duì)照組、LPS（100μg/mL）組、LPS（100μg/mL）+雷帕霉素（RAP）（10μmol/L）組、LPS（100μg/mL）+氯喹（CQ）（10μmol/L）組、LPS（100μg/mL）+TAK242（TLR4拮抗劑）（2μmol/L）組,刺激HK-2細(xì)胞,通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（qPCR）檢測(cè)白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、TLR4、選擇性自噬接頭蛋白（P62）和自噬微管相關(guān)蛋白1輕鏈3（LC3）mRNA表達(dá)和Western blotting檢測(cè)IL-1β、TLR4、P62和LC3蛋白表達(dá);采用自噬雙標(biāo)腺病毒（mRFP-GFP-LC3）轉(zhuǎn)染HK-2細(xì)胞檢測(cè)自噬流,在共聚焦顯微鏡下觀察自噬體與自噬溶酶體數(shù)量變化以判斷自噬流表達(dá)情況。結(jié)果:與陰性對(duì)照組比較,LPS可誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞IL-1β、TLR4和P62 mRNA和蛋白表達(dá)上調(diào)（P<0.05）,LC3 mRNA和LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)上調(diào)（P<0.05）... 

【文章來(lái)源】：廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2020,37(05)

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qPCR檢測(cè)RAP、CQ、TAK242對(duì)LPS刺激HK-2細(xì)胞IL-1β、TLR4、LC3、P62基因表達(dá)的影響

圖1 qPCR檢測(cè)RAP、CQ、TAK242對(duì)LPS刺激HK-2細(xì)胞IL-1β、TLR4、LC3、P62基因表達(dá)的影響2.3.2 mRFP-GFP-LC3檢測(cè)自噬流結(jié)果

與陰性對(duì)照組比較，LPS組黃色斑點(diǎn)數(shù)量明顯增多，紅色斑點(diǎn)很少，表明自噬體明顯增多，自噬溶酶體很少，說(shuō)明LPS可誘導(dǎo)自噬流障礙；與LPS組比較，LPS+RAP組紅色斑點(diǎn)數(shù)量明顯增多，表明自噬溶酶體明顯增多，說(shuō)明RAP改善自噬流障礙；LPS+CQ組黃色斑點(diǎn)數(shù)量增多，基本無(wú)紅色斑點(diǎn)，表明自噬體增多，自噬溶酶體基本不存在，說(shuō)明CQ使自噬流受阻；LPS+TAK242組紅色斑點(diǎn)數(shù)量明顯增多，表明自噬溶酶體明顯增多，與RAP組的結(jié)果相似，說(shuō)明TAK242也可逆轉(zhuǎn)LPS誘導(dǎo)的自噬流障礙，TLR4可調(diào)控自噬流，見(jiàn)圖3。3 討論


本文編號(hào)：3211530