[目的]通過(guò)構(gòu)建脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)誘導(dǎo)的大鼠H9c2心肌細(xì)胞為炎癥模型,從細(xì)胞和分子層面探討天麻素對(duì)H9c2心肌細(xì)胞炎癥的抑制作用及其信號(hào)機(jī)制。 [方法]體外培養(yǎng)的大鼠H9c2心肌細(xì)胞隨機(jī)分為空白對(duì)照組、LPS (1μg/ml,30min-12h)處理組、不同濃度的天麻素(5、10和20μM,1h)+LPS處理組、不同濃度的天麻素+LPS+wortmannin (1μM)共同處理組和陽(yáng)性對(duì)照組。采用四甲基偶氮唑藍(lán)比色法(MTT)檢測(cè)天麻素、LPS以及wortmannin對(duì)H9C2心肌細(xì)胞的活力影響；采用免疫熒光雙標(biāo)記檢測(cè)方法(double-immunofluorescence labeling assay)在熒光顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞內(nèi)誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)、環(huán)氧化酶-2(cyclooxygenase-2, COX-2)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor, TNF-α)和白介素-6(interleukin-6, IL-6)蛋白水平的變化；應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)檢測(cè)iNOS、COX-2、TNF-α和IL-6的mRNA水平的變化；采用蛋白質(zhì)印跡分析方法(western blotting)檢測(cè)蛋白激酶B (protein kinase B, Akt)、抑制劑κB (inhibitor κB,IκB)、促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases, MAPKs)家族的細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase1/2, ERK1/2)、 c-Jun氨基端激酶(c-Jun N-terminal kinases, JNK)和p38促分裂原活化蛋白激酶(p38mitogen-activated protein kinases, p38MAPK)等細(xì)胞信號(hào)通路蛋白的表達(dá)及其變化規(guī)律：采用凝膠遷移或電泳遷移率實(shí)驗(yàn)(electrophoretic mobility shift assay, EMSA)檢測(cè)核因子-κB (nuclear factor-κB,NF-κB)的蛋白表達(dá)水平。 [結(jié)果]H9c2心肌細(xì)胞以1×106個(gè)/ml濃度接種于6孔板中,當(dāng)密度均勻生長(zhǎng)至80%時(shí),使用MTT檢測(cè)H9c2心肌細(xì)胞活力影響,結(jié)果顯示：經(jīng)天麻素(5、10和20μM)、 LPS (1μg/ml)和wortmannin (1μM)分別處理或共同處理12h后該細(xì)胞活性均無(wú)明顯影響；加入P13-K抑制劑wortmannin (1μM)1h后,再加入天麻素和LPS處理細(xì)胞30min-3h,采用免疫熒光雙標(biāo)記檢測(cè)方法、RT-PCR、 EMSA以及western blotting分析,得到結(jié)果：①不同濃度的天麻素明顯激活H9c2心肌細(xì)胞PI3-K/Akt的磷酸化表達(dá)；②不同濃度的天麻素通過(guò)PI3-K/Akt信號(hào)通路在轉(zhuǎn)錄水平和翻譯水平明顯抑制LPS誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞促炎性蛋白酶iNOS和COX-2的表達(dá)；③不同濃度的天麻素激活PI3-K/Akt信號(hào)通路下調(diào)LPS誘導(dǎo)的H9C2心肌細(xì)胞促炎性細(xì)胞因子TNF-a和IL-6在mRNA水平和蛋白水平的表達(dá)；④天麻素通過(guò)PI3-K/Akt信號(hào)通路抑制LPS誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞NF-κB的激活；⑤天麻素激活PI3-K/Akt信號(hào)通路抑制LPS誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞IκB、 ERK1/2、 JNK和p38MAPK的磷酸化。 [結(jié)論]①5-20gM的天麻素、1μg/ml的LPS和1μM wortmannin的對(duì)細(xì)胞活性沒(méi)有影響；②天麻素通過(guò)PI3-K/Akt信號(hào)通路抑制MAPKs的磷酸化來(lái)調(diào)控LPS誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞內(nèi)促炎性蛋白酶以及促炎性細(xì)胞因子的釋放;③天麻素激活PI3-K/Akt信號(hào)通路抑制IκB的磷酸化和NF-κB的活化,從而發(fā)揮天麻素下調(diào)LPS誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞的抗炎作用。
【學(xué)位單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2013
【中圖分類(lèi)】：R459.7
【文章目錄】：
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材料與方法
結(jié)果
討論
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【共引文獻(xiàn)】

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2 文重遠(yuǎn),李庚山,劉永明,王騰,吳勇,陳小琳;游離脂肪酸對(duì)2型糖尿病心肌能量底物代謝及心功能的影響[J];臨床心血管病雜志;2005年07期

3 蘇會(huì)玲;湯桂梅;范洪君;蘇紅慧;陳坤;;HGF/SF-MET通路的基本原理[J];河北醫(yī)藥;2013年21期

4 薛偉善;;不同運(yùn)動(dòng)時(shí)間對(duì)2型糖尿病大鼠骨骼肌Glut-4含量變化的研究[J];沈陽(yáng)體育學(xué)院學(xué)報(bào);2012年04期

5 薛紅麗;張?jiān)?王文健;陳偉華;應(yīng)健;;益氣增敏方對(duì)2型糖尿病大鼠骨骼肌組織葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4表達(dá)的影響[J];中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報(bào);2011年10期

6 李永春;;糖尿病大鼠骨骼肌細(xì)胞膜葡葡糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4含量在不同強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)狀態(tài)下的變化[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2008年20期

7 李春蕊;張晶;劉文勵(lì);張木勛;;羅格列酮對(duì)實(shí)驗(yàn)性2型糖尿病合并高脂血癥大鼠骨骼肌組織IRS-1及GLUT4表達(dá)的調(diào)節(jié)[J];中國(guó)病理生理雜志;2007年05期

8 陳頻;徐向進(jìn);史道華;;復(fù)方丹參滴丸對(duì)胰島素抵抗大鼠糖脂代謝的影響[J];中成藥;2008年04期

9 宋春宇,畢會(huì)民;葛根素對(duì)大鼠胰島素刺激下骨骼肌細(xì)胞膜GLUT4蛋白含量的影響[J];中國(guó)中藥雜志;2004年02期

10 張玲;李大偉;夏作理;李青;;釩對(duì)心血管系統(tǒng)功能的影響及其機(jī)理[J];中國(guó)微循環(huán);2006年06期

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4 李艷蓉;新型釩配合物雙（α-呋喃甲酸）氧釩的降糖作用及機(jī)理分析[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2005年

5 李為為;漸進(jìn)性訓(xùn)練對(duì)糖尿病大鼠TNF-α和SOD含量的影響[D];華東師范大學(xué);2006年

6 周晨慧;PTEN基因SNP及單體型在西南地區(qū)漢族人群的分布及與2型糖尿病的關(guān)系[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2006年

7 陳頻;復(fù)方丹參滴丸對(duì)胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)糖脂代謝的作用及其機(jī)制研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2007年

8 王超然;新型釩化合物V-SIH或V-NIH降低1型糖尿病大鼠血糖及其細(xì)胞毒性的研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2009年

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10 汪曉芬;大鼠追趕生長(zhǎng)早期脂肪組織和骨骼肌葡萄糖代謝差異及其機(jī)制的研究[D];華中科技大學(xué);2008年

本文編號(hào)：2832133