【摘要】：腦水腫在我國(guó)是最常見(jiàn)的顱內(nèi)急癥,常見(jiàn)于腦缺血以及創(chuàng)傷性的腦損傷后。腦水腫治療的及時(shí)性對(duì)患者的神經(jīng)功能恢復(fù)至關(guān)重要,它也是腦損傷后高死亡率和高致殘率的主要原因。臨床上對(duì)于腦水腫的治療主要限于高滲療法,目前所使用的抗腦水腫藥物也存在一定的局限。由于腦水腫發(fā)生的詳細(xì)機(jī)制研究還不是很清楚,從而限制了新的抗腦水腫藥物的開(kāi)發(fā)。細(xì)胞壞死是多種腦損傷后損傷區(qū)域與及其損傷區(qū)周?chē)闹饕±砀淖儭３绦蛐约?xì)胞壞死(necroptosis)是一種由細(xì)胞內(nèi)受體相互作用蛋白激酶(receptor interacting protein kinase 3,RIP3)/混合譜系結(jié)構(gòu)域樣蛋白(mixed lineage kinase domain-like protein,MLKL)信號(hào)介導(dǎo)的可控性的細(xì)胞壞死,是腦損傷及腦缺血后細(xì)胞死亡的主要方式之一。程序性細(xì)胞壞死是否參與腦損傷后腦水腫形成,至今未見(jiàn)研究。本項(xiàng)目采用顱腦開(kāi)放性損傷模型、腦缺血模型,研究了腦損傷后程序性壞死關(guān)鍵分子RIP3、MLKL及腦水腫相關(guān)指標(biāo)的表達(dá);采用RIP3、MLKL基因敲除小鼠,研究了RIP3和MLKL在腦水腫發(fā)生中的作用,為闡明腦損傷后腦水腫的發(fā)生的機(jī)制提供了新的角度。目的揭示程序性細(xì)胞壞死關(guān)鍵分子MLKL和RIP3在小鼠損傷后腦水腫組織中的表達(dá)及作用,為腦損傷后腦水腫的機(jī)制研究和治療策略提供新的思路。材料與方法腦損傷模型的建立:通過(guò)向野生型(Wild type,WT)和MLKL敲除(MLKL~(-/-))、RIP3敲除(RIP3~(-/-))小鼠尾靜脈注射玫瑰紅溶液(藥量40 mg/kg、濃度6 mg/ml),構(gòu)建缺血性腦損傷致腦水腫模型。另使用創(chuàng)傷模型的撞擊裝置,在撞擊速度為2 m/s,深度為1.5 mm,持續(xù)時(shí)間為200 ms條件下沖擊小鼠皮質(zhì),構(gòu)建創(chuàng)傷性腦損傷后腦水腫模型。造模成功后,灌注取腦,制備冰凍切片,分別利用蘇木精伊紅染色(HE)技術(shù)及干濕重方法分析腦組織缺血及損傷后腦水腫情況;利用免疫熒光染色及免疫電鏡技術(shù)觀(guān)察程序性壞死/腦水腫關(guān)鍵基因MLKL/RIP3蛋白在腦水腫區(qū)域的表達(dá)和分布;利用蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)(Western Blot)檢測(cè)小鼠腦水腫后MLKL/RIP3蛋白的表達(dá)情況及參與腦水腫調(diào)控的水通道蛋白-4(aquaporin,AQP4)的表達(dá)變化情況。結(jié)果1.腦損傷致腦水腫模型的建立:缺血后損傷后,HE染色顯示缺血損傷后腦中線(xiàn)偏移,損傷側(cè)腦組織有顯著的水腫現(xiàn)象;開(kāi)放性顱腦創(chuàng)傷后,腦組織干濕重測(cè)量顯示創(chuàng)傷組腦組織水分含量顯著增多。2.腦水腫組織中程序性壞死關(guān)鍵分子RIP3、MLKL的表達(dá):Western Blot顯示:腦缺血及創(chuàng)傷致腦水腫后,損傷側(cè)MLKL及RIP3蛋白表達(dá)分布增加;免疫熒光雙標(biāo)染色顯示:正常小鼠皮質(zhì)無(wú)RIP3和MLKL表達(dá),腦損傷后,MLKL及RIP3蛋白特異性分布于血管旁星形膠質(zhì)細(xì)胞;免疫電鏡研究顯示:在水腫區(qū),血管周?chē)切文z質(zhì)細(xì)胞內(nèi)有大量標(biāo)記MLKL及RIP3的膠體金顆粒分布。3.程序性壞死在損傷后腦水腫中的作用:免疫組化及Western Blot結(jié)果顯示,與野生型小鼠相比,RIP3、MLKL敲除小鼠損傷區(qū)AQP4表達(dá)增加,免疫球蛋白(IgG)滲出減少,水腫面積縮小,提示MLKL及RIP3可能參與調(diào)節(jié)腦水腫,可作為腦水腫治療的潛在靶標(biāo)。結(jié)論腦損傷可上調(diào)MLKL及RIP3的表達(dá)。水腫期,血管周?chē)男切文z質(zhì)細(xì)胞表達(dá)MLKL和RIP3,發(fā)生程序性壞死。,敲除MLKL和RIP3基因可減輕損傷導(dǎo)致的腦水腫,提示程序性細(xì)胞壞死相關(guān)蛋白可能參與了腦水腫發(fā)生。
【學(xué)位授予單位】：成都醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R651.15
【圖文】：

圖 1-1 腦缺血模型的建立顱腦損傷模型的建立（圖 1-2）2%巴比妥鈉將小鼠麻醉，待麻醉后縱向剪開(kāi)頭皮，暴露顱 mm，腦中線(xiàn)左側(cè)旁約 0.5 cm 處開(kāi)孔，用鑷子拋開(kāi)露骨壞。裝置撞擊小鼠皮質(zhì)開(kāi)孔處，所用裝置與平面垂直。沖擊持續(xù)時(shí)間為 200 ms，使小鼠腦皮質(zhì)出現(xiàn)中重度損傷。若止血處理，圓形鋼頭在沖擊的過(guò)程中，注意固定好小鼠用碘伏消毒損傷部位，將剪開(kāi)頭皮縫合，關(guān)閉裝置。置保暖處至其蘇醒，72 h 后取組織。

圖 1-1 腦缺血模型的建立放性顱腦損傷模型的建立（圖 1-2）為2%巴比妥鈉將小鼠麻醉，待麻醉后縱向剪開(kāi)頭皮，暴露顱骨，.5-2 mm，腦中線(xiàn)左側(cè)旁約 0.5 cm 處開(kāi)孔，用鑷子拋開(kāi)露骨，小破壞。模裝置撞擊小鼠皮質(zhì)開(kāi)孔處，所用裝置與平面垂直。沖擊速度m，持續(xù)時(shí)間為 200 ms，使小鼠腦皮質(zhì)出現(xiàn)中重度損傷。若撞擊予止血處理，圓形鋼頭在沖擊的過(guò)程中，注意固定好小鼠頭部，用碘伏消毒損傷部位，將剪開(kāi)頭皮縫合，關(guān)閉裝置。放置保暖處至其蘇醒，72 h 后取組織。

成都醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文腦損傷模型的建立 腦缺血模型的建立及腦水腫的測(cè)量按照文獻(xiàn)制備小鼠腦缺血模型[18, 19]。造模前，將假手術(shù)組和腦缺血組在統(tǒng)一環(huán)一周，然后通過(guò)尾靜脈注射玫瑰紅溶液制造缺血后腦水腫模型，造模結(jié)束后 7取組織，冰凍切片后進(jìn)行 HE 染色。HE 染色結(jié)果顯示，缺血組皮質(zhì)區(qū)域有明顯及腦組織腫脹，導(dǎo)致半球中線(xiàn)偏移。以損傷側(cè)面積與正常腦組織側(cè)面積的比值腫指數(shù)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)缺血側(cè)腦組織面積與正常側(cè)腦組織面積的比值大于 1，提示缺腫脹(圖 1-3)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 宋博;李百鑫;;嬰兒腦損傷應(yīng)用核磁共振檢查的臨床研究[J];世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘;2017年12期

2 吳毅;Kristman VL;Brison RJ;Bédard M;;老年人輕度腦損傷的恢復(fù)預(yù)測(cè)[J];中國(guó)康復(fù);2017年02期

3 彭英;;腦損傷研究歷史、現(xiàn)狀,面臨的挑戰(zhàn)與使命[J];內(nèi)科理論與實(shí)踐;2017年02期

4 楊惠婷;;小兒腦損傷的康復(fù)治療與應(yīng)用意義初步研究[J];世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘;2017年15期

5 孟巧霞;;高危兒篩查和嬰兒腦損傷的早期醫(yī)學(xué)干預(yù)效果研究[J];健康之路;2016年10期

6 周巖;;搖晃嬰兒會(huì)致腦損傷嗎?[J];益壽寶典;2017年15期

7 洪梅;;一種關(guān)節(jié)炎藥有助減輕中風(fēng)腦損傷[J];老同志之友;2017年11期

8 ;第八屆國(guó)際腦損傷大會(huì)通知[J];中華神經(jīng)外科疾病研究雜志;2009年05期

9 韓雪梅;王金良;;腦損傷的標(biāo)志物[J];江西醫(yī)學(xué)檢驗(yàn);2007年02期

10 林重輝;楊應(yīng)明;;白介素1β在二次腦損傷中的作用及機(jī)制[J];廣東醫(yī)學(xué);2007年10期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 王寧華;;腦損傷康復(fù)摔倒及平衡控制訓(xùn)練[A];首屆全國(guó)腦外傷治療與康復(fù)學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編（上）[C];2011年

2 潘立東;盛佩池;;麻醉相關(guān)性腦保護(hù)在重度腦損傷中的應(yīng)用價(jià)值[A];2005年浙江省麻醉學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2005年

3 李鷗;郭知學(xué);;腦損傷康復(fù)的基礎(chǔ)——腦的可塑性[A];中國(guó)康復(fù)醫(yī)學(xué)會(huì)第22屆療養(yǎng)康復(fù)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

4 吳毅;;腦損傷部位與功能障礙的相關(guān)性研究[A];首屆全國(guó)腦外傷治療與康復(fù)學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編（上）[C];2011年

5 陳立典;;傳統(tǒng)康復(fù)方法在腦損傷治療中的應(yīng)用[A];首屆全國(guó)腦外傷治療與康復(fù)學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編（上）[C];2011年

6 藍(lán)雁懷;朱小妹;邱甜;張峗健;邱鵬玲;陳天蘭;孫道開(kāi);陸國(guó)平;王藝;;長(zhǎng)程視頻腦電監(jiān)測(cè)在重癥腦損傷患兒預(yù)后判斷中的價(jià)值[A];第三屆CAAE中國(guó)腦電圖和神經(jīng)電生理大會(huì)論文摘要集[C];2012年

7 謝庭鴻;黃曉元;劉衛(wèi)平;龍劍虹;任利成;楊興華;;電擊傷后腦損傷的臨床分析[A];全國(guó)燒傷早期處理專(zhuān)題研討會(huì)論文集[C];2002年

8 賈濟(jì);陳紹洋;;重度腦損傷后神經(jīng)內(nèi)分泌變化的研究進(jìn)展[A];重癥醫(yī)學(xué)——2011[C];2011年

9 彭芳;譚竟華;曾宇東;徐莎;劉燕;夏嬋;李星星;謝鵬;;嬰兒腦損傷早期醫(yī)學(xué)干預(yù)效果分析[A];中國(guó)康復(fù)醫(yī)學(xué)會(huì)全國(guó)運(yùn)動(dòng)療法學(xué)術(shù)會(huì)議暨心腦血管病康復(fù)研討班論文匯編[C];2000年

10 王茂斌;;腦損傷后康復(fù)的進(jìn)展[A];中國(guó)康復(fù)醫(yī)學(xué)會(huì)第五次全國(guó)老年康復(fù)學(xué)術(shù)大會(huì)上海市康復(fù)醫(yī)學(xué)會(huì)成立20周年暨老年康復(fù)診療提高班論文匯編[C];2008年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 ;美領(lǐng)館人員“腦損傷”，調(diào)查需客觀(guān)[N];環(huán)球時(shí)報(bào);2018年

2 ;綠茶可預(yù)防腦損傷[N];新華每日電訊;2001年

3 周密;心臟停跳，怎樣防止大腦受損？[N];新華每日電訊;2005年

4 李春梅;新橋醫(yī)院采用泡泡浴治療腦癱[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2005年

5 本報(bào)記者 黃丹;腦癱患兒早期康復(fù)是關(guān)鍵[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2002年

6 何松明;腦損傷兒一定會(huì)殘疾嗎[N];家庭醫(yī)生報(bào);2007年

7 王有佳;腦損傷可“干細(xì)胞”修復(fù)[N];人民日?qǐng)?bào);2006年

8 第四軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院神經(jīng)外科主任 費(fèi)舟;控制二次腦損傷 腦損傷救治的關(guān)鍵[N];健康報(bào);2012年

9 省兒童醫(yī)院 蔣莎;寶寶“力氣大”提防腦損傷[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2009年

10 王增;大聲說(shuō)話(huà)能治腦損傷[N];衛(wèi)生與生活報(bào);2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 左剛;Resolvin D2對(duì)缺血再灌注后腦損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究[D];蘇州大學(xué);2018年

2 李廷富;腦損傷基因差異表達(dá)與損傷時(shí)間推斷的實(shí)驗(yàn)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2004年

3 殷保兵;急性壞死性胰腺炎腦損傷的發(fā)病機(jī)制以及生長(zhǎng)抑素和生長(zhǎng)激素治療的保護(hù)作用[D];復(fù)旦大學(xué);2004年

4 陳世文;高滲鹽復(fù)合液治療大鼠冷凍性腦損傷及合并休克的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2005年

5 趙亞娟;谷氨酰胺在內(nèi)毒素血癥幼年大鼠腦損傷中保護(hù)作用的研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2006年

6 張永和;外傷性腦損傷后血小板衍化生長(zhǎng)因子的生物學(xué)作用實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);1999年

7 于建云;輕中型腦損傷鼠分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)、認(rèn)知行為障礙的病理學(xué)與中樞膽堿能神經(jīng)機(jī)制研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2007年

8 劉開(kāi)東;神經(jīng)機(jī)械性損傷中腦紅蛋白表達(dá)及作用的研究[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2008年

9 孫青;高遷移率族蛋白1在蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷中的作用研究[D];南京大學(xué);2014年

10 孫永濤;冠脈搭橋術(shù)后認(rèn)知功能障礙的危險(xiǎn)因素及其與腦損傷的相關(guān)性研究[D];山東大學(xué);2017年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 嚴(yán)瑤瑤;鉤藤堿對(duì)腦損傷小鼠早期癲癇的影響[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2019年

2 任亞會(huì);程序性細(xì)胞壞死參與腦損傷后腦水腫的初步研究[D];成都醫(yī)學(xué)院;2019年

3 季家璇;Lats1/p-YAP1通路在大鼠腦外傷后繼發(fā)腦損傷中的作用機(jī)制研究[D];蘇州大學(xué);2018年

4 孫英;右美托咪定對(duì)小兒肝移植術(shù)后腦損傷的影響[D];天津醫(yī)科大學(xué);2018年

5 馬建軍;不同位置腦損傷對(duì)大鼠坐骨神經(jīng)再生的影響[D];承德醫(yī)學(xué)院;2018年

6 施所琴;大黃—黃芩配伍應(yīng)用對(duì)腦損傷早期癲癇的影響[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2018年

7 陳利婷;振幅整合腦電圖評(píng)分聯(lián)合血清神經(jīng)元特異性烯醇化酶在新生兒膽紅素腦損傷早期預(yù)測(cè)中的價(jià)值[D];揚(yáng)州大學(xué);2018年

8 何新澤;腦損傷與他克莫司促進(jìn)周?chē)窠?jīng)再生的對(duì)比研究[D];承德醫(yī)學(xué)院;2017年

9 曾軍;異甘草素通過(guò)促進(jìn)Nrf2抗氧化途徑抑制ROS和（或）NF-κB介導(dǎo)的NLRP3炎癥小體活化減輕實(shí)驗(yàn)性腦出血后早期腦損傷[D];南方醫(yī)科大學(xué);2017年

10 何遠(yuǎn)東;彌漫性腦損傷和二次腦損傷腦代謝型谷氨酸受體1a的表達(dá)及其拮抗劑的作用研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2001年

本文編號(hào)：2749225