【摘要】：創(chuàng)面愈合是一個復(fù)雜的生物學(xué)過程，涉及多種修復(fù)細(xì)胞的增殖、遷移、分化、凋亡等過程，其可分為三個階段即：炎癥反應(yīng)期、細(xì)胞增生期和組織重塑期。修復(fù)細(xì)胞是創(chuàng)面修復(fù)的主體，其生物學(xué)行為是創(chuàng)面愈合研究中的重要科學(xué)問題。研究表明，干細(xì)胞是組織自我更新和再生修復(fù)的細(xì)胞來源，其還通過分泌大量的細(xì)胞因子，促進(jìn)肉芽組織形成、血管再生等修復(fù)過程。以往對表皮干細(xì)胞、毛囊干細(xì)胞與創(chuàng)面愈合的關(guān)系進(jìn)行了較多研究，但對于原位真皮干細(xì)胞在創(chuàng)面愈合過程中的作用尚未完全闡明。 本課題重點研究了小鼠全層皮膚損傷后創(chuàng)面局部真皮干細(xì)胞是否被激活及其在創(chuàng)面修復(fù)中的作用。首先采用BrdU標(biāo)記法分別檢測全層皮膚損傷后創(chuàng)面局部修復(fù)細(xì)胞增殖反應(yīng)的和標(biāo)記滯留細(xì)胞（LRCs）的變化特點；進(jìn)而分離和培養(yǎng)肉芽組織來源真皮干細(xì)胞，并通過與新生鼠真皮細(xì)胞和成年鼠真皮細(xì)胞在增殖能力、集落形成能力及多向誘導(dǎo)分化潛能等方面進(jìn)行對比，研究了肉芽組織來源細(xì)胞的干細(xì)胞相關(guān)生物學(xué)特性；進(jìn)一步通過檢測肉芽組織來源細(xì)胞和成年鼠真皮細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)含量及ROS對肉芽組織來源細(xì)胞集落形成能力及多向誘導(dǎo)分化潛能的影響，探討了ROS對創(chuàng)傷后真皮干細(xì)胞的調(diào)控作用，得到如下結(jié)果和結(jié)論： 1.采用短時間BrdU標(biāo)記快速分裂細(xì)胞(RDCs)的方法檢測了創(chuàng)面局部修復(fù)細(xì)胞增殖反應(yīng)情況，發(fā)現(xiàn)在正常皮膚組織中，僅表皮、毛囊組織中存在少量的RDCs，但在創(chuàng)傷后創(chuàng)面局部的表皮、毛囊和真皮組織均發(fā)生了明顯的細(xì)胞增殖反應(yīng)，表明皮膚創(chuàng)傷后局部表皮、毛囊和真皮組織細(xì)胞參與了創(chuàng)傷修復(fù)。 2.采用連續(xù)BrdU標(biāo)記的方法檢測LRCs，發(fā)現(xiàn)創(chuàng)面愈合后肉芽組織中存在LRCs，而正常的真皮組織中未檢測到LRCs，，在分離被標(biāo)記的肉芽組織來源細(xì)胞后的體外培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，肉芽組織來源細(xì)胞具有集落形成能力，且在形成的集落中也發(fā)現(xiàn)存在LRCs，提示創(chuàng)傷后真皮干細(xì)胞被激活并參與了肉芽組織的形成。 3.通過比較肉芽組織來源細(xì)胞、成年鼠真皮細(xì)胞和新生鼠真皮細(xì)胞的的生物學(xué)特性，發(fā)現(xiàn)肉芽組織來源細(xì)胞較成年鼠真皮細(xì)胞和新生鼠真皮細(xì)胞有更強(qiáng)的增殖能力、集落形成能力和成骨、成脂誘導(dǎo)分化的能力，且表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志CD105，不表達(dá)造血干細(xì)胞標(biāo)志CD45，進(jìn)一步支持創(chuàng)傷后真皮干細(xì)胞被激活并參與組織修復(fù)。 4.通過檢測內(nèi)源性ROS，發(fā)現(xiàn)肉芽組織來源細(xì)胞中ROS水平較正常成年鼠真皮細(xì)胞明顯增高(P0.01)，ROS清除劑NAC作用肉芽組織來源細(xì)胞后，其形成的集落數(shù)和集落的大小均顯著高于對照組(P0.01)，而成脂、成骨分化與對照組相比沒有明顯差異，提示創(chuàng)傷后內(nèi)源性ROS可抑制創(chuàng)面局部真皮干細(xì)胞自我更新能力，但對其分化潛能影響不明顯。
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R641

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本文編號：2576164