【摘要】：研究背景及目的據(jù)統(tǒng)計(jì)有1/3的創(chuàng)傷所致死亡是由失血性休克引起,盡管目前關(guān)于失血性休克病理生理機(jī)制的研究已有很多,但難以避免的急性失血性休克后繼機(jī)體級(jí)聯(lián)損傷的存在,使我們意識(shí)到其生理病理機(jī)制仍需要進(jìn)一步探索完善,藉此尋找新的有效藥物靶標(biāo)和診斷治療手段。本研究應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)高通量技術(shù)篩選創(chuàng)傷性休克的特異性蛋白,探討失血性休克特異性蛋白C3在失血性休克中的作用機(jī)制,以進(jìn)一步闡明失血性休克病理生理機(jī)制,尋找檢測(cè)失血性休克進(jìn)展和機(jī)體損傷程度的有效指標(biāo),探索改善預(yù)后的有效治療標(biāo)靶。 方法采用頸動(dòng)脈放血法建立大鼠失血性休克模型,記錄血壓、心率等血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo),留取血漿和肝臟樣本。應(yīng)用雙向電泳和質(zhì)譜技術(shù)篩選分析失血性休克血漿差異蛋白。應(yīng)用ELISA驗(yàn)證差異蛋白在失血性休克大鼠血漿中的表達(dá)情況。通過(guò)ELISA、 Western blot.免疫組化、免疫熒光、HE染色法檢測(cè)C3在失血性休克大鼠體內(nèi)的表達(dá)分布；通過(guò)ELISA、NBT法、化學(xué)方法等技術(shù)檢測(cè)C3耗竭的失血性休克模型血漿中ALT、AST、SOD、MDA、MT-1、NO和血管中CX43的表達(dá)水平,與血漿中C3表達(dá)水平比較,分析C3對(duì)失血性休克后血管舒縮性反應(yīng)性、血管通透性、機(jī)體氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)和肝臟、血管損傷的影響。進(jìn)一步在同等條件下,給予失血性休克大鼠注入sCR1抑制C3激活,ELISA檢測(cè)上述指標(biāo),MPO法檢測(cè)肝臟中白細(xì)胞浸潤(rùn)程度,石蠟切片HE染色法和TUNEL實(shí)驗(yàn)觀察肝臟和血管損傷凋亡情況,以評(píng)估C3抑制后對(duì)血管舒縮性反應(yīng)性、血管通透性、機(jī)體氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)和組織器官損傷的影響。 結(jié)果(1)失血性血漿蛋白質(zhì)組學(xué)篩選共發(fā)現(xiàn)10個(gè)有意義差異蛋白點(diǎn),鑒定出6個(gè)高表達(dá)蛋白(α-白蛋白、補(bǔ)體C3、血色素結(jié)合蛋白、纖維蛋白原γ鏈、F2凝血酶、角蛋白1)和2個(gè)低表達(dá)蛋白(酪氨酸激酶受體A5亞基1、角蛋白6A)。發(fā)現(xiàn)大鼠發(fā)生失血性休克時(shí),血漿中α-白蛋白、補(bǔ)體C3、血色素結(jié)合蛋白、凝血酶F2明顯高表達(dá)(P0.05)。(2)失血性休克發(fā)生時(shí)補(bǔ)體C3在肝臟和大血管組織的表達(dá)含量明顯升高；廣泛分布位于肝臟和血管內(nèi)皮細(xì)胞中；在肝細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的胞漿中均勻分布,在肝細(xì)胞胞核中大量聚集；肝臟和血管的可見(jiàn)明顯形態(tài)學(xué)學(xué)損傷。(3)C3在血漿中的表達(dá)含量與IL-6、TNF-α、MDA、ALT、AST、NO、ET-1呈正相關(guān),與SOD、CX43與C3呈負(fù)相關(guān)；其中C3與NO、ET-1、CX43、ALT、IL-6具有強(qiáng)相關(guān)性,與SOD、MDA、AST具有中度相關(guān)性。(4)失血性休克后,應(yīng)用sCR1抑制C3激活干預(yù)液體復(fù)蘇后心率和平均動(dòng)脈壓在10min內(nèi)快速恢復(fù)正常,且在復(fù)蘇后一直較平穩(wěn),其心率明顯較HS組、HS+Saline組低(P＜0.05)：平均動(dòng)脈壓在液體復(fù)蘇后基本接近正常對(duì)照組水平。血漿中的IL-6、TNF-α、MDA、ALT、AST、NO、ET-1水平明顯低于單純生理鹽水復(fù)蘇組,SOD水平較之升高；肝臟白細(xì)胞浸潤(rùn)顯著減少,細(xì)胞凋亡明顯減少,肝臟和血管形態(tài)學(xué)損傷同樣明顯減少。 結(jié)論本研究成功篩選出一批失血性休克的差異表達(dá)蛋白,明確了其在外周血中的含量情況,明確了C3在失血性休克機(jī)體中的表達(dá)分布情況,初步闡明了C3作為一種急性期反應(yīng)蛋白在失血性休克中的作用機(jī)制,明確C3在失血性休克時(shí)參與血流動(dòng)力學(xué)、血管舒縮反應(yīng)性、血管通透性、氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)、組織器官損傷等多項(xiàng)機(jī)體反應(yīng)。證實(shí)了通過(guò)sCR1抑制C3在失血性休克早期的活化,可以穩(wěn)定休克后的血壓、心率等血流動(dòng)力學(xué),改善血管舒縮反應(yīng)性,提高休克后血管的反應(yīng)性,降低血管通透性,有效削弱機(jī)體在失血性休克后的過(guò)度炎癥反應(yīng),減弱機(jī)體氧化應(yīng)激。降低休克后對(duì)肝臟和血管的損傷。本研究表明,C3參與了失血性休克病理生理過(guò)程,可作為一種新的失血性休克指標(biāo)監(jiān)測(cè)休克的進(jìn)展情況和機(jī)體損傷程度,抑制C3活化可能是一種有潛在價(jià)值的改善失血性休克預(yù)后的治療手段,為失血性休克的靶向治療研究提供新的思路和方法。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R459.7

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2523935