【摘要】：背景深度燒傷創(chuàng)面的治療,特別是對(duì)于功能部位的治療,一直是燒傷外科領(lǐng)域研究的重點(diǎn)和難點(diǎn)。臨床顯示,大面積深度燒傷患者自體皮源缺乏而導(dǎo)致創(chuàng)面閉合困難,而應(yīng)用無細(xì)胞真皮替代物與自體刃厚皮或培養(yǎng)表皮片復(fù)合移植治療大面積深度燒傷創(chuàng)面不僅解決了創(chuàng)面封閉困難問題,而且還能夠明顯減輕超薄皮片瘢痕增生和攣縮畸形的產(chǎn)生。然而異源性支架材料存在免疫原性且價(jià)格昂貴,難以滿足燒傷患者大面積植皮的需要。近年研究顯示,保留燒傷變性真皮,同時(shí)移植自體刃厚或薄中厚皮片治療深度燒傷創(chuàng)面,術(shù)后移植區(qū)功能及外形恢復(fù)良好,提示燒傷變性皮膚能可逆性恢復(fù)部分真皮功能和形態(tài)的特點(diǎn)。大面積深Ⅱ度燒傷患者切痂術(shù)后丟棄的變性真皮是否可再利用成為本課題研究的重點(diǎn)。 近年,自噬是生命科學(xué)最熱的研究領(lǐng)域,自噬是真核細(xì)胞特有的普遍生命現(xiàn)象,在維持細(xì)胞自我穩(wěn)態(tài)、促進(jìn)細(xì)胞生存方面起重要作用,廣泛參與多種生理和病理過程。研究顯示,溶酶體酶可轉(zhuǎn)移至胞質(zhì)內(nèi)側(cè)甚至分泌到細(xì)胞外降解ECM,同時(shí)細(xì)胞發(fā)生自噬的機(jī)制也與溶酶體酶大量釋放有關(guān)[1],推測(cè)ECM降解產(chǎn)物與細(xì)胞自噬存在某種關(guān)聯(lián),具有細(xì)胞自噬誘導(dǎo)活性。 因此,本研究旨在探討深Ⅱ度燒傷皮膚(DBS)中的ECM降解產(chǎn)物是否具有自噬誘導(dǎo)活性、深Ⅱ度燒傷真皮基質(zhì)(DBDM)的制備方法、組織相容性以及作為真皮替代物修復(fù)深度燒傷創(chuàng)面的可行性。摘要：目的(1)觀察自噬相關(guān)基因Beclin1在大鼠深Ⅱ度燒傷皮膚(DBS)中的表達(dá),初步探討自噬與燒傷皮膚之間的關(guān)系。(2)探討DBDM是否具有自噬誘導(dǎo)活性；并探討利用DBS作為真皮替代物構(gòu)建復(fù)合皮移植模型進(jìn)行修復(fù)創(chuàng)面的可行性。方法(1)16只雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為正常組(對(duì)照組)和燙傷組(實(shí)驗(yàn)組),每組各8只。實(shí)驗(yàn)組建立DBS模型,燙傷后分別于1、3、7d取材。組織學(xué)檢查觀察各組動(dòng)物皮膚全層情況,免疫組化檢測(cè)Beclin1在各組動(dòng)物皮膚的表達(dá),并行圖像處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。(2)真皮支架制作：采用酶消化法[2],實(shí)驗(yàn)組取2只大鼠燙傷24h后皮膚進(jìn)行脫細(xì)胞等處理,制備DBDM;對(duì)照組采用Wistar大鼠正常皮膚制備ADM。①埋植實(shí)驗(yàn)：20只雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為深Ⅱ度燒傷真皮基質(zhì)(DBDM)埋植組(實(shí)驗(yàn)組)和無細(xì)胞真皮基質(zhì)(ADM)埋植組(對(duì)照組),每組10只。各組分別于3d、1w、2w、3w時(shí)取材,組織學(xué)檢查觀察真皮支架內(nèi)細(xì)胞生長(zhǎng)情況,免疫組化檢測(cè)各組各時(shí)間點(diǎn)Beclin1在真皮支架的表達(dá)水平,并行圖像處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。②復(fù)合皮移植實(shí)驗(yàn)：20只雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為深Ⅱ度燒傷真皮基質(zhì)(DBDM)移植組(實(shí)驗(yàn)組)和無細(xì)胞真皮基質(zhì)(ADM)移植組(對(duì)照組),每組10只。取新生24h內(nèi)大鼠乳鼠背部完整皮膚,修薄后與網(wǎng)狀DBDM(實(shí)驗(yàn)組)一次性重疊移植到大鼠背部約2cm×2cm全層皮膚缺損創(chuàng)面,14d后觀察復(fù)合皮生長(zhǎng)情況。對(duì)照組ADM與薄的大鼠乳鼠表皮片重疊進(jìn)行復(fù)合移植,實(shí)驗(yàn)方法同實(shí)驗(yàn)組。結(jié)果(1)Beclin1蛋白在實(shí)驗(yàn)組表達(dá)陽(yáng)性,對(duì)照組表達(dá)陰性,組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)新鮮制備的DBDM呈淺黃白色,質(zhì)地較柔軟,有一定的韌性和伸展性,較ADM弱。鏡下膠原纖維增粗和透明樣變,排列紊亂、疏松,無細(xì)胞、血管和毛囊等成分存在。①埋植實(shí)驗(yàn)：術(shù)后各組大鼠創(chuàng)口周圍皮膚無明顯腫脹及炎性反應(yīng),切口愈合良好,移植物與創(chuàng)面組織愈著緊密。組織學(xué)觀察,DBDM及ADM植入3d時(shí),可見成纖維細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等浸潤(rùn)。植入1w時(shí),各支架內(nèi)可見大量成纖維細(xì)胞侵入、增生,并沿膠原纖維方向分布,新生毛細(xì)血管向移植物內(nèi)部延伸。植入2w、3w時(shí),移植物內(nèi)血管數(shù)量進(jìn)一步增多,并在移植物內(nèi)廣泛分布。免疫組織化學(xué)染色顯示,實(shí)驗(yàn)組Beclin1蛋白的表達(dá)量于1w時(shí)達(dá)到高峰,實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。②復(fù)合皮移植實(shí)驗(yàn)：術(shù)后14d,兩組大鼠及移植物的成活率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),雙層復(fù)合皮與皮下組織緊密連接,深層DBDM或ADM呈粉紅色,未見明顯腫脹及炎性反應(yīng)。與ADM相比,DBDM組移植物較早出現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和成纖維細(xì)胞、毛細(xì)血管長(zhǎng)入；炎性細(xì)胞以中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞為主,新生膠原蛋白沉積較快,纖維排列規(guī)則、致密。結(jié)論(1)Beclin1蛋白在Wistar大鼠燙傷皮膚中的表達(dá)呈陽(yáng)性,推測(cè)自噬參與深Ⅱ度燙傷皮膚的修復(fù)過程。(2)DBDM來源廣泛、制備方法簡(jiǎn)單,移植物生物相容性好,無皮膚燒傷毒素樣反應(yīng),具有增強(qiáng)自噬誘導(dǎo)活性,誘導(dǎo)細(xì)胞自噬清除受損細(xì)胞器,使細(xì)胞免于受到進(jìn)一步損傷及發(fā)生凋亡,為轉(zhuǎn)入修復(fù)階段創(chuàng)造條件,具有恢復(fù)正常結(jié)構(gòu)的潛力,可充當(dāng)自體刃厚皮片的真皮替代物。本研究可為今后臨床改造和利用燒傷皮膚提供新的思路。
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【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R644

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2406564