本文選題：柯里拉京 + RAW264.7細胞��； 參考：《華中科技大學》2014年博士論文

【摘要】：目的細胞模型上研究柯里拉京對TLR4信號通路的作用及其機制。方法：脂多糖(LPS)刺激RAW264.7細胞造成炎癥模型。予以柯里拉京進行干預。CCK8法檢測細胞存活率；實時熒光定量聚合酶鏈反應檢測各組TLR4, MyD88, TRIF, TRAF6的mRNA的表達水平；Western blot測定各組TLR4信號通路中各信號分子蛋白的表達；ELISA法檢測細胞上清中的IL-10, IL-6;結果：1.CCK8法檢測的柯里拉京IC50值是0.25mg/ml;2.柯里拉京干預后,TLR4信號通路中TLR4, MyD88, TRIF, TRAF6的mRNA和蛋白水平,模型組顯著高于正常組(p＜0.01),而柯里拉京處理組顯著低于模型組(p＜0.01)；3.柯里拉京干預后,TLR4信號通路中產生的促炎因子IL-6, IL-1β,模型組顯著高于正常組(p＜0.01),而柯里拉京處理組顯著低于模型組(p＜0.01)；結論：在細胞模型上,柯里拉京可通過抑制TLR4信號通路中TLR4, MyD88, TRIF, TRAF6的表達,從而抑制促炎因子IL-6,IL-1β的釋放。 目的：細胞模型上研究柯里拉京對TLR4-MyD88信號通路的作用及其機制。方法：采用小分子RNA干擾技術沉默TICAM1的表達,脂多糖(LPS)刺激RAW264.7細胞造成炎癥模型。予以柯里拉京進行干預。實時熒光定量聚合酶鏈反應檢測各組TICAMl的表達,及柯里拉京干預后TLR4, TRAF6, MyD88的mRNA的表達水平；結果：1.實時熒光定量聚合酶鏈反應檢測TICAM1siRNA轉染細胞后TICAM1mRNA表達水平,與正常組相比siRNA表達量明顯降低(P0.01);2.柯里拉京干預后,TLR4-MyD88信號通路中TLR4,MyD88, TRAF6的mRNA模型組顯著高于正常組(P＜0.01),而柯里拉京處理組顯著低于模型組(P＜0.01)；結論：在細胞模型上,柯里拉京可抑制TLR4-MyD88信號通路中TLR4, MyD88, TRIF, TRAF6的表達, 目的：動物模型上研究柯里拉京對TLR4信號通路的作用及其機制。方法：脂多糖(LPS)腹腔注射Balb/c雄性小鼠造成膿毒癥模型。予以柯里拉京進行干預。HE染色檢測小鼠肝,脾,肺,腎,結腸及腦組織的病理改變；實時熒光定量聚合酶鏈反應檢測各組TLR4,MyD88,TRIF,TRAF6, HMGB1的mRNA的表達水平；Western blot測定各組TLR4信號通路中各信號分子蛋白的表達；ELISA法檢測細胞上清中的IL-1β,IL-6;結果：1.HE染色病理切片示,模型組小鼠均有不同程度的病理損傷,而柯里拉京處理組,能一定程度上改善各個臟器的炎癥,壞死,水腫等情況；2.柯里拉京干預后,TLR4信號通路中TLR4,MyD88,TRIF,TRAF6, HMGB1的mRNA和蛋白水平,模型組顯著高于正常組(p0.01),而柯里拉京處理組顯著低于模型組(p0.01)；3.柯里拉京干預后,TLR4信號通路中產生的促炎因子IL-6,IL-1β,模型組顯著高于正常組(p0.01),而柯里拉京處理組顯著低于模型組(p0.01)；結論：在動物模型上,柯里拉京可通過抑制TLR4信號通路中TLR4,MyD88,TRIF,TRAF6, HMGB1的表達,從而抑制促炎因子IL-6,IL-1β的釋放。
[Abstract]:Objective to study the effect of Coriragin on TLR4 signaling pathway and its mechanism. Methods: lipopolysaccharide (LPS) stimulated RAW264.7 cells to establish inflammatory model. The cell survival rate was measured by Corilagine intervention. CCK8 method. The expression level of mRNA in TLR4, MyD88, TRIFand TRAF6 was detected by real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction and the expression of each signal molecule protein in TLR4 signal pathway in each group was detected by Western blot. Results: 1. The IC50 value of Coriragin detected by CCK8 method was 0.25 mg / ml ~ (2), and the expression of IL-10 and IL-6 in cell supernatant was detected by Elisa. The mRNA and protein levels of TLR4, MyD88, trif, TRAF6 in the model group were significantly higher than those in the normal group (P < 0.01), but significantly lower in the Coriragin treated group than in the model group (P < 0.01). IL-6 and IL-1 尾 produced in TLR4 signaling pathway after Corilagine intervention were significantly higher in the model group than in the normal group (p < 0.01), but significantly lower in the Coriragin treated group than in the model group. Conclusion: in the cell model, the level of IL-6 and IL-1 尾 in the model group is significantly lower than that in the model group. Coriragin can inhibit the release of IL-6 and IL-1 尾 by inhibiting the expression of TLR4, MyD88, trif, TRAF6 in TLR4 signaling pathway. Aim: to study the effect of Coriragin on TLR4-MyD88 signaling pathway and its mechanism. Methods: small molecular RNA interference technique was used to silence the expression of TICAM1, and lipopolysaccharide (LPS) stimulated RAW264.7 cells to create inflammatory model. Coriragin was given intervention. The expression of TICAMl and the mRNA levels of TLR4, TRAF6 and MyD88 in each group were detected by real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction, and the results showed that the expression level of TLR4, TRAF6 and MyD88 was 1: 1. Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction (FQ-PCR) was used to detect the expression of TICAM1mRNA in TICAM1siRNA transfected cells. Compared with the control group, the expression of siRNA was significantly lower than that of the control group. The expression of TLR4-MyD88 in mRNA model group was significantly higher than that in normal group (P < 0.01), while that in Coriragin treatment group was significantly lower than that in model group (P < 0.01). Conclusion: in cell model, Coriragin can inhibit the expression of TLR4, MyD88, trif, TRAF6 in TLR4-MyD88 signaling pathway. Aim: to study the effect and mechanism of Coriragin on TLR4 signaling pathway in animal models. Methods: Balb/c male mice were injected intraperitoneally with lipopolysaccharide (LPS) to establish septic model. The pathological changes of liver, spleen, lung, kidney, colon and brain of mice were detected by HE staining. Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction (FQ-PCR) was used to detect the expression level of TLR4, MyD88-TRIFTRAF6, and the level of mRNA in HMGB1. The expression of signal molecular proteins in the TLR4 signaling pathway was detected by Western blot and the expression of IL-1 尾 -IL-6 in the supernatant was detected by Elisa. Model group mice have different degrees of pathological injury, while Corilagine treatment group, to some extent, can improve the inflammation, necrosis, edema and other conditions of various organs. 2. The levels of mRNA and protein of TRAF6, HMGB1 in TLR4 / TLR4 signaling pathway were significantly higher in model group than in normal group (P 0.01), but significantly lower in Coriragin treatment group than in model group. IL-6 and IL-1 尾 produced in TLR4 signaling pathway were significantly higher in the model group than in the normal group (P 0.01), while that in the Coriragin treated group was significantly lower than that in the model group. Conclusion: in the animal model, the expression of IL-6 and IL-1 尾 in the TLR4 signaling pathway was significantly lower than that in the control group. Coriragin could inhibit the release of IL-6 and IL-1 尾 by inhibiting the expression of TRIFF6, HMGB1 in the TLR4 signaling pathway.
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R459.7

【共引文獻】

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本文編號：1874157